人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125 TRFIA试剂盒。对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10～600U／ml,分析灵敏度为1．07U／ml，批内、批间的精密度分别为4．5％～8．1％，6．9％～11．5％。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U／ml。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测，其相关系数为0．939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)时间分辨免疫荧光分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨免疫荧光分析技术(TRFIA)建立血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)的检测试剂。方法采用双抗体夹心法建立血清HE4-TRFIA检测试剂并对试剂的各项指标进行评价。结果 HE4-TRFIA检测试剂的灵敏度为0.73 pmol/L,测量范围为0.73~1 000 pmol/L,分析内和分析间的精密度分别为4.6%~7.5%和8.3%~14.4%。与CA15-3、CEA、AFP、HBsAg和CA125无交叉反应。317份正常女性血清标本测试结果提示本试剂的正常参考值范围是0~90 pmol/L。与进口的同类试剂检测,检测结果的相关系数R2为0.976。结论本HE4-TRFIA检测试剂各项指标均能达到临床检测要求,可望替代国外同类产品用于临床检测。     

超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:血清超敏C-反应蛋白(CRP)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法的建立. 方法: 采用双抗体夹心法检测血清CRP水平(1株抗CRP的单抗用于包被微孔板,另1株抗CRP的单抗用于Eu3 标记). 结果: TRFIA的线性测量范围为1～1000 mg/L,灵敏度为0.06 mg/L,批内和批间精密度分别为4.0%～7.2%,6.7%～10.8%. 与人IgG和白蛋白未见明显的交叉反应. 109份血清标本用本方法与国外试剂盒同时检测,其相关系数为0.916. 结论: CRP-TRFIA各项指标均达到临床检测要求,可替代国外产品试剂盒,用于临床血清CRP的测定.     

人血清补体C3、C4定时散射比浊分析检测试剂的研制

目的 建立人血清补体C3、C4定时散射比浊分析方法.方法 采用定时散射比浊分析法检测临床血清标本,并对试剂的各项性能指标进行评价.结果 补体C3试剂盒的测定范围为0.945～1.776 g/L,灵敏度为0.022 g/L,批内批间的精密度分别为2.5%～4.8%,5.4%～7.1%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、57 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用自制试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.985;补体C4试剂盒的测定范围为0.096～0.435 g/L,灵敏度为0.0014 g/L,批内批间的精密度分别为1.8%～2.2%,3.8%～5.2%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、24 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用本试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.991.结论 补体C3、C4散射比浊试剂盒各项指标均达到临床检测要求,与Dade Behring同类试剂测定结果有较好的相关性,在临床上有极大的应用前景,有望替代国外同类产品试剂盒.     

乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%～7.8%,6.9%～8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的 建立血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法.方法 采用双抗体夹心一步法建立游离β-HCG试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的可测范围为3～200 ng/mL,灵敏度为0.12 ng/mL,CV分别为4.23%和5.73%,与hLH、hFSH、hTSH的交叉反应低,与2000 U/L的hCG的交叉反应结果小于100 ng/ml.51份血样用本试剂盒与国外同类试剂同时检测,其相关系数为0.95.结论 时间分辨荧光免疫分析法是目前血清游离β-HCG检测中最灵敏的方法.该分析法稳定性好,具有很好的应用前景.     

CA50时间分辨荧光免疫分析法与免疫放射分析法的对比研究

目的:比较时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和免疫放射分析法(IRMA)检测糖类抗原CA50的优势。方法:用TRFIA和IRMA分别测定肿瘤和正常对照血清标本中CA50含量并对其测定结果和相关性进行分析。结果:160例患者血清TRFIA结果为(20.55±30.82)U/ml,IRMA结果为(31.49±75.59)U/ml,相关系数r=0.928;88例正常对照组TRFIA测定值为(3.12±5.9)U/ml,IRMA测定值为(8.11±9.5)U/ml,r=0.976。结论:TRFIA与IRMA检测CA50两种方法具有较好的相关性。TRFIA试剂稳定性好,有效期长,无放射性污染,更有利于临床大批量检测的需要,值得进一步研究和推广。     

CK-MB时间分辨荧光免疫分析的建立

目的: 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术,建立人血清CK-MB的快速定量检测方法. 方法: 采用双抗体夹心法(1株抗CK-MB的单抗用于包被微孔板,另1株抗CK-MB的单抗用于铕标记)建立CK-MB TRFIA. 结果: CK-MB TRFIA的线性测量范围为5～400 μg/L, 分析的灵敏度为0.24 μg/L,批内和批间的变异系数分别为4.9%～7.3%和8.4%～11.7%. 与CK-MM和CK-BB均无交叉反应. 将82份血清标本用本法与化学发光试剂盒同时检测,其相关系数为0.895. 结论: CK-MB TRFIA的各项指标均达到临床检测的要求,可用于临床血清CK-MB水平的测定.     

Detection of SARS-associated coronavirus N protein by time-resolved fluoroimmunoassay]

OBJECTIVE: To develop a method for quantitative detection of severe acute respiratory syndrome (SARS)-associated coronavirus (SARS-CoV) N protein by timed-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA). METHODS: Using a monoclonal antibody (mAb) against SARS-CoV N protein, screened by SARS-CoV N protein and matching experiment, a method for quantitative detection of SARS-CoV N protein by TRFIA was established on the basis of double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and evaluated against the ELISA kit. RESULT: The measurement range of the assay was 0.02-150 ng/ml with a sensitivity of 0.02 ng/ml, the coefficient of variability within runs of 3.3%;-6.2%;, and coefficient of variability between days of 5.3%;-9.6%;. The results of detection were consistent between ELISA and TRFIA. CONCLUSION: TRFIA is a new, sensitive and specific immunoassay for detecting SARS N protein with potential value in clinical applications.     

应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究

目的 建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。方法 采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较。结果 该法的测量范围为(0.02~150)ng/ml,灵敏度为0.02ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3~6.2)%和(5.3~9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoVN蛋白情况比较的结果一致。结论 本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值。     

CA125、CA724和CEA联合检测在卵巢癌诊断中的价值

目的探讨联合检测肿瘤标志物CA125、CA724、和CEA在卵巢癌诊断、疗效及预后判断中的价值。方法用电化学发光法检测卵巢癌患者血清中CA125、CA724、和CEA的含量,分析单独检测与联合检测的敏感性有无统计学差异,分析各项指标与卵巢癌诊断、疗效及预后判断的相关性。结果卵巢癌患者CA125、CA724、和CEA水平分别为(226.20士163.70)U/ml,(12.28士10.22)U/ml,(11.14士4.81)U/ml;卵巢良性肿瘤患者分别为(34.10士13.49)U/ml,(5.06士5.17)U/ml,(3.86士2.44)U/ml;健康人群分别为(13.98士5.88)U/ml,(2.17士1.95)U/ml,(2.31士1.52)U/ml。CA125、CA724和CEA单独及联合检测对卵巢癌诊断的敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。术前、术后卵巢癌患者血清CA125,CA724,CEA阳性例数比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论血清CA125、CA724和CEA联合检测可显著提高对卵巢癌检测的敏感性,可提高卵巢癌的阳性检出率。     

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。     

联合检测AFP，CRP，CA19-9在原发性肝癌诊断中的临床意义

目的评价联合检测AFP,CBP,CA19-9在原发性肝癌诊断中的临床意义。方法本研究针对44例原发性肝癌患者及28例健康体检者,进行血清AFP,CBP,CA19-9检测,经电化学发光免疫分析检测血清AFP,CRP,CA19-9水平。结果（1）原发性肝癌患者的血清AFP,CRP,CA199水平分别为279ng／ml、292mg／L及1238U／ml,与健康体检者的2．8ng／ml、j5mg／L及129U／ml相比均有显著差异（l=6.1^2、7546、19762,p〈o05）;（2）血清AFP,CP,,P,CAt9-9联合检测阳性率为977％,显著高于单独检测阳性率（659％、727％、68 2％,x^2－8236、6035、8004,p〈o05）。结论联合检测AFP,CBP,CA19-9有助于原发性肝癌的早期诊断,值得临床上推广应用。     

脑脊液肿瘤标志物医学参考值的建立

目的 建立脑脊液肿瘤标志物医学参考值范围.方法 共110例除外原发肿瘤及脑膜癌病患者,采用罗氏E170全自动免疫分析仪及双抗体夹心法分别检测上述患者脑脊液癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、癌抗原15-3(CA15-3)、糖链抗原19-9(CA19-9)、癌抗原72-4(CA72-4)、人细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、甲胎蛋白(AFP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的含量.结果 (1)脑脊液肿瘤标志物的95%医学参考值范围为:CEA<0.573 μg/L、CA125<2.591 U/ml、CA15-3<2.045 U/ml、CA19-9<2.272 U/ml、CA72-4<1.252 U/ml、CYFRA21-1<1.44 ng/ml、AFP<0.968 μg/L、NSE<57.666.g/ml、SCC<0.5μg/L、HCG<0.769 U/L.(2)脑脊液肿瘤标志物的含量与年龄无相关性(P>0.05).(3)性别对脑脊液肿瘤标志物的含量无影响(P>0.05).结论 建立了脑脊液肿瘤标志物CEA、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CYFRA21-1、AFP、NSE、SCC和HCG的医学参考值范围.     

多种肿瘤标志物蛋白质芯片在原发性肝癌检测中的应用

目的: 研究多种肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统(C12)12种肿瘤标志物的联合检测在原发性肝癌诊断中的价值。方法: 用C12定量检测128例原发性肝癌患者、23例肝硬化患者和98名正常人血清的12种常见的肿瘤标志物,包括糖链抗原125(CA 125)、血清铁蛋白(Ferritin)、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原15-3(CA15-3)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖链抗原242(CA242)、前列腺特异性抗原(PSA)、游离前列腺特异性抗原(Free-PSA)、人类生长激素(HGH)、人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)。结果: 通过多指标联合检测,128例原发性肝癌患者血清肿瘤标志物中有112例肿瘤标志物阳性,灵敏度从AF P单指标测定的58.6%提高到87.5%,特异性达83.5%;ferritin阳性率达41.4%,原发性肝癌患者血清中β-hCG、NSE、PSA、HGH、CA19-9、CA125、CEA、AF P、CA15-3、CA242与正常对照组和肝硬化组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论: 联合检测与传统的单指标检测相比灵敏度大大提高。     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.