调治天癸方对环磷酰胺致少弱精症模型大鼠生精细胞凋亡的影响

目的研究调治天癸方对环磷酰胺致少弱精症模型大鼠生精细胞凋亡的影响。方法采用环磷酰胺法造模,随机分为正常对照组,模型组(35 mg/kg),生精胶囊组(0.6 g/kg),调治天癸方高、中、低剂量组(33.8、16.9、8.5 g/kg),每组12只,连续灌胃给药2周。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,调治天癸方组、生精胶囊组生精细胞凋亡数显著减少(P0.01),Bax蛋白表达显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白表达显著增高(P0.01)。结论调治天癸方可以有效减少少弱精症大鼠生精细胞的凋亡,其对生精细胞凋亡的干预作用可能与上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达、下调凋亡促进蛋白Bax表达有关。     

参杞强精胶囊对弱精症大鼠能量代谢及Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨参杞强精胶囊对弱精症大鼠能量代谢及Fas、Fas L蛋白表达的影响。方法:将40只SD健康雄性大鼠分为正常组、模型组、参杞强精胶囊组和生精胶囊组,采用奥硝唑(ORN)灌胃诱导形成大鼠生精功能障碍模型。参杞强精胶囊组予参杞强精胶囊灌胃,生精胶囊组予生精胶囊灌胃,正常组予生理盐水灌胃,连续给药4周。检测大鼠附睾组织α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)、果糖(Fructose)、乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)的浓度,免疫组织化学法检测Fas、Fas L蛋白在大鼠睾丸实质组织中的表达。结果:模型组α-glucosidase、Fructose、LDH浓度明显低于正常组(P0.05),MDA浓度明显高于正常组(P0.05);参杞强精胶囊组、生精胶囊组α-glucosidase、Fructose及LDH浓度明显高于模型组,MDA浓度明显低于模型组(P0.05);正常组、参杞强精胶囊组和生精胶囊组睾丸Fas、Fas L蛋白表达明显低于模型组(P0.05)。结论:参杞强精胶囊可改善弱精症大鼠能量代谢,抑制Fas、Fas L蛋白表达;改善能量代谢和凋亡蛋白表达可能是参杞强精胶囊治疗弱精症的主要机制。     

调治天癸方对不育症模型大鼠睾丸组织病理形态的观察

目的:观察调治天癸方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸组织病理形态的影响。方法:Wistar成年雄性大鼠72只随机分为正常对照组、模型对照组、生精胶囊组、调治天癸方大剂量组、调治天癸方中剂量组、调治天癸方小剂量组,每组12只。除正常对照组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天造模;从第11天开始,正常对照组和模型对照组用等量生理盐水灌胃,根据实验动物与人等剂量换算,调治天癸方大剂量组每天以(2.24g/100g)剂量的、调治天癸方中剂量组每日以(1.12g/100g)剂量的、调治天癸方小剂量组每日以(0.56g/100g)剂量的调治天癸方水煎液灌胃,连续灌胃48天。实验结束后将大鼠全部脱颈处死,解剖摘取大鼠双侧睾丸、附睾观察外观形态并称重,固定、灌流、石蜡包埋、切片、HE染色,镜检。结果:与模型对照组相比,正常对照组、生精胶囊组、大、中、小剂量治疗组的睾丸质量有显著性差别(P0.01);与正常对照组相比调治天癸方高、中、低剂量治疗组睾丸质量无显著性差别(P0.05);光镜显示下,模型对照组生精小管管壁塌陷,管腔内各级生精细胞数量减少,生精小管间质水肿,可见炎性细胞;调治天癸方各剂量组生精小管基膜轮廓变得完整清晰,基膜基本完整,管壁厚而圆,管腔内生精细胞的层次增多,排列也趋于条状,生精小管管腔中由精子细胞变态发育为精子的数量相对模型组大鼠显著增多。结论:调治天癸方可改善不育症大鼠的生精环境,增加不育症大鼠的睾丸质量。     

益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯所致大鼠生殖功能损害的影响

目的:探讨益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯所致大鼠生殖功能损害的作用机制。方法:以邻苯二甲酸二丁酯制备大鼠生殖功能损害模型;将大鼠分为空白对照组、模型对照组和益肾生精胶囊高、中、低剂量组;益肾生精胶囊高、中、低剂量组大鼠依次给予0.178,0.089,0.044 g/m L益肾生精胶囊混悬液10μL/g灌胃,空白对照组、模型对照组大鼠给予生理盐水10μL/g灌胃,1 d 1次,连续用药4周。4周后处死各组大鼠,检测睾丸指数、附睾指数和睾丸基因Dzip1、Cat1、Fas、C-jun的表达情况。结果:模型对照组、益肾生精胶囊低剂量组大鼠睾丸指数和附睾指数较空白对照组差别有统计学意义(P0.01);益肾生精胶囊高剂量组、中剂量组大鼠睾丸指数和附睾指数较模型对照组差别有统计学意义(P0.01);模型对照组、益肾生精胶囊低剂量组大鼠睾丸指数和附睾指数较益肾生精胶囊高剂量组差别有统计学意义(P0.01)。除益肾生精胶囊高剂量组外,各组大鼠睾丸基因Cat1、C-jun、Fas、Dzip1表达较空白对照组差别有统计学意义(P0.01);益肾生精胶囊高、中剂量组上述基因表达较模型对照组差别有统计学意义(P0.01);益肾生精胶囊中、低剂量组上述基因表达较益肾生精胶囊高剂量组差别有统计学意义(P0.01)。结论:邻苯二甲酸二丁酯可致大鼠睾丸与附睾指数下降,基因Cat1和Dzip1表达下调,Cjun、Fas表达上调;益肾生精胶囊可提高大鼠睾丸指数、附睾指数,上调Dzip1和Cat1表达,下调Fas、C-jun表达。     

益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的实验研究

目的:观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的影响。方法:选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,体质量(180±20)g,按随机数字表法,平均分为空白组,模型组,复方玄驹组,益精方组,每组12只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤1 m L/(100g·d)的剂量连续灌胃12 d;从第13天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,复方玄驹组以复方玄驹胶囊水溶液灌胃,益精方组以益精方汤剂灌胃,每天1次,连续20 d。实验结束后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化技术测定大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白claudin的表达。结果:与空白组比较,模型组中精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,复方玄驹组精子活动率、精子密度均升高,差异具有统计学意义(P0.05),claudin蛋白表达升高不明显,差异无统计学意义(P0.05),益精方组精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:益精方能够提高腺嘌呤诱导的肾阳虚模型大鼠的精子密度和精子活动率水平;同时使claudin蛋白的表达增多。     

益肾活血方对弱精子症模型大鼠精子质量的影响

目的观察益肾活血方对弱精症模型大鼠精子质量的影响。方法 50只大鼠随机分为正常组、模型组和中药高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外其余各组大鼠灌服雷公藤多苷片20 mg/(kg·d)连续5周建立弱精子症模型。造模成功后中药高、中、低剂量组分别给予益肾活血方15、10、5 g/(kg·d)灌胃,共5周,正常组和模型组普通饲养。末次给药后取大鼠双侧睾丸称重、测量体积,双侧附睾称重,检测精子密度、精子活率及精子活力。结果各组大鼠精子密度差异无统计学意义(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠精子活率和A级、B级、A级+B级精子均明显降低(P0.05)。中药低、中、高剂量组大鼠精子活率、B级、A级+B级精子较模型组明显升高(P0.05)。中药低、中、高剂量组大鼠两侧睾丸重量、体积及附睾重量与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论益肾活血方可提高弱精子症大鼠精子活力及精子活率,但不能改善精子密度,并对睾丸重量、体积及附睾组织的重量无影响。     

益精方对不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠75只随机分为空白组,模型组,益精方高、中、低剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天;从第11天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,益精方高（3.38 g/100 g）、中（1.69 g/100 g）、低剂量（0.85 g/100 g）组分别以益精方各剂量灌胃,每天1次,连续20天。实验结束后将大鼠全部处死,摘取睾丸,采用原位缺口末端标记法（TUNEL）和免疫组化SABC法分别检测各组动物生精细胞的凋亡情况及Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,细胞凋亡数升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与模型组比较,三个剂量组Bcl-2蛋白表达均升高（P〈0.01,P〈0.05）,高、中剂量组Bax蛋白表达均降低（P〈0.01,P〈0.05）,中剂量组细胞凋亡数降低（P〈0.01）。结论益精方能够通过调控睾丸组织Bcl-2及Bax蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡。     

强精煎抑制实验小鼠睾丸生精细胞凋亡的机制研究

目的 观察强精煎对实验小鼠睾丸Fas和Fasl蛋白表达的影响,探讨其抑制生精细胞凋亡的机制.方法 将80只健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组,强精煎组、黄精赞育胶囊组,除正常组用生理盐水外其他各组均以环磷酰胺注射液40 mg/kg腹腔注射造模,造模成功后,正常组及模型组分别给予蒸馏水,后两组分别给予相应药物灌胃治疗30 d.第31天处死小鼠,利用H-E染色观察小鼠睾丸病理形态,用免疫组织化学SABC法检测Fas和Fasl蛋白在小鼠睾丸实质组织中的表达.结果 与模型组比较,强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸Johnson 评分偏高,Fas和Fasl蛋白的表达率偏低(P＜0.01);与空白组比较,模型组Johnson 评分偏低,Fas和Fasl蛋白表达率偏高(P＜0.01);强精煎组和黄精赞育胶囊组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 强精煎可以下调Fas和Fasl蛋白在受损伤小鼠睾丸实质组织中的表达,这可能是其抑制生精细胞凋亡的分子机制之一.     

强精片对生精功能障碍大鼠模型Cdyl、G9a、HDAC1表达的影响

目的观察强精片对生精功能障碍模型大鼠精子质量及Cdyl、G9a、HDAC1表达的影响。方法50只健康雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,强精片低、中、高剂量组,每组10只,模型组采用环磷酰胺50mg/kg腹腔注射5天,空白组给予等量生理盐水注射。自第6天起,强精片低、中、高剂量组分别给予强精片0.17、0.33、0.67g/(mL·100g)灌胃,空白组及模型组给予1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,连续干预3周。3周后,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾。检测精液质量,观察睾丸组织结构,免疫组化检测大鼠睾丸组织Cdyl、G9a、HDAC1蛋白表达,RT-PCR检测大鼠睾丸组织Cdyl、G9a、HDAC1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组精子密度、活力、活率以及Cdyl、G9a蛋白和mRNA表达降低(P0.01),HDAC1蛋白及mRNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,强精片低、中、高剂量组精子密度、活力、活率以及Cdyl蛋白表达升高(P0.05,P0.01);强精片中、高剂量组G9a蛋白和Cdyl、G9amRNA表达升高(P0.05),HDAC1蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。结论强精片可通过上调Cdyl、G9a表达,下调HDAC1表达,改善生精功能障碍大鼠模型的精子质量。     

健延龄胶囊对大鼠生精作用研究

目的:观察健延龄胶囊对正常雄性大鼠以及环磷酰胺所致少、弱精雄性大鼠精子活力及质量的影响。方法:选取40只SD大鼠随机分为正常对照组、健延龄(0.8、1.6、3.2g/kg)给药组,除正常对照组灌胃给予生理盐水外,其余各组均灌胃给予健延龄,连续30天。给药结束后次日上午脱颈椎处死大鼠,取右侧完整附睾进行精子活力检测,并通过HE染色观察各组大鼠左侧睾丸与附睾病理形态学改变。另外,通过腹腔注射环磷酰胺方法制备少、弱精雄性大鼠模型,选取50只SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、健延龄(0.8、1.6、3.2g/kg)给药组,除正常对照组外,其余各组动物每只腹腔注射环磷酰胺0.3mg/kg/d进行造模,连续5天,第6天开始各给药组开始灌胃给予健延龄,正常对照组和模型对照组灌胃给予生理盐水,连续30天。于给药结束后次日上午脱颈椎处死大鼠,取右侧完整附睾进行精子活力检测,并通过HE染色观察各组大鼠左侧睾丸与附睾病理形态学改变。结果:健延龄1.6 g/kg对正常大鼠的精子运动速度有促进作用,显著增加正常大鼠的精子数量,提高正常大鼠的精子浓度;组织学检测显示,健延龄0.8 g/kg、1.6 g/kg和3.2 g/kg对正常大鼠睾丸组织及附睾组织均无明显影响;环磷酰胺注射后的大鼠经健延龄1.6 g/kg、3.2 g/kg给药后,能够显著增强精子的运动速度,明显增加精子数量;组织学检测显示,环磷酰胺所致大鼠少、弱模型,在给予健延龄0.8 g/kg、1.6 g/kg和3.2 g/kg药物后,发现个别大鼠睾丸曲细精管内生精细胞排列轻度紊乱,附睾管内精子数量轻微减少,且组织学评分结果为:模型组0.7分,健延龄0.8 g/kg组0.28分,健延龄1.6 g/kg组0.25分,健延龄3.2 g/kg组0.11分。结论:健延龄胶囊对正常大鼠的精子运动、精子密度方面有一定的增强作用;健延龄胶囊给药后,对环磷酰胺引起的大鼠精子运动减弱及数量减少等现象有明显的改善作用;健延龄对环磷酰胺所致大鼠少、弱精症睾丸的病理改变有明显改善作用。     

二紫胶囊对生精障碍大鼠凋亡调控基因的影响

目的:观察二紫胶囊对生精障碍大鼠凋亡调控基因的影响.方法:将40只健康雄性大鼠分为模型组、对照组、二紫胶囊高、低剂量组,以环磷酰胺注射液40 mg· kg-1,ip制造大鼠生精障碍模型,分别ig生理盐水、二紫胶囊浸膏(4.8,2.4g·kg-1),连续60 d,用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,免疫组化法测定Bax和Bcl-2蛋白在大鼠睾丸组织中的表达.结果:与模型组相比较,二紫胶囊高、低剂量组生精细胞凋亡指数明显下调[(7.16±1.47)％,(13.83±2.40)％ vs(20.50±2.17)％],Bax蛋白表达明显下调[(16.01±2.02),(26.67±1.79)vs(9.94±1.14)](P＜0.01),Bcl-2蛋白表达明显上调[(40 12±3.06),(22.87±2.94)vs(16.26±1.03)](P＜0.01).结论:二紫胶囊能通过下调Bax和上调Bcl-2表达,减少生精细胞凋亡的发生.     

五子衍宗丸干预线粒体通透性转换孔抑制精子凋亡的机制

目的:研究五子衍宗丸对电压依赖性阴离子通道1(VDAC1),腺嘌呤核苷酸转位酶(ANT),环孢菌素A结合蛋白D(CypD)等蛋白表达影响,分析其干预精子线粒体通透性转换孔(mPTP)开放的机制。方法:将40只大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(生精胶囊,1.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),五子衍宗丸组(4.0 g·kg~(-1)·d~(-1))。除正常组外其余各组灌服雷公藤多苷(30 mg·kg~(-1)),连续8周,建立少弱精子症模型,从造模的第5周开始,各组按剂量灌胃给药,连续给药4周,末次给药后禁食12 h,3%水合氯醛麻醉动物,摘取睾丸和附睾组织。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠睾丸组织VDAC1,ANT,CypD,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达;透射电镜观察精子线粒体的超微结构;原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠VDAC1,CypD,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2显著升高(P0.01);与模型组比较,生精胶囊组、五子衍宗丸组的VDAC1,CypD,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达显著下降,Bax/Bcl-2显著降低(P0.01);各组间ANT,Bcl-2蛋白表达无明显变化。电镜检查显示,模型组大鼠精子线粒体大小不一,排列紊乱,出现大量肿胀和空泡,生精胶囊组和五子衍宗丸组精子线粒体结构较完整,排列较整齐,肿胀和空泡现象明显减少;TUNEL检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠生精细胞凋亡率显著增加(P0.01);与模型组比较,生精胶囊组、五子衍宗丸组细胞凋亡率显著降低(P0.01)。结论:五子衍宗丸可能通过抑制VDAC1,CypD,Bax蛋白表达,降低mPTP的通透性,阻止Caspase凋亡蛋白家族的级联激活反应,发挥抗生殖细胞凋亡作用。     

益肾通络方对雄性苯并(a)芘染毒大鼠DFI、XRCC1、OGG1蛋白表达的影响

目的:观察益肾通络方对雄性苯并(a)芘(benzo(a)pyrene,Ba P)染毒大鼠精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)、X线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-Oxoguanine DNA glycosylase,OGG1)蛋白表达的影响,探讨Ba P染毒大鼠精子DNA损伤机制及益肾通络方对Ba P染毒大鼠精子DNA损伤的防护作用。方法:选取SPF级雄性SD大鼠100只,按体质量进行编号,并按照随机数字表法随机分为5组:溶剂对照组、Ba P染毒组、益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组。除溶剂对照组外,其余各组均按1 mL·kg~(-1)腹腔注射经Ba P固体稀释成的0.1 mg·L~(-1)工作液染毒60 d,染毒浓度100μg·(kg·d)~(-1),中药组均自Ba P染毒第31天开始灌胃,时间为30 d,灌胃剂量按《实验动物学》相关比例折算后,低剂量组给予益肾通络方0.522 g·L~(-1)并按10 mL·(kg·d)~(-1)灌胃,中剂量组给予益肾通络方1.044 g·L~(-1)灌胃,高剂量组给予益肾通络方2.088 g·L~(-1)灌胃。5天称质量一次,末次给药后5组大鼠均采用水合氯醛(8 mL·kg~(-1))腹腔注射麻醉并收集睾丸组织、精子悬液,检测大鼠DFI、XRCC1、OGG1。结果:(1)大鼠DFI的变化:与溶剂对照组比较,Ba P染毒组DFI显著升高(P0.05),益肾通络方各组DFI均低于Ba P染毒组(P0.05),且益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组DFI显著降低(P0.05);(2)XRCC1蛋白表达水平变化:与溶剂对照组比较,Ba P染毒组雄性大鼠睾丸内XRCC1蛋白表达降低(P0.05),益肾通络方各组XRCC1蛋白表达均高于Ba P染毒组(P0.05),且益肾通络方高剂量组XRCC1蛋白表达水平明显高于益肾通络方低剂量组(P0.05);(3)OGG1蛋白表达水平变化:与溶剂对照组比较,Ba P染毒组雄性大鼠睾丸内OGG1蛋白表达降低(P0.05),益肾通络方各组OGG1蛋白表达均高于Ba P染毒组(P0.05),且益肾通络方高剂量组OGG1蛋白表达水平明显高于益肾通络方低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:实验性Ba P染毒大鼠DFI增加、XRCC1蛋白表达降低、OGG1蛋白表达降低,这可能是影响精子DNA完整性的机制之一。益肾通络方能够降低实验性染毒大鼠DFI,提升染毒大鼠睾丸内XRCC1蛋白、OGG1蛋白表达水平,对睾丸内精子DNA完整性具有保护作用,从而提升雄鼠的生殖机能。     

加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张大鼠的影响

目的探讨加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张大鼠睾丸局部微环境及生精细胞凋亡基因表达的影响。方法采用Turner法构建精索静脉曲张大鼠模型,按随机数字表法将60只SPF级SD大鼠分为假手术组、模型组、迈之灵组(迈之灵片54 mg/kg)及加味大黄蟅虫颗粒低、中、高剂量组(生药水冲剂5.4、10.8、21.6 g/kg),每组10只,造模完成后4周开始给药,连续8周。运用精子计数板和彩色精子质量分析系统检测大鼠精液质量;透射电镜观察各组大鼠睾丸局部超微结构病理变化;Annexin V-FITC检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测各组大鼠睾丸组织中凋亡基因Fas、FasL、caspase-3、caspase-9的表达。结果模型组睾丸组织多见未成熟的生精细胞,出现空泡变性,而加味大黄蟅虫颗粒组管腔内见大量成熟生精细胞,浆内可见大量的线粒体、高尔基体及精子。相较于模型组,加味大黄蟅虫颗粒各剂量组及迈之灵组大鼠精子密度、活率增高(P0.01),凋亡率降低(P0.05,P0.01),凋亡基因Fas、FasL、caspase-3、caspase-9表达降低(P0.05,P0.01)。结论加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张模型诱导的大鼠睾丸组织损伤具有保护作用,从而改善睾丸局部微环境,为精子的发育成熟提供有利条件,这可能与其有效调控生精细胞凋亡基因表达有关。     

强精煎对实验性大鼠睾丸c-kit蛋白和CFTR蛋白表达的影响

目的观察强精煎对实验性大鼠睾丸c-kit蛋白和CFTR蛋白表达的影响。方法 75只雄性成年SD大鼠分5组,除空白组外,采用环磷酰胺诱导少、弱精子症大鼠模型。空白组和模型组大鼠予生理盐水,黄精赞育胶囊组给予黄精赞育胶囊1.11 g/(kg·d),强精煎低剂量组予强精煎免煎颗粒6 g/(kg·d),强精煎高剂量组予12 g/(kg·d)。采用免疫组化技术检测睾丸c-kit蛋白和CFTR蛋白表达。结果 c-kit光密度值分别为模型组13.70±3.61,空白组59.40±12.29,黄精赞育胶囊组50.11±4.86,强精煎低剂量组26.90±3.74,强精煎高剂量组52.44±5.11,除黄精赞育胶囊组和强精煎高剂量组外,其余各组间光密度值比较均有统计学意义;各组CFTR光密度值分别为模型组3.26±1.07,空白组59.24±11.33,黄精赞育胶囊组35.78±8.78,强精煎低剂量组26.61±3.59,强精煎高剂量组40.17±14.81。分别经强精煎和黄精赞育胶囊干预后,c-kit和CFTR蛋白表达均明显上调,除黄精赞育胶囊组和强精煎高剂量组外,其余各组间光密度值比较均有统计学意义。结论强精煎和黄精赞育胶囊均不同程度上调了c-kit蛋白表达,可能通过这一途径促进了精原细胞的分化,促进精子发生,改善生精障碍;上调了CFTR蛋白表达,调控精子发生,调节精子获能,提高受精能力,以上可能是其治疗少、弱精子症的机制之一。     

基于Nrf2/ARE通路的加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张模型大鼠的生精效应观察

目的观察加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张性不育模型大鼠的生精效应。方法按照随机数字表法将40只大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组,每组10只。建立精索静脉曲张性不育大鼠模型,给药干预方法:假手术组、模型组每天给予生理盐水灌胃;迈之灵组大鼠每天给予迈之灵片54mg/kg;加味大黄蟅虫颗粒组每天给予加味大黄蟅虫颗粒(10g/kg)灌胃。4周后检测大鼠附睾精子的质量,检测大鼠睾丸组织生化酶学的活性,比较大鼠睾丸上皮显微超微结构的改变,免疫组化检测模型大鼠睾丸组织中Nrf2蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠附睾精子浓度低,睾丸病理改变明显,睾丸曲细精管层次紊乱,成熟精子数量减少或缺如;透射电镜下睾丸各级生精细胞坏死,线粒体空泡化,内质网扩张,细胞核染色质固缩、核崩解;免疫组化睾丸组织中Nrf2的棕黄色阳性表达的细胞辉度低。与模型组相比,迈之灵组和加味大黄蟅虫颗粒组精子浓度显著高于模型组,成熟精子数量和生精细胞形态结构明显恢复;免疫组化睾丸组织中Nrf2的棕黄色阳性表达的细胞辉度明显升高;迈之灵组和加味大黄蟅虫颗粒组超氧化物歧化酶(SOD)、α-葡萄糖苷酶的活性、果糖浓度与模型组比较有差异性(P0.05)。结论加味大黄蟅虫颗粒能改善精索静脉曲张大鼠睾丸的病理损伤,提升睾丸组织中Nrf2的蛋白表达,对睾丸的精子发生发育具有一定的保护作用。     

调肝中药对精索静脉曲张大鼠睾丸形态结构及附睾精子密度和活率的影响

目的观察调肝中药对精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸组织形态结构及附睾精子密度和活率的影响。方法随机选取清洁级雄性SD大鼠50只,造模后分为模型组、调肝中药组、活血化瘀组、滋补肝肾组、补肾活血组,另取10只为假手术组,共6组,每组10只。各治疗组均于造模后48 d开始。连续用药60 d。处死大鼠,剪取睾丸、附睾,睾丸组织用HE染色,光镜下观察其病理改变,检测附睾精子的密度和活率。结果假手术组睾丸生精小管内各级生精细胞排列整齐、致密,层次清楚,结构正常,生精小管管腔内可见大量精子;模型组生精小管的各级生精细胞损伤最重,精子极其少见;治疗组各级生精细胞排列介于假手术组和模型组之间,其中调肝中药组生精细胞排列最致密,管腔内可见精子。与模型组比较,假手术组、调肝中药组VC大鼠附睾精子密度明显升高(P0.05),附睾精子活率各组差异无统计学意义(P0.05)。结论 VC导致睾丸生精细胞损伤,中药治疗后睾丸组织各级生精细胞都有不同程度的恢复,附睾液精子数量明显增加,调肝中药疗效最好。     

枸杞多糖对电离辐射小鼠睾丸组织损伤的保护作用

目的观察枸杞多糖对X射线电离辐射小鼠睾丸组织损伤的保护作用。方法雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、枸杞多糖低剂量和高剂量组,给药组动物分别按照0.25 g/kg和1 g/kg剂量灌胃枸杞多糖,其余组动物灌胃蒸馏水,每日一次。第7天小鼠经水合氯醛麻醉仰卧位固定,仅睾丸部位接受X射线照射(3.0 Gy),正常组小鼠仅麻醉不照射。照射后各组小鼠继续灌胃药物,第21天处死动物取睾丸及附睾,称定质量并观察精子活力、精子密度以及睾丸生精小管结构。结果枸杞多糖各组小鼠一般状况均优于模型组,枸杞多糖高剂量组小鼠睾丸质量与模型组比较明显增加,精子数量和活力明显升高,组织病理学显示枸杞多糖高剂量组小鼠睾丸生精小管内含大量精子,部分区域见少量生精细胞脱落。结论枸杞多糖对X射线所致的小鼠睾丸组织损伤有明显的保护作用。     

复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌TGF-β_1及CTGF表达水平的影响研究

目的观察经验方复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响,探讨其对糖尿病心肌病的可能作用机制,为临床防治糖尿病心肌病提供可靠的实验依据。方法将雄性Wistar大鼠88只随机分为正常组、模型组、复荣通脉胶囊低剂量组及复荣通脉胶囊高剂量组,每组22只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,复荣通脉胶囊低剂量组和高剂量组分别给予复荣通脉胶囊混悬液0.67 g/(kg·d)和1.34 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。连续灌胃8周后,测量各组体质量、血糖、TC、TG,免疫组化法检测心肌组织中TGF-β1、CTGF表达情况。结果灌胃8周后,正常组体质量明显高于灌胃前(P0.05),模型组和复荣通脉胶囊低剂量组、高剂量组体质量均明显低于灌胃前及正常组(P均0.05);各组血糖水平与灌胃前比较差异均无统计学意义(P均0.05),模型组和复荣通脉胶囊低剂量组、高剂量组比较差异也均无统计学意义(P均0.05);各组间TC比较差异均无统计学意义(P均0.05),模型组TG明显高于正常组(P0.05),复荣通脉胶囊低剂量组、高剂量组TG与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05);复荣通脉胶囊高剂量组心肌组织中TGF-β1、CTGF表达水平明显低于模型组和复荣通脉胶囊低剂量组(P均0.05)。结论复荣通脉胶囊可下调TGF-β1、CTGF在糖尿病大鼠心肌组织中的表达,从而发挥其对糖尿病心肌病的治疗作用,但具有剂量依赖性。     

续断种子方干预无精子症模型小鼠睾丸的精子发生

目的观察续断种子方对无精子症模型小鼠睾丸精子发生发育过程中c-kit/CFTR表达的影响,探索中药干预睾丸生精功能的影响。方法按照随机数字表法分为对照组,模型组,麒麟丸组,续断种子方高、中、低剂量组。采用白消安和环磷酰胺建立无精子症小鼠模型。各治疗组给予相应药物灌胃,对照组和模型组小鼠给予等体积生理盐水,每日1次,连续8周。检测小鼠附睾的精子质量、睾丸组织显微超微结构、睾丸组织c-kit/CFTR蛋白的表达。结果模型组偶见散在精子,睾丸生精上皮不同程度破坏,精原细胞、精母细胞线粒体空化明显,部分线粒体脊消失,核膜局部破损,c-kit/CFTR免疫组化棕黄色阳性表达的细胞散在;续断种子方高剂量组、麒麟丸组、对照组小鼠附睾精子浓度较高,睾丸生精上皮见精子、精子细胞、精母细胞,线粒体空化少,可见丰富的高尔基体、内质网结构,c-kit/CFTR免疫组化棕黄色阳性表达的细胞辉度大。与对照组相比,模型组α-葡糖苷酶、果糖浓度明显有差异性(P0.05);与模型组相比,续断种子方高剂量组、麒麟丸组、对照组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、α-葡萄糖苷酶的活性、果糖浓度与模型组有差异性(P0.05)。结论续断种子方可以有效促进睾丸生精上皮的精子发生,增加精子的数量,达到"以通为用,和营生精"之效。