广西眼镜蛇毒细胞毒素的分离及对人鼻咽癌等细胞抑制作用的研究

目的　探讨广西眼镜蛇毒细胞毒素对人鼻咽癌细胞(CNE)等多种癌细胞株的抑制作用。方法　经SephadexG 5 0 ,CM SepharoseCL 6B层析法从广西眼镜蛇毒中分离纯化获得细胞毒素 (CTX) ,采用MTT检测CTX对癌细胞株体外培养抑制作用 ,探索量效时效关系。结果　从广西眼镜蛇毒中分离到一种细胞毒素单一组分 (CTXCM 5 )对体外培养的人鼻咽癌细胞株 (CNE)、淋巴瘤细胞株 (YAC)、人宫颈癌细胞株 (HELA)和卵巢癌细胞株 (Ho8990 )的抑制有明显的剂量依赖关系 ,作用 48h的IC50 分别为 1 84,0 75 ,1 84和 2 5 9mg·L-1;随作用时间的延长 ,CTXCM 5对CNE细胞株作用最为明显 ,作用 3h和 2 4h的IC50 分别为 4 78和1 0 4mg·L-1。结论　CTXCM 5对体外培养的癌细胞株有较强的抑制作用。     

广西眼镜蛇毒细胞毒素的分离及对人鼻咽癌等细胞抑制作用的研究

目的探讨广西眼镜蛇毒细胞毒素对人鼻咽癌细胞(CNE)等多种癌细胞株的抑制作用.方法经Sephadex G-50,CM-Sepharose CL-6B层析法从广西眼镜蛇毒中分离纯化获得细胞毒素(CTX),采用MTT检测CTX 对癌细胞株体外培养抑制作用,探索量效时效关系.结果从广西眼镜蛇毒中分离到一种细胞毒素单一组分(CTX CM-5)对体外培养的人鼻咽癌细胞株(CNE)、淋巴瘤细胞株(YAC)、人宫颈癌细胞株(HELA)和卵巢癌细胞株(Ho8990)的抑制有明显的剂量依赖关系,作用48 h的IC50分别为1.84,0.75,1.84和2.59 mg·L-1;随作用时间的延长,CTX CM-5对CNE细胞株作用最为明显,作用3h和24 h的IC50分别为4.78和1.04 mg·L-1.结论 CTX CM-5对体外培养的癌细胞株有较强的抑制作用.     

去甲斑蝥素诱导人鼻咽癌细胞CNE1凋亡的实验研究

目的检测去甲斑蝥素对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、凋亡的影响,为临床应用NCTD治疗鼻咽癌细胞提供实验基础。方法体外常规培养CNE1细胞用于实验,经NCTD作用后,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪观察鼻咽癌细胞凋亡、细胞周期。结果 NCTD对鼻咽癌细胞的生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);NCTD可剂量和时间依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡;NCTD可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞周期发生改变,将鼻咽癌细胞阻滞在G2期。结论 NCTD对体外培养的CNE1细胞的生长有明显抑制作用和诱导凋亡的作用。     

薏苡仁提取物体内抑制鼻咽癌细胞生长的作用研究

目的探讨薏苡仁提取物在体内对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将移植人鼻咽癌CNE1细胞的裸鼠随机分为3组:薏苡仁治疗组、空白对照组、环磷酰胺(CTX)治疗组,定期检测裸鼠的体质量及肿瘤体积,给药1个疗程(30d)后解剖获取肿瘤组织,称量瘤体质量量,计算抑瘤率。运用HE染色方法观察药物作用后肿瘤组织细胞形态学的改变。结果动物实验表明,薏苡仁对CNE1裸鼠移植瘤有明显的抑瘤作用,抑瘤率为22.1%。HE染色结果显示,薏苡仁能杀伤鼻咽癌细胞,对肿瘤细胞分裂有抑制作用。结论薏苡仁提取物在体内具有抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的作用。     

SOX1对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响

目的 观察SOXl基因过表达对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体Lipofectamin2000介导的方法,将SOXl基因转入鼻咽癌细胞CNE2和HONE1中,RT-PCR和Western blot法检测转染空载体对照组及转染SOX1过表达组鼻咽癌细胞中SOX1基因的表达,并用MTT法检测两组鼻咽癌细胞对化疗药物的敏感性.结果 RT-PCR和Western blot法表明,转染过表达组鼻咽癌细胞的SOX1基因的mRNA及蛋白表达水平均较对照组明显增强,MTT法结果表明过表达SOX1的鼻咽癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性显著提高（P＜0.05）.结论 转染外源性SOX1并使之在鼻咽癌细胞中过表达,能提高CNE2和HONE1细胞对化疗药物的敏感性.     

广西产尖吻蝮蛇蛇毒细胞毒素的纯化与活性鉴定

采用SephadexG50,Source30Q及phenylsepharoseHP柱层析从广西五步蛇蛇毒分离纯化出一种电泳纯细胞毒素I3H3,分子质量为36ku。I3H3对体外培养的人癌细胞有较强抑制和杀伤作用。用溴化二苯四偶氮盐比色法检测其对体外培养的人癌细胞的细胞毒作用,探索量效关系。其对体外培养的人肺癌细胞株(A549),人胃癌细胞株(BGC)和人鼻咽癌细胞株(KB)的抑制作用呈明显剂量依赖关系,作用24h的IC50分别为27.75,26.90和64.46μg/m1。     

芬太尼抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制研究

目的：通过选择10 nmol/L芬太尼作用于鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，研究芬太尼对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。 方法：取对数生长期的鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，选择10 nmol/L芬太尼分别作用于鼻咽癌细胞系30分钟和1小时，Western blot检测p-Src和Src表达，Transwell检测细胞迁移能力；构建Src过表达质粒，转染鼻咽癌细胞系，观察鼻咽癌细胞形态，检测细胞的迁移能力。 结果：10 nmol/L芬太尼处理鼻咽癌细胞CNE2和HONE1 48小时后，细胞呈现出类间质向上皮转化的形态特征，同时，与对照组相比，加入芬太尼处理组的鼻咽癌细胞其迁移能力显著降低；应用芬太尼分别处理鼻咽癌细胞30分钟和1小时后，p-Src水平显著下调；此外，与转染空载体质粒的对照组相比，过表达Src的细胞迁移能力明显增强，而在过表达Src的细胞中同时联合芬太尼处理后，细胞的迁移能力没有被抑制。 结论：芬太尼可能通过抑制Src通路活化抑制鼻咽癌细胞侵袭转移。     

神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　了解第二信使神经酰胺信号转导对鼻咽癌细胞生长的影响。方法　采用MTT法检测神经酰胺对鼻咽癌细胞株 (CNE 2 )增殖的抑制作用。光镜观察、荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡改变。Westernblot法检测p2 1WAF1的表达。结果　神经酰胺在 6 2 5、12 5、2 5、5 0 μm浓度下 ,对CNE 2细胞生长有明显的抑制作用 ,流式细胞仪检测发现亚G1峰出现 ,荧光染色可见核荧光强度增加、核片段化和凋亡小体。p2 1WAF1蛋白表达明显上调。结论　神经酰胺能诱导鼻咽癌细胞株CNE 2凋亡 ,且上调 p2 1WAF1蛋白表达。p2 1WAF1可能是神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡中起作用的因素之一。     

PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响及其机制探讨

目的　探讨PIAsxα 对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法　采用实时定量PCR,流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα 在鼻咽癌组织中的表达情况,PIAsxα 对鼻咽癌细胞系CNE1 凋亡和cyclin D、CDK 表达及其成瘤能力的影响。结果　鼻咽癌组织中PIAsxα mRNA 的表达水平显著低于邻近正常鼻咽组织。过表达PIAsxα 的CNE1 细胞凋亡率及G2/M 期细胞比例均明显增高,cyclin D1、cyclin D3、CDK4、CDK6 和CDK8 的mRNA 表达均显著降低且在裸鼠体内的成瘤能力亦受到抑制。结论　PIAsxα 的表达下调可能通过增加cyclin D 和CDK 的表达,抑制鼻咽癌细胞的凋亡,促进鼻咽癌的发生和发展。     

达沙替尼体外抗鼻咽癌细胞增殖与转移的作用

目的SRC作为酪氨酸蛋白激酶在多种实体肿瘤中存在高表达,通过激活RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路促进肿瘤细胞的生长与增殖,并通过激活FAK促进肿瘤细胞的转移。此外,SRC还参与了EGFR抑制剂耐药的发生。本研究旨在研究SRC的抑制剂达沙替尼在体外对鼻咽癌细胞的抑制作用。方法采用M1Tr方法绘制细胞生长曲线,并计算达沙替尼对鼻咽癌细胞的半数抑制浓度（IC50值）;PI/AnnexinV双染法检测达沙替尼诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用;WesternBlot检测达沙替尼引起鼻咽癌细胞中信号通路的改变;Transwell实验检测达沙替尼对鼻咽癌细胞迁移的影响。结果达沙替尼能明显在体外抑制鼻咽癌细胞的增殖,诱导鼻咽癌细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性;应用达沙替尼处理CNE2后发现,能明显抑制RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路活性表现为phospho-AKT、Phospho．MEK、Phospho-ERK的表达水平明显减低;达沙替尼还能明显抑制CNE2的迁移能力和Phospho-FAK的表达水平。结论SRC的抑制剂达沙替尼能在体外明显抑制鼻咽癌细胞中RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路的活性和FAK蛋白的表达,进一步抑制鼻咽癌细胞的增殖与转移,促进细胞凋亡。     

内源性细胞因子对鼻咽癌细胞体外移动效果及其特征性差异蛋白质组的改变

目的 分析转化生长因子α(Transforing growth factorα,TGF-α)对人体鼻咽癌细胞株CNE2特征性差异蛋白质组的影响,研究并探讨表皮生长因子受体(EGFR)在人鼻咽癌中的作用信号途径.方法 将人鼻咽癌CNE2细胞分为两组,以TGF-α作为配体从而激活EGFR信号通路,有TGF-α作用的为观察组,无TGF-α作用的为对照组,通过无血清细胞培养法对其进行培养24h,利用比较蛋白质组学的方法对两组细胞蛋白质表达谱的差异进行分析,鉴定两组特征性差异蛋白质.结果 通过双向凝胶电泳以及基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术验证得到包括Triosephosphate isomerase、EF-Tu precursor、Nudeoside-diphosphate kinase、Hemoglobin beta chain、Annexin A1等15种特征性差异蛋白在观察组及对照组中存在差异,它们在信号转导、鼻咽癌细胞的凋亡、侵袭中扮演着重要作用.结论 EGFR可能是通过以上特征性差异蛋白所介导的信号转导从而发挥作用,促进了鼻咽癌细胞的凋亡、侵袭等体外移动效果的改变.     

人鼻咽癌细胞CNE_2对各种抗肿瘤药敏感性试验

目的 :了解人鼻咽癌细胞CNE2 对各种抗肿瘤化疗药的敏感性。方法 :体外噻唑蓝还原 (MTT)试验法。结果 :1 3种抗肿瘤药对CNE2 细胞均有明显的杀伤作用 ,其中有 1 0种抗肿瘤药的半数抑制浓度 (IC50 )在 2 0 μg/ml以下 ,另 3种药的IC50 为 2 7.3～ 53.91 μg/ml。结论 :人鼻咽癌细胞CNE2 对临床应用的各类抗肿瘤药是敏感的。     

敲低 Ⅰ型胶原 α1链基因抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 研究Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法 该研究于2017年9月至2018年12月完成,实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测COL1A1在鼻咽癌(C666-1、CNE1、CNE2)细胞系中的表达量;CNE1细胞分m为对照组、阴性对照(si-NC组)、敲低COL1A1(si-COL1A1)组,通过Lipofectamine 2000将siRNA COL1A1质粒转染至鼻咽癌CNE1细胞中,对照组细胞正常培养,si-NC组细胞转染阴性对照;qPCR和Western blotting检测转染效果,噻唑蓝(MTT)、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭、迁移;Western blotting检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)水平.结果 COL1A1 mRNA[(3.565±0.341)(4.253±0.410)(3.968±0.378)]和蛋白表达量[(2.214±0.216)(3.152±0.305)(2.519±0.221)]在鼻咽癌(C666-1、CNE1、CNE2)细胞系中表达量增加(P<0.05);CNE1细胞转染siRNA COL1A1质粒能显著下调COL1A1 mRNA(0.352±0.045)和蛋白表达量(0.245±0.232)(P<0.05);敲低COL1A1的表达量抑制CNE1细胞增殖(0.536±0.059)(0.665±0.067)(0.893±0.081)(P<0.05),降低其侵袭(52.895±5.635)、迁移(113.254±13.279)能力(P<0.05),上调E-cadherin蛋白水平(2.152±0.223)(P<0.05),下调Vimentin(0.362±0.045)、N-cadherin(0.423±0.043)蛋白水平(P<0.05).结论 COL1A1可能通过抑制上皮细胞间充质化(EMT)促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移.     

G250-DC-CIK细胞协同索拉菲尼对肾癌细胞的杀伤作用

目的探讨G250-DC-CIK细胞协同索拉菲尼对肾癌细胞的杀伤作用,从而探讨肾癌的新的治疗方法。方法制备出DC、CIK细胞后共培养诱导产生DC-CIK、DC-CIK-G250细胞;将实验分组分为空白组,靶对照组,效应对照组,实验组四类组别共8组。每组设3个复孔,比较各组对肾癌细胞的杀伤作用,数据进行统计学分析。结果随着效靶比增加,CIK细胞对人肾癌细胞杀伤作用增强,效靶比20∶1时杀伤作用高于效靶比5∶1时(P<0.01)。在同一效靶比下,DC-CIK组对人肾癌细胞的杀伤率则明显高于CIK组(P<0.01)。DC-ClK-G250组对ACHN细胞的杀伤率明显高于CIK细胞和DC-CIK细胞,效靶比为20∶1时,达到90.2%。结论免疫治疗结合药物靶向治疗作为一种新方法,在临床肿瘤治疗上具有广阔前景。     

辛夷增强鼻咽癌细胞对顺铂敏感性的研究

目的 为了增强顺铂对鼻咽癌细胞(CNE2)的细胞毒作用,为临床化疗提供理论依据.方法 通过Western-Blot检测辛夷对CNE2细胞内p38活性的影响,利用MTT检测辛夷对CNE2细胞生长的影响及辛夷对顺铂的细胞毒作用的影响.结果 Western-Blot结果显示辛夷能够激活CNE2内p38,随辛夷浓度的增强,p3...     

TPM1在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的观察TPM1基因的表达与鼻咽癌（NPC）的关系。方法采用实时定量rt-PCR技术检测TPM1基因在NPC细胞株（CNE1、CNE2、58F）和鼻咽上皮细胞株（NP69）中的表达;采用组织芯片技术通过免疫组化检测TPM1在124例恶性鼻咽癌肿瘤、31例对应的癌旁正常组织和12例正常鼻咽黏膜组织的表达。结果 TPM1 mRNA在NP69中表达水平较高,而在NPC细胞株中表达水平显著下降。正常鼻咽黏膜及癌旁组织中TPM1蛋白染色阳性表达率约为65.1%（28/43）;而在鼻咽癌组织中阳性表达率约为34.7%（43/124）;TPM1蛋白表达水平与肿瘤的侵犯范围（T）呈负相关（P〈0.05）,与颈淋巴结转移（N）无关（P〉0.05）。结论 TPM1基因表达的抑制可能参与鼻咽癌的发生。     

二烯丙基二硫下调cyclin D1和CDK4的表达诱导人鼻咽癌CNE2细胞G_1期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测DADS对CNE2细胞增殖抑制作用;流式细胞术分析DADS对CNE2细胞周期分布的影响;运用RT-PCR和Western blot方法分析DADS作用CNE2细胞后,cyclin D1和CDK4的表达变化。结果 MTT结果显示,不同浓度DADS(90、140、240、400μmol·L-1)处理CNE2细胞48h后,生长抑制率分别为4.0%、13.8%、25.8%、51.2%;流式细胞术分析显示,DADS阻滞CNE2细胞于G1期,并呈浓度依赖性;RT-PCR和Western blot结果表明,细胞周期调控基因cyclinD1、CDK4表达下调。结论 DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用与其阻滞细胞G1期有关,并且可能是通过抑制cyclin D1、CDK4的表达使CNE2细胞阻滞于G1期。     

减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨高表达甲硫氨酸酶减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及其机制研究。方法通过甲硫氨酸限制培养,检测对人鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2细胞增殖、迁移能力、克隆形成率以及细胞周期凋亡的影响;将SGN1与鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2共培养,观察其增殖情况;构建5-8F人鼻咽癌细胞系皮下移植瘤模型,观察SGN1对体内鼻咽癌移植瘤的抑制作用;结果甲硫氨酸限制显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力、单克隆形成以及阻滞细胞周期G 2/M期并诱导细胞发生凋亡。SGN1能抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡,体内实验结果表明SGN1治疗后,小鼠皮下移植瘤生长受到抑制(P<0.05)。结论SGN1可促进鼻咽癌细胞发生凋亡且抑制肿瘤细胞迁移,为临床治疗提供一个新的治疗策略。     

茶多酚对人鼻咽癌细胞系放射增敏机制的实验观察

目的探讨茶多酚对鼻咽癌细胞生长的抑制,及对放疗增敏作用机制的观察。方法体外培养鼻咽癌CNE-2细胞系,分单纯放疗组和放疗加茶多酚组,通过MTT（四唑蓝比色试验）法观察组间细胞生长的抑制情况,通过流式细胞仪检测细胞周期变化,通过电子显微镜观察细胞凋亡情况。结果 MTT法显示与单纯放疗组相比,放疗加茶多酚组,随着茶多酚浓度的增高和作用时间的延长对鼻咽癌细胞生长的抑制也逐渐增加;流式细胞仪结果显示放疗加茶多酚组使G2/M期的细胞减少,提示放疗杀伤了更多的处于G2/M期的细胞;电子显微镜观察细胞凋亡超微结构显示放疗加茶多酚组能较早的诱导鼻咽癌细胞产生凋亡小体。结论茶多酚在体外试验中显示,其对鼻咽癌细胞系CNE-2的放疗有增敏作用。     

Integrinβ_3与鼻咽癌CNE细胞放疗敏感性的关系研究

目的探讨黏附分子integrinβ3对人鼻咽癌细胞系CNE的放疗敏感性的作用,进而初步探讨其可能机制。方法采用三维培养方法获得CNE细胞团簇(multicellular spheroids,MCS);血球计数器计数法比较阻断integrinβ3作用前后CNE MCS的放射敏感性;流式细胞术检测integrinβ3表达和细胞凋亡。结果 (1)成功建立CNE MCS;(2)在一定辐射剂量范围内,CNE MCS中integrinβ3表达量随着辐射剂量的增加而增加;(3)阻断integrinβ3的作用后,CNE MCS的放疗敏感性增加,细胞凋亡率上调。结论黏附分子integrinβ3的表达水平影响CNE MCS的放射敏感性,这可能与integrinβ3抑制凋亡相关。