软组织肿瘤的比较基因组杂交研究进展

比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)是1992年建立起来的重大分子细胞遗传学分析技术,它在对整个基因组DNA拷贝数变异的检测方面是一种有效的方法。通过CGH检测,可找出染色体DNA拷贝数的变异特点,即基因拷贝数的扩增或丢失,从而确定相关的癌基因和抑癌基因所在的区域,为探讨肿瘤的发病机制提供依据。在过去的十几年中,用CGH对各种软组织肿瘤进行研究,已探测到了各种各样的有不同程度特异性的基因组的不平衡性,不仅开辟了探测各种癌症相关基因的新途径,并且找到了一些与临床相关的基因改变,可用于肿瘤的发生、发展、鉴别诊断、预后以及治疗等研究。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c—erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交（FISH）与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织，抽提收集样品基因组DNA并扩增c—erbB-2的特异序列构建转化子，以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增，并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增，而良性与恶性组织中有不同程度的扩增，基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断，且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

分子细胞遗传学技术在血液病中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因，传统的细胞遗传学显带技术的染色体核型分析费时、费力，敏感性和特异性差，特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难。荧光原位杂交（FISH）、比较基因组杂交（CGH）和多色荧光原位杂交技术包括多重FISH（M—FISH）、光谱核型分析（SKY）等分予细胞遗传学技术克服了传统细胞遗传学缺陷，是对传统核型分析的有力补充。本文对上述分子细胞遗传学技术在血液病中的应用作一综述。     

淋巴瘤比较基因组杂交研究

目的评价比较基因组杂交（CGH）技术在淋巴瘤研究中的应用价值。方法采用CGH技术检测20例淋巴瘤患者核型异常，部分病例与核型分析比较。结果20例淋巴瘤患者CGH核型异常检出率为60％。8例进行常规核型分析的患者，CGH检测出4例常规核型分析未发现的异常。8例弥漫大B细胞淋巴瘤5例发现染色体拷贝数改变，其中3例发现13号染色体长臂扩增。5例滤泡性淋巴瘤中3例分别检测出7q11-21和15c11-14扩增和18号三体。4例小淋巴细胞淋巴瘤中1例6q16—25缺失，1例发现复杂核型异常：1p21—23扩增伴有2p12-ter，9p13-ter，10p13-ter缺失。结论淋巴瘤患者存在多种染色体异常，CGH是一有用的分析淋巴瘤核型异常的分子细胞遗传学工具.     

DNA甲基化异常与皮肤肿瘤

DNA甲基化（DNA methylation）异常主要指基因组中CpG岛发生甲基化修饰,引起基因表达异常。近几年的研究表明,DNA甲基化异常与肿瘤的发生关系密切。其主要的致癌机制为：抑癌基因启动子区被异常甲基化导致基因表达沉默进而导致肿瘤的发生;细胞周期调控基因甲基化异常致使细胞调控周期紊乱使得肿瘤细胞增殖过速;肿瘤侵袭相关基因甲基化异常致使肿瘤扩散转移以及DNA损伤修复基因异常甲基化使得肿瘤的发生机率增加。     

PCR-反向微孔板杂交法检测医学真菌初步应用

目的通过建立PCR-反向微孔板杂交法鉴定临床常见的致病真菌，为临床治疗提供可靠依据。方法应用通用引物对真菌ERG11基因的保守序列进行扩增，扩增片段包被于微孔板中，再将真菌特异性引物与之杂交，经漂洗后显色，读取450nm处吸光度值判断结果。结果8种真菌特异性探针不与其他种的真菌、细菌和人类DNA分子杂交，而只和其对应的真菌DNA扩增产物反应，呈现阳性杂交结果。55例临床血液病、肿瘤等患者的血液、脑脊液及痰等标本分别用PCR一反向微孔板杂交法和真菌培养法（API20C）鉴定，2种方法的结果基本一致（阳性率分别为34．5％和30．9％）。结论PCR-反向微孔板杂交法可用于临床不同标本致病真菌的检测。     

array-CGH在产前诊断染色体疾病中的应用

摘要: 微阵列比较基因组杂交技术（array-based comparative genomic hybridization, array-CGH）结合了比较基因组杂交技术（CGH）、微阵列芯片技术（micro-array）的优势,在分子遗传学中广泛应用于全基因组水平的拷贝数分析。array-CGH 在产前诊断染色体疾病中的应用相比于传统的细胞遗传学核型分析技术以及荧光原位杂交技术（FISH）、多重荧光定量PCR（QF-PCR）、多重连接探针扩增技术（MLPA）等分子遗传学技术具有高通量、高分辨、高灵敏度、操作自动化等优势;能够检测出相当一部分常规核型分析技术不易发现的染色体微缺失和微重复综合征,以及亚端粒或者其他不平衡的染色体重排。目前用array-CGH进行全基因组扫描进行产前诊断,判断和评估所检出的拷贝数变异（CNVs）的临床意义有一定难度。对不同位点CNVs出现频率及临床意义研究可能会是近期研究热点之一。     

一种改良的人DNA微量快速检验技术

目的 探索一种以口腔粘膜脱落细胞为材料的安全、高效、低成本、敏感性高的人DNA微量快速检测方法。方法 采用从漱口液或棉签擦拭口腔粘膜获取脱落细胞,应用混合树脂（Chelex100）煮沸沉淀法提取DNA;用PCR分别对线粒体特异性DNA片断和基因组中的特定基因进行扩增检测。结果 通过对线粒体DNA中440 bp的非编码片段和染色体基因组中220 bp的乙醛脱氢酶DNA片段进行扩增,结果显示,从漱口液脱落细胞提取的DNA中可以稳定地扩增出上述两种DNA片断。结论 建立了一种改良的人口腔粘膜脱落细胞DNA微量快速检验技术。该法取样方便,DNA样品获取量较大,一次取样可同时进行多项线粒体和基因组标志DNA片段的快速PCR检测。     

寡核苷酸DNA芯片用于ABO血型基因分型的研究

目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚／氯仿法提取标准血样基因组DNA，在ABO座位的外显子6和7区域各设计一对引物，经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针，将探针固定在APS－PDC法制作的DNA芯片上，用标记的PCR产物与之杂交，扫描仪对杂交结果进行扫描，Imagene软件对杂交图象进行分析。结果 本实验共检测了100份已知血型血样的ABO基因型，结果证明本实验研制的ABO基因分型芯片快速、准确、灵敏。结论 寡核苷酸DNA芯片用于ABO的基因分型与其他方法相比更具有灵敏、直观、高通量和集成化的优势。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c-erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交(FISH)与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织,抽提收集样品基因组DNA并扩增c-erbB-2的特异序列构建转化子,以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增,并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增,而良性与恶性组织中有不同程度的扩增,基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断,且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

应用原位杂交技术比较肺腺癌和肺鳞癌的内在分子机制

目的分析肺腺癌及肺鳞癌肿瘤中染色体异常变化和基因组的改变。探讨肺腺癌及肺鳞癌细胞遗传物质的改变，揭示这两种NSCLC主要亚型发生发展的内在本质及其与临床特征之间的关系。方法应用M—FISH技术，检测肺腺癌及肺鳞癌细胞株各1株，观察其染色体数目及结构畸变情况，应用CGH技术对80例肺腺癌组织80例肺鳞癌组织中所提取的全基因组DNA进行检测，比较这两种类型的NSCLC全基因组的变化。结果M-FISH结果显示肺腺癌及肺鳞癌细胞中存在许多复杂的染色体重排，其中5、6、11、12、17号染色体最频繁参于染色体间的易位。CGH发现，在160例肺癌标本基因组中，最常见的扩增区域是1q，2P，3q，5P，5q，7p，8q，11q，12q，14q，16P，17P，19P，20q，21q，22q。最常见的缺失区域是2q，3P，4P，5q，7q，8P，9P，13q，14q，17P。在肺腺癌中最常见的扩增位点是16p13，阳性率达50％，而肺鳞癌中最常见的扩增位点是17q21（45％），并且这两个位点的变异在肺腺癌和肺鳞癌之间有着显著性的差异（P〈0．05）。结论M-FISH和CGH技术是研究肺癌基因组变化的强有力的工具，本实验中发现的基因改变可能代表了与肺腺癌及肺鳞癌特有的病理，诊断相关和候选基因。     

PTEN蛋白在急性白血病中的表达及其与S期激酶相关蛋白2、血管内皮生长因子的相关性研究

抑癌基因的失活和癌基因的激活与肿瘤的发生、发展密切相关。PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有脂质磷酸酶活性的抑癌基因，S期激酶相关蛋白2（SKP2）是新近发现的一种癌基因，血管内皮生长因子（VEGF）是目前研究较为普遍的癌基因，它们的异常表达与人类大多数肿瘤的发生、发展关系密切。目前，已有PTEN基因、SKP2基因及VEGF基因在急性白血病（AL）细胞中表达异常的报道。我们应用细胞免疫化学染色方法检测RTEN蛋白在AL患者骨髓细胞中的表达，分析PTEN与SKP2、VEGF的相关性，探讨PTEN、SKP2及VEGF蛋白水平的异常在AL中的可能作用。     

DNA芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变

目的建立快速检测结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药rpoB基因突变的DNA芯片。方法从34株临床痰样本中提取结核分枝杆菌的基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段，荧光标记后与芯片上含有特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交，同时与DNA测序法比较。结果用DNA芯片检测出19株耐药株和15株敏感株，且结果与DNA测序相同，准确率可达88．2％，敏感性为78．9％，特异性为100．0％。结论DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对RFP的耐药rpoB基因突变是一种操作简便、准确性、敏感性和特异性较高，且易于开展的方法。     

基因组检测综合分析在骨髓增生异常综合征诊治中的应用

本研究通过1例骨髓增生异常综合征（MDS）患者综合的分析,探讨基因组检测综合信息在MDS诊断、治疗方案选择以及预后评估的意义;采用核型分析、荧光原位杂交（FISH）及基于单核苷酸多态性的高分辨基因芯片分析（SNP—Array）检测患者染色体变化,采用新一代测序技术（NGS）检测患者的50肿瘤相关基因热点突变,对MDS的患者基因组信息进行综合分析。结果表明,G-带骨髓染色体核型分析检测到5号染色体长臂部分缺失和11号染色体长臂部分缺失,并得到FISH检测结果确认。SNP基因组芯片分析检测到两处获得性基因组大片段缺失,81Mb的5号染色体长臂中间缺失以及24Mb的11号染色体长臂中间缺失及2处获得性杂合缺失,分别是58Mb的1号染色体的短臂末端和39Mb14号染色体长臂末端。此外,孙驴基因组芯片分析检测到多条染色体的多个区域存在胚系发生的连续的大片段杂合性缺失,约占常染色体￡．因组的5．86％,提示患者父母具有3级亲属的血缘关系。50肿瘤基因热点突变检测未检出明显临床意义的基因突变信息,但在其中的6个基因中发现了6个基因位点的多态性,包括APC,FGFR3,KDR,KIT,PDGFRA和RET。结论：多种基因组学检测技术并用为患者提供了基因组学异常的全貌,其中一些发现对于患者的诊断、治疗方案的选择和预后很有意义,同时胚系基因组中存在的大片段杂合性缺失为遗传咨询提供有用的信息,也为MDS发病机制的研究提供线索。     

注射狂犬疫苗饮酒引起过敏反应一例报告

本文建立了一个用于检测军团菌的多聚酶链反应方法。扩增参考菌株的染色体DNA(L.pneumophital-14、L.micdadei、L.dumoffii Llongbeachae、L.Jordanis、L.bozemanii)，均可检出375bp的16SrRNA基因片段。对于已经监定的5株国内分离菌株染色体DNA进行扩增，获得了相同的结果，地高辛标记16SrRNA基因探针与扩增产物杂交，结果为阳性。而扩增14株非军团菌均为阴性。采用煮沸法制备细菌染色体DNA,PCR法检测环境水军团菌敏感性为280cfu/ml水，检查临床标本军团菌为560cfu/ml支气管灌洗液。上述结果表明该法敏感、快速、简便，具有较好的特异性。     

DNA甲基化与膀胱癌研究进展

DNA甲基化（DNA methylation）是在DNA序列不变的情况下,控制基因表达,维护染色体的完整性和调节DNA重组及某些特定基因组区域的转录活性,是恶性肿瘤普遍存在的分子生物学改变。肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化状态异常广泛见于肿瘤,有望作为临床肿瘤诊断的分子标记。膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,而膀胱癌与DNA甲基化关系近年来已成为膀胱癌研究热点之一。     

WWOX抑癌基因与肿瘤

WWOX基因位于染色体16q23．3—24．1区域，并跨越了整个常见染色体脆性位点FRA16D。在普通型脆性位点FRA16D上的新基因WWOX已被认为是与多种肿瘤相关的抑癌基因，其DNA序列，mRNA、蛋白结构已基本清楚，其促凋亡的作用已经肯定，然而具体的作用机制存在着争议。WWOX基因的外显子丢失，杂合性缺失（loss of heterozygosity，LOH）及蛋白表达异常在多种肿瘤中频发出现。     

PCR为基础的DNA甲基化检测技术进展

人类基因组中CpG位点的普遍低甲基化导致癌基因表达增强及5’CpG岛的高甲基化导致抑癌基因失活是细胞恶性转化的重要机制之一。为准确理解DNA甲基化与细胞恶性转化的关系，有必要了解肿瘤DNA中特定序列的甲基化改变，本文对国外学者运用PCR技术检测基因组中DNA特定序列的甲基化状态的进展作一介绍。     

比较基因组杂交技术在淋巴瘤遗传学研究中的应用

目的　采用基因组杂交 (CGH)技术 ,探讨淋巴瘤的分子遗传学特征。方法　获取 10例淋巴瘤患者的活检淋巴结组织 ,以CGH技术检测淋巴瘤基因组DNA拷贝数的变化。结果　 10例淋巴瘤患者中 ,2例有DNA扩增 ,1例有DNA缺失 ,1例DNA扩增和缺失同时存在 ,另 6例未见基因组异常。结论　CGH技术是淋巴瘤遗传学研究中的有用工具。     

改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用

目的改进聚合酶链反应（PCR），并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7，提取基因组DNA，利用亚硫酸氢盐测序法，用常规、降落及改进PCR分别扩增，比较扩增效果，PCR产物纯化回收后，TA克隆入载体pGEM-T，转化大肠杆菌（E．coli DH5α），筛选阳性克降，经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒，测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比，扩增效率增高，二聚体及非特异性扩增减少；测序结果显示，MCF-7细胞基因组DNA中，RASSFIA基因启动子CpG岛是高甲基化的，E-cadherin基因启动子CpG岛末呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性，更适用于基因甲基化状态的检测，并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。