电离辐射诱导的S期检查点非依赖于CD-KN1A

细胞周期检查点在DNA的复制和有丝分裂过程中具有调节细胞分化与死亡的关键作用。近来研究表明,除了G1和G2期检查点外,S期检查点在DNA的损伤修复及复制过程中同样具有重要的作用。为此,采用HCT116细胞来源的蛋白激酶抑制因子CDKN1A敲除的细胞株(CDKN1A+/+和CD-KN1A-/-),直接观察了电离辐射诱发的细胞S期损伤应答过程中CDKN1A的作用。方法:1采用3H-脱氧胸苷掺入法,观察不同剂量的电离辐射对HCT116(CDKN1A+/+)和S4(CD-KN1A-/-)细胞DNA合成抑制的剂量反应曲线;2将两种细胞同步化,观察10Gy照射诱导的DNA合成抑制动力学变…     

辐射诱导的S期检查点不依赖于CDKN1A

电离辐射可在复制起点上抑制 S期细胞的 DNA合成 ,而 CDKN1A(从前称 p2 1)在 S期延迟中起重要作用。因此 ,采用同步或非同步 CDKN1A / 和 CDKN1A- / -细胞系观察了 CDKN1A状态对 S期细胞辐射效应的影响 ,以阐明CDKN1A是否涉及 S期损伤感应通路。方法 :采用 HCT116细胞系 ( CDKN1A / )及 S4细胞系 ( CDKN1A- / - )进行实验。用 6 MV的 Varian线性加速器照射细胞 (剂量率为 4Gy/min) ,用 1 3 7　 Cs高剂量辐射源照射细胞。通过 3H-脱氧胸苷 ( d Thd)掺入法检测细胞复制率 ,荧光激活细胞分类术 ( FACS)分析细胞周期进…     

硫芥诱导大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨硫芥诱导脾脏组织淋巴细胞凋亡以及caspase-3在其中的作用.方法 大鼠腹腔注射硫芥,各组动物分别于中毒后1、3、5d后麻醉,开胸取脾.HE染色法观察脾脏组织的病理改变,RT-PCR法检测大鼠脾脏组织caspase-3基因表达,West-em blot法检测caspase-3的蛋白表达.分离脾脏淋巴细胞,制备硫芥染毒细胞模型.DNA琼脂糖凝胶电泳观察caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对细胞DNA降解的影响;流式细胞仪检测Ac-DEVD-CHO对染毒细胞凋亡峰(即G1亚G1峰)及线粒体跨膜电位(△Ψm)的影响.结果 硫芥中毒大鼠脾脏组织形态发生病理改变,部分淋巴细胞出现了凋亡的特征;脾脏组织caspase-3的mRNA与蛋白表达均增加:mRNA在中毒后1d的表达量与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05);蛋白表达在中毒后3d和5d与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).caspase-3的特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO对体外培养的硫芥染毒淋巴细胞的DNA降解和细胞(G1峰左侧凋亡峰的m现有抑制作用.硫芥可导致细胞线粒体跨膜电位降低,随着中毒时间延长,线粒体膜电位的降低更明显.结论 硫芥中毒可导致大鼠脾脏组织损伤,细胞凋亡是其作用机制之一,caspase-3可能参与了这一过程并在其中发挥重要的作用.     

白介素-6对马法兰诱导多发性骨髓瘤细胞KM3凋亡的影响

目的探讨白介素-6（IL-6）在马法兰诱导人多发性骨髓瘤细胞株KM。凋亡效应中的作用及其可能的分子机制。方法运用流式细胞仪技术（FACS）、DNA片段化百分率、凋亡细胞的原位检测（TUNEL法）和Western blot分析，观察II；6对马法兰诱导KM。细胞凋亡的影响及其caspase-3、caspase-8蛋白表达的变化。结果IL-6作用可使马法兰诱导的KM3细胞凋亡减少，同时caspase-3蛋白表达降低。结论1176可通过调节caspase-3、caspase-8表达保护马法兰诱导的KM3细胞凋亡。     

三苯氧胺促进大鼠子宫平滑肌细胞增殖

目的 :研究三苯氧胺 (tamoxifen ,TAM)对大鼠子宫平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法 :采用细胞培养、细胞计数、MTT、流式细胞技术和激光共聚焦显微镜技术。结果 :TAM(10 -6mol·L-1)使大鼠子宫平滑肌细胞的生长曲线上移。TAM(10 -8～ 10 -6mol·L-1)剂量依赖性的促进大鼠子宫平滑肌细胞的增殖作用。TAM(10 -6mol·L-1)使大鼠子宫平滑肌细胞周期由G1期加速向S期转化 ,G1期的DNA含量由对照组的 5 5 .5 %下降到加药组的 32 .8% ,S期的DNA含量由对照组的 2 9.0 %上升到加药组的 4 9.4 %。激光共聚焦检测到TAM(10 -6mol·L-1)可使大鼠子宫平滑肌细胞内的Ca2 + 浓度显著升高。结论 :TAM可以通过调节细胞周期各阶段DNA含量和细胞内Ca2 + 浓度水平 ,从而调节大鼠子宫平滑肌细胞的增殖活动。     

HIV-1 Tat蛋白对DNA修复基因及细胞周期相关基因表达的影响

目的:探讨HIV-1 Tat蛋白对DNA修复基因及细胞周期相关基因表达影响.方法:使用包含102个与DNA损伤修复和细胞周期相关的基因微阵列检测人横纹肌肉瘤细胞(TE671)及已转染tat基因的TE671细胞(TT2)基因表达谱的改变;使用半定量RT-PCR分析DNA-PKcs在mRNA水平表达;Western印迹法检测DNA-PKcs表达变化;荧光染色法检测电离辐射后细胞凋亡.结果:在基因芯片的检测中,发现与DNA损伤修复及细胞周期调控相关的6个基因CdC25C、KIF2C、CdC20、DNA-PKcs、CTS1、WEE1在转染tat基因的细胞中表达下调;DNA-PKcs的表达在表达Tat蛋白细胞中不论是在mRNA和蛋白水平均被抑制;接受电离辐射后,表达Tat蛋白的细胞凋亡增加.结论:HIV-1 Tat蛋白使细胞对电离辐射敏感,部分通过抑制DNA-PKcs表达来降低DNA双链断裂的修复能力,本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性提供了重要实验数据.     

酸性环境对辐射所致细胞凋亡和细胞周期进程的影响

目的 :研究酸性环境对不同剂量照射后细胞凋亡和细胞周期进程的影响及其可能的机制。方法 :1处于指数生长期的 HL6 0人白血病早幼粒细胞在不同 p H孵育 30 m in后 ,用 4～ 2 0 Gyγ线照射 ,剂量率1Gy/ m in。2 TU NEL法检测试剂盒染色 ,光镜计数凋亡细胞数。 3样品中 DNA提取后凝胶电泳 ,用溴化乙啶染色。 4应用 Western印迹分析 ADP-核糖聚合酶 (PAPR)裂解物。 5在培养基中加入蛋白酶 Caspase抑制剂 ICE和 CPP32 ,检测DNA片段和 PAPR裂解物。 6分别用碘化丙啶和 5 -溴脱氧尿苷染色 ,流式细胞仪检测细胞周期进程和凋亡动力学…     

STAT3在电离辐射响应、肿瘤发展以及组织修复中的作用

信号转导和转录激活因子 (STAT)是一个细胞质转录因子家族,共有7种蛋白,包括STAT-1、-2、-3、-4、-5A、-5B和-6,编码STAT家族的基因位于2号(STAT1和STAT4)、12号(STAT2和STAT6)和17号(STAT3、5A和5B)染色体上。在这7种蛋白中,STAT3和STAT5与肿瘤进展之间的关联性最强,且电离辐射可以对STAT3水平产生影响。STAT3的持续活化能够调节多种功能,包括细胞增殖、细胞周期进程、细胞凋亡、血管生成和免疫逃逸。STAT3在其生物学功能及其激活剂作用方面高度复杂,因此,进一步研究STAT3生物学功能及其信号通路具有十分重要的意义。     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系

目的观察人脑急性创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系。方法术中采集12例重型颅脑损伤患者挫裂伤脑组织和脑叶切除组织标本15个，分别应用凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等检测神经细胞凋亡的变化，采用免疫组织化学技术检测caspase-3蛋白的表达，并借助caspase-3荧光分析试剂盒检测caspase-3蛋白酶活性的变化。结果12个挫裂伤脑组织标本中10个透射电镜发现有散在分布、数量不等的凋亡神经细胞；TUNEL染色11个出现阳性凋亡神经细胞；5个DNA出现凋亡特异性的“梯状”电泳带；9个出现caspase-3蛋白超表达；11个caspase-3蛋白酶活性明显增高；凋亡出现时间从伤后4h直到216h，高峰在23-72h。结论急性创伤性脑损伤患者存在神经细胞凋亡，并且具有时间和空间依赖性。caspase-3的超表达与激活参与了人脑创伤性脑损伤后的细胞凋亡过程。     

在有或无蛋白质合成的抑制剂情况下辐射诱导新生期肾和睾丸的细胞凋亡及基因表达

目的:分析辐射诱导细胞凋亡的发生、凋亡相关基因bcl-2和p53的表达以及新生期大鼠肾和睾丸受照后细胞增殖水平。方法:1选用杂交Sprague-Dawley雄性大鼠,4～5日龄,12h∶12h光暗条件饲养,光照时间从6:00～18:00;实验分为假照组、照射组、环己酰亚胺(CHX,蛋白合成抑制剂)处理组和照射加CHX处理组。2用X射线5Gy全身照射,剂量率为5.4Gy/min。3照射或假照射前1h给予大鼠腹膜内注射CHX(1.5mg/kg)以确定新蛋白质合成在凋亡诱导中的作用。4用形态学(光镜和电镜)和DNA凝胶电泳法测定照射后2、4、6、8和24h时肾和睾丸的细胞凋亡水平。5用3H-腺…     

热应激对血管内皮细胞增殖的影响及其机制初探

目的　探讨热应激条件下对血管内皮细胞增殖的影响 ,进一步从DNA损伤后P5 3mRNA、P2 1mRNA表达改变角度探讨增殖调控的机理。方法　以建立的血管内皮细胞热应激 (4 3℃ ,2小时 )为实验模型 ,应用流式细胞仪观察热应激后血管内皮细胞株ECV30 4的细胞周期变化 ,单细胞凝胶电泳方法观察热应激对血管内皮细胞DNA的损伤 ,RT PCR检测P5 3mRNA、P2 1mRNA表达改变情况。结果　热应激可使血管内皮细胞DNA产生显著损伤 (P <0 .0 5 ) ,继而P5 3mRNA表达增高 ,并促进P2 1mRNA的上调表达 ,最终使细胞产生G1期阻滞。结论　热应激可损伤血管内皮细胞DNA ,并通过P5 3、P2 1通路抑制细胞增殖     

由UVC诱发的人上皮肿瘤A431细胞凋亡:一系列的细胞凋亡变化与凋亡蛋白酶(-8和-3)级联反应的关系

目的 :研究细胞凋亡事件的先后顺序 ,如染色质浓缩 ,线粒体跨膜电位 (ΔΨ m)及染料的摄取量 ;另外 ,研究细胞凋亡对细胞周期的依赖关系及特殊的凋亡蛋白酶抑制剂的影响 ,以确定对于 A431细胞中紫外线 C(UVC)诱发细胞凋亡蛋白酶回路的凋亡蛋白酶特异级联反应。方法 :1细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤一次 ,再用0～ 5 0 J/ m2剂量的 U VC照射。 2用 Hoechst33342染色后用荧光显微镜鉴别及量化 ,观察 2 0 0个以上的细胞 ,测定伴有染色质浓缩的细胞片段。 3通过观察次 G1 期细胞碎片具有较低的 DNA含量来鉴定 DNA碎片 ,细胞周期状态用 M…     

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答 ,提示其通过增强细胞免疫功能作为抗HBV免疫治疗的可行性     

化学致癌物可诱导不同组织细胞的程序外DNA合成

为探讨不同组织细胞对化学致癌物诱导的程序外DNA合成的敏感性,本研究用放射自显影法观察了6种化合物在LACA小鼠多组织内诱导的程序外DNA合成。N—甲基—N’—硝基—N—亚硝基肌(MNNG)直接与小组织块和~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)体外培养;其它5种化合物二甲基亚硝胺(DMN)、4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)、盐酸氮芥(NH_2·HCl)、膦氧氮丙啶(MAPO)、甲基苄基亚硝胺(NMBzA)通过不同途径体内给药作用后,取组织在体与~3H-TdR共同培养,冰冻切片,用放射自显影法观察组织细胞内程序     

吉西他滨与埃罗替尼联用对人胰腺癌细胞生长的影响

目的 探讨吉西他滨与埃罗替尼不同用药次序联合应用对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的影响及其可能的机制.方法 RT-PCR法和Western blotting法分别检测表皮生长因子受体(EGFR)mRNA及蛋白表达.MTT法检测吉西他滨(3×10-11～3×10-2mol/L)与埃罗替尼(10-8～10-4mol/L)单药对细胞生长的影响,并计算IG60浓度;观察吉西他滨(IC50浓度)与埃罗替尼(10-5mol/L)单药、同时或续贯应用(间隔24h或72h)对细胞生长的影响.流式细胞术检测细胞周期.结果 BXPC-3及PANC-1细胞内均有EGFR mRNA及蛋白表达.吉西他滨(3×10-10～3×10-2mol/L)和埃罗替尼(10-6～10-4mol/L)呈时间和浓度依赖性地抑制细胞生长.两药联用对细胞的影响与给药次序有关:与单药组比较,同时给埃罗替尼和吉西他滨(P=0.034,P=0.049)或先用埃罗替尼后用吉西他滨(P=0.001,P=0.025)对2种细胞的抑制作用显著增强;先用吉西他滨后用埃罗替尼对细胞的抑制作用与单用吉西他滨相比无明显变化(P=0.499,P=0.824);同时给予埃罗替尼和吉西他滨与先用埃罗替尼后用吉西他滨相比对细胞的抑制作用无显著差异(P=0.199,P=0.767).各用药组均将EXPC-3细胞周期阻断在G1期.结论 吉西他滨与埃罗替尼均能抑制人胰腺癌细胞的生长,两者联合同时给药或先用埃罗替尼后用吉西他滨的作用强于吉西他滨单独用药,这种作用与药物对细胞周期的影响无关.     

As2O3诱导HL-60,K562及NB4细胞的凋亡

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对慢性粒细胞K5 6 2 (CML) ,急性粒细胞白血病细胞株HL - 6 0 (AMLM2 )的作用并与细胞株NB4(APLM3)作比较。方法 :采用形态学和流式细胞术观察不同浓度As2 O3 对HL - 6 0 ,K5 6 2及NB4细胞的作用。结果 :As2 O3不仅能诱导NB4的凋亡 ,提高其浓度至 2 .7μM和 8.1μM ,也能诱导K5 6 2 ,HL - 6 0的凋亡。As2 O3 不能诱导三种细胞分化。结论 :As2 O3 对细胞诱导的凋亡是非选择性的且不能诱导分化。     

雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人脉络膜黑色素瘤株OCM-1增殖的影响,分析其诱导人OCM-1细胞凋亡的作用机制。方法将OCM-1细胞分为对照组和实验组,实验组加入20μl不同终浓度(5、10、20、40、80、160nmol/L)的TPL,对照组加入等量无血清RPMI 1640培养液,分别作用24、48、72h。采用MTT法检测TPL对OCM-1细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测不同浓度TPL诱导后OCM-1细胞的凋亡比例,Western blotting检测TPL诱导后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、survivin及caspase-3的表达。结果 TPL可抑制OCM-1细胞增殖,48h及72h的IC50值分别为56.14±6.72、15.57±4.28nmol/L。TPL诱导OCM-1细胞后,在瑞氏-吉姆萨染色中可观察到凋亡小体。流式细胞术在不同浓度TPL诱导后的OCM-1细胞中均检测到亚二倍体凋亡峰。TPL诱导OCM-1细胞凋亡过程中,Western blotting检测显示Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2、survivin蛋白表达下调(P<0.01),并可检测到活化的caspase-3。结论 TPL可抑制人OCM-1的增殖并诱导其凋亡,Bax、Bcl-2、survivin及caspase-3蛋白在其中可能具有重要作用。     

实验性脑出血神经细胞caspase-3,bcl-2表达的研究

目的:探讨实验性脑出血神经元caspase-3,bcl-2蛋白的表达情况.方法:60只Wistar大鼠随机分为3组,实验组(48只)采用尾状核注射自体血脑出血模型,对照组(6只)为生理盐水组,正常组6只.实验组分别于术后3、6、12 h,1、2、3、5、7 d后处死,共8个时间点.采用HE染色,免疫组化技术检测血肿周围神经元caspase-3,bcl-2蛋白的表达.结果:出血灶形成后3 h出现caspase-3阳性细胞,6 h开始逐渐升高,3 d达高峰,之后逐渐降低;3 h开始有Bcl-2阳性细胞表达,6 h之后逐渐增多,2 d达高峰,随后表达降低.结论:实验性脑出血后有神经细胞凋亡,并且与caspase-3,bcl-2蛋白表达有关.     

电离辐射和过氧化氢诱导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞DNA损伤效应的比较

目的 :阐明在过氧化氢 (H2 O2 )和电离辐射的作用下 ,DNA损伤的诱导、修复和细胞失活之间的关系。方法 :1CHO- 10 A细胞在α基本培养基加胎牛血清培养 ,指数生长 ,用 3H -胸苷标记 (2 .2× 10 3Bq/ml)。 X线照射细胞 ,剂量率 4Gy/m in。用一定浓度 H2 O2 的培养基经 4℃、30min培养细胞后 ,多次冲洗。2细胞种植于培养皿中 ,8d后经乙醇固定并染色 ,大于 5 0个细胞的群落作为存活者。 3单链断裂 (ssb) :DNA培养液换 5 m l碱性溶液 ,避光 30 min,用2 ml HCl溶液阻止 DNA变性 ;2 ml DNA悬液进行超声波处理 ,再加 1.2 m l的 1%十二烷…     

缺氧对过氧化物酶体增殖物活受体α表达的影响

本文研究不同程度缺氧条件下,肺癌A5 4 9细胞内过氧化物酶体增殖的激活受体α(PPARa)和缺氧诱导因子1α(HIF - 1α)的表达状况,及反义封闭HIF - 1α后,对PPARa表达的影响,以了解PPARa和HIF - 1α的相关性。作者将A5 4 9细胞分为4组:对照组(A组)在5 %CO2 培养箱中37℃培养。将细胞装入小室,以2 0ml min的通气量连续通入5 %CO2 和95 %N2 的混合气体,分别缺氧条件下培养2 4h(B组) ,4 8h(C组)和72h(D组) ,观察不同缺氧时间对PPARa及HIF - 1α蛋白和mRNA表达水平的影响。为观察HIF - 1α对PPARa表达状况的影响,再设计4组:对…