运用saRNA激活p21基因表达上调对肺癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的:探讨利用针对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21WAF1/CIP1(p21)的基因启动子的saRNA (dsp21-322) 特异激活p21基因的表达对肺癌细胞生长及耐药的影响.方法:化学合成针对p21启动子区的saRNA,将其转染非小细胞型肺癌细胞系A549,利用RT-PCR技术及Western blotting技术检测细胞中p21表达情况,进而观察p21表达改变后细胞凋亡情况及对顺铂药物敏感性的影响.结果:在转染dsp21-322的 A549肺癌细胞中,p21的mRNA和蛋白的表达均有所上调.p21表达的上调可引起A549细胞生长的的明显抑制并可增强其对顺铂的化疗敏感性.结论:p21基因在肺癌药物耐药性的过程中发挥了作用,为应用saRNA上调抑癌基因治疗肿瘤提供了新的思路.     

外源性P73基因对WtP53型人肺腺癌细胞A549化疗敏感性的影响

目的 研究外源p73基因转染wtp53型人肺腺癌A549细胞对其化疗药物敏感性的影响。方法 用脂质体介导的转染技术。将含有全长人野生型p73α cDNA和野生型p53 cDNA的真核表达重组质粒分别导入A549细胞，观察基因转染前后肿瘤细胞对化疗药物顺铂和阿霉素敏感性的变化。结果 A549-p73α细胞可以稳定地表达P73α蛋白，其生长速度较未转染p73α和转染wtp53基因的A549细胞明显减慢，克隆形成数下降，凋亡细胞明显增多。与未转染组比较，在原本没有抑制和杀伤作用的化疗药物浓度作用下A549-p73α细胞生长明显受到抑制，顺铂和阿霉素的IC50值分别降低为约1／6和／70。结论 研究显示外源性p73基因的导人增加了wtp53型人肺腺癌A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药物的敏感性，为p73基因用于治疗wtp53不能发挥作用的恶性肿瘤提供实验依据。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

转染BAX基因对A549细胞系的凋亡及化疗敏感度的影响

目的 探讨BAX转染是否增强人肺癌A549细胞对顺铂致凋亡的敏感度。方法 通过CCK8法检测顺铂对A549细胞体外增殖的影响。应用脂质体介导重组真核表达载体BAX-pcDNA3.1和空载体pcDNA3.1质粒转染至人肺癌A549细胞中,G418筛选阳性细胞。RT-PCR法检测BAX在A549细胞中的表达。将不同浓度的顺铂分别作用于A549、A549/BAX和A549/pcDNA3.1细胞72 h,CCK8法测定各组细胞的存活率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果 顺铂能抑制A549细胞体外生长,BAX和顺铂使A549细胞发生G₁/S期细胞阻滞。RT-PCR显示转染BAX基因的A549细胞中BAX表达显著增加,转染BAX基因及加药组细胞凋亡率明显增加。 结论 稳定转染BAX基因明显增强A549细胞对顺铂致凋亡作用的敏感度。     

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。     

RNA干扰GRP75表达改善人肺腺癌细胞对顺铂耐药性

背景与目的 GRP75(glucose regulated protein75)属于热休克蛋白(hot shock protein,HSP)家族,是一种主要位于线粒体的分子伴侣,在某些耐药的肿瘤细胞中高表达。本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默GRP75基因的表达,观察下调GRP75的表达对肿瘤细胞耐药性的影响并探讨GRP75在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用逐步增加剂量与大剂量冲击相结合的方法,诱导建立耐顺铂细胞株A549/CDDP。分别将包裹GRP75-shRNA和不含干扰序列的慢病毒转染A549和A549/CDDP细胞,在荧光显微镜下观察各组细胞转染率,应用M比色法检测干扰前后各组细胞对顺铂的敏感性,应用Western blot检测干扰前后各组细胞GRP75、p53、bcl-2的表达。结果各组细胞感染效率均在90%以上,转染后A549/CDDP和A549细胞中GRP75的表达均明显下调(P<0.05)。转染前后A549/CDDP细胞对顺铂的耐药指数分别为21.52和4.14。转染后A549/CDDP细胞内p53的表达上调(P<0.05),bcl-2表达下调(P<0.05)。结论 GRP75是A549细胞对顺铂耐药机制的相关蛋白之一,其在耐药机制中的作用与其对p53和bcl-2的调控有关。     

miRNA21对人肺癌 A549细胞增殖及迁移的影响

目的：探讨抑制 miRNA21对人肺癌 A549细胞体外增殖、迁移及凋亡的影响。方法：采用体外转染法将 miRNA21－5p 瞬时转染 A549细胞后,应用 Real －time PCR 特异探针法检测人肺癌细胞系中 miRNA21的表达情况;应用 MTT 法检测人肺癌 A549细胞的增殖情况;应用 Transwell 小室检测人肺癌 A549细胞的迁移情况;流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞的凋亡情况;Western blot 检测人肺癌 A549细胞中表皮因子生长受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达。结果：与正常对照组和 miRNA21－NC 阴性对照组相比,miRNA21－5p 转染组人肺癌 A549细胞中 miRNA21表达水平显著降低,EGFR 表达显著下调,细胞生长显著受抑制,且促进人肺癌 A549细胞的凋亡（P ＜0．05）。结论：抑制 miRNA21在人肺癌 A549细胞中的表达,能够抑制 A549细胞的生长,促进其凋亡,miRNA21有可能作为治疗肺癌的新靶标之一。     

BAG-1蛋白在衣霉素诱导人肺癌A549细胞内质网应激及提高顺铂敏感性中的作用

目的:体外观察低剂量衣霉素对人肺腺癌A549细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的诱导作用,以及此过程中Bcl-2结合抗凋亡基因1(Bcl-2 associated athanogene 1,BAG-1)表达的变化;同时,观察衣霉素作用后A549细胞对顺铂敏感性的变化以及此过程中BAG-1蛋白表达的变化.方法:采用蛋白质印迹法检测低剂量衣霉素作用A549细胞后ERS标志性蛋白GRP78及抗凋亡蛋白BAG-1的表达变化;MTT法测定衣霉素作用后顺铂对A549细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)变化;FCM法检测低剂量衣霉素作用后A549细胞对顺铂的敏感性变化;蛋白质印迹法检测衣霉素作用前后顺铂对A549细胞中BAG-1和procaspase-12蛋白表达的影响.结果:1.25 μg/mL衣霉素作用A549细胞8h后,能诱导细胞发生ERS,即ERS标志性蛋白GRP78表达上调,同时BAG-1蛋白表达也明显上调(P均＜0.05).衣霉素诱导A549细胞ERS能增加细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05).细胞发生ERS前,1.25、2.5和5 μg/mL 3个质量浓度的顺铂均上调BAG-1蛋白的表达(P均＜ 0.05),但2.5和5μg/mL顺铂诱导BAG -1蛋白上调量均小于1.25 μg/mL组(P＜0.05);细胞发生ERS后,与单纯ERS未给予顺铂干预的细胞组比,1.25、2.5和5μg/mL 3个质量浓度的顺铂均下调BAG -1蛋白的表达(P均＜0.05),且下调量与顺铂浓度呈正比.2.5和5μg/mL顺铂能通过ERS途径诱导细胞发生凋亡,在此过程中BAG-1和procaspase-12蛋白表达均下调(P均＜0.05).结论:BAG-1蛋白可能是ERS和顺铂诱导肺癌细胞凋亡的一个重要调控因子之一,且ERS凋亡途径可能是顺铂诱导肺癌细胞凋亡的重要途径之一.     

沉默CXCR4的表达逆转肺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨沉默CXCR4对肺癌细胞顺铂耐药的影响，并研究其分子作用机制。方法:利用RT-qPCR测定肺癌耐药（A549/DDP）及药物敏感细胞株（A549）中CXCR4 mRNA的表达水平；利用LipofectamineTM 2000将siRNA-CXCR4转染至肺癌耐药细胞株中，RT-qPCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证siRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率；利用CCK-8法检测沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的增殖活性；利用流式细胞仪测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的凋亡率；利用MTT法测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性；利用Western blot实验测定沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR实验结果显示，肺癌耐药细胞株A549/DDP中CXCR4 mRNA的表达量显著高于药物敏感细胞株（P＜0.01）；体外转染siRNA-CXCR4可明显下调A549/DDP细胞株中CXCR4的表达（P＜0.001）；CCK-8实验结果显示，沉默CXCR4的表达抑制了A549/DDP细胞的增殖活性（P＜0.01）；流式细胞仪实验结果显示，沉默CXCR4的表达促进了A549/DDP细胞凋亡（P＜0.01）；MTT实验结果显示，沉默CXCR4的表达增加了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性（P＜0.01）；Western blot实验结果显示，沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默CXCR4的表达抑制肺癌耐药细胞增殖、促进凋亡，逆转肺癌细胞顺铂耐药，CXCR4正向调控CYP1B1的表达，可能是CXCR4逆转肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。     

miR-323a-3p通过靶向结合TM4SF1而调控NSCLC A549细胞的增殖、 迁移和侵袭

目的：探究miR-323a-3p、四次穿膜蛋白超家族成员1（TM4SF1）在NSCLC组织和细胞中的表达及两者间的靶向调控关系,观察两者表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭和裸鼠移植瘤生长的影响。方法：收集2014年1月至12月间青海省人民医院手术切除的20例NSCLC组织及其相应的癌旁组织,qPCR和WB法检测癌组织中miR-323a-3p、TM4SF1 mRNA 和TM4SF1蛋白的表达。向A549细胞转染miR-323a-3p mimic,采用MTT法、Transwell法、WB法检测miR-323a-3p过表达对细胞的增殖、迁移和侵袭以及TM4SF1、细胞周期蛋白 D1（cyclin D1）、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。采用生物信息学预测工具 StarBase 和双荧光素酶报告基因实验分析 miR-323a-3p 与 TM4SF1 靶向关系。将 si-TM4SF1 转染至 A549 细胞,以及分别将 miR323a-3p mimic 与 pcDNA 或 pcDNA-TM4SF1 共转染 A549 细胞,评估细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;同时建立各组细胞的BALB/c裸鼠移植瘤模型,在14、21和28 d时测量并计算移植瘤体积。结果：与癌旁组织相比,NSCLC组织中miR-323a-3p表达水平明显下调,TM4SF1 mRNA和蛋白表达水平显著上调（均P<0.01）。miR-323a-3p过表达或抑制TM4SF1表达都会降低A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达而促进p21蛋白表达,并且抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长（均P<0.01）。生物信息学StarBase工具预测和双荧光素酶基因报告实验结果显示miR-323a-3p能够靶向结合TM4SF1基因并调控 TM4SF1的表达。上调TM4SF1表达后,miR-323a-3p过表达对A549细胞恶性生物学行为及cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达、移植瘤生长的抑制作用均被部分逆转（均P<0.01）,对p21蛋白表达的促进作用也被逆转（P<0.01）。结论：miR-323a-3p 通过靶向下调肺癌A549细胞中TM4SF1的表达抑制细胞的增殖、迁移、侵袭和裸鼠移植瘤生长。     

诃子水提取物对肺癌A549细胞抑制作用的实验研究

目的：探讨诃子水提物对人肺癌细胞A549体外增值的影响和作用机制。方法：利用MTT法检测不同剂量组的诃子水提物对肺癌A549细胞增殖的影响,通过倒置显微镜观察肺癌A549细胞的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组诃子水提物对肺癌细胞A549作用后的周期变化。结果：诃子水提物对人肺癌细胞A549的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,诃子水提物阻滞肺癌A549细胞于G0／G1期。结论：诃子水提物对人肺癌细胞A549增殖具有抑制作用,其机制是诃子水提物使细胞周期阻滞于G0／G1期并诱导细胞凋亡。     

Genetic alterations of tumor suppressor ING1 in human non-small cell lung cancer

The aim of this study was to investigate the function of the ING1 gene in lung carcinoma. To detect the inhibitory effect of ING1 in human lung cancer, recombinant ING1b plasmids were transfected into two lung cancer cell lines with different p53 status, A549 with wild-type p53 (wtp53) and SK-MES-1 with mutant p53. Apoptosis, cell cycle, growth rate and the expression of downstream gene p21waf1 were analyzed. In addition, the complex of p33ING1b and p53 was analyzed with coimmunoprecipitation. To detect the gene alteration and the expression of ING1, 70 cases of fresh-frozen lung carcinomas and 217 cases of formalin-fixed, paraffin-embedded specimens were examined for loss of heterozygosity (LOH) and p33ING1b protein expression by polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and immunohistochemistry using tissue microarrays, respectively. Overexpression of ING1b inhibited the cell growth of A549 and SK-MES-1, induced cell cycle arrest and apoptosis. p21waf1 was up-regulated and a complex of p33ING1b and wtp53 was found after transfection of ING1b in the wtp53-positive lung cancer cell. High LOH frequency was found in lung carcinomas (55.7%) and p33ING1b expression was lost in 115 of 217 carcinomas (53.0%). Furthermore, there was a highly significant inverse correlation between expression and LOH frequency (P<0.05). ING1 can inhibit the growth of lung cancer cell lines through the induction of cell cycle arrest and apoptosis by forming a complex with wtp53 and up-regulating p21waf1. In human lung cancer, expression of the ING1 gene was reduced or lost and high LOH frequency of ING1 microsatellites was found. The LOH of microsatellites may down-regulate p33ING1b and/or affect its function, thereby, contributing to lung cell carcinogenesis.     

Combined effects of klotho and soluble CD40 ligand on A549 lung cancer cells

Although the roles of soluble CD40 ligand (sCD40L) or the klotho gene in lung cancer cells have been studied, little is known about the functions of klotho combined with sCD40L in lung cancer. The present study was designed to investigate the biological effects of klotho combined with sCD40L on the A549 lung cancer cell line (CD40 positive) and their possible mechanisms. Lung cancer A549 cells were chosen as target cells and CD40 signals were stimulated by soluble CD40 ligand (sCD40L). In this study, we found that klotho, soluble CD40 ligand and their combination can increase cell proliferation inhibition and the apoptosis rate in A549 cells by inhibiting the cell cycle, up-regulating Bax gene expression and (or) down-regulating Bcl-2 gene expression; and their combination has a stronger effect on A549 cell apoptosis and proliferation inhibition compared to klotho or sCD40L alone. These data suggest that the combination of klotho and sCD40L may provide an efficient method to treat non-small cell lung cancer.     

IL‐6 enriched lung cancer stem‐like cell population by inhibition of cell cycle regulators via DNMT1 upregulation

Tumors are influenced by a microenvironment rich in inflammatory cytokines, growth factors and chemokines, which may promote tumor growth. Interleukin‐6 (IL‐6) is a multifunctional cytokine and known as a regulator of immune and inflammation responses. IL‐6 has also been reported to be associated with tumor progression and chemoresistance in different types of cancers. In our study, we demonstrated that IL‐6 enriches the properties of lung cancer stem‐like cells in A549 lung cancer cells cultured in spheroid medium. IL‐6 also promotes sphere formation and stem‐like properties of A549 cells by enhancing cell proliferation. Methylation‐specific polymerase chain reaction (PCR) was performed and revealed that IL‐6 increased methylation of p53 and p21 in A549 cancer cells. Western blot analysis and quantitative real‐time PCR demonstrated that IL‐6 increased the expression of DNA methyltransferase 1 (DNMT1) in A549 cells cultured in spheroid medium, but not the expression of DNMT3a or DNMT3b. Knockdown of DNMT1 eliminated IL‐6‐mediated hypermethylation of cell cycle regulators and enrichment of lung cancer stem‐like properties. In conclusion, our study, for the first time, shows that the IL‐6/JAK2/STAT3 pathway upregulates DNMT1 and enhances cancer initiation and lung cancer stem cell (CSC) proliferation by downregulation of p53 and p21 resulting from DNA hypermethylation. Upon blockage of the IL‐6/JAK2/STAT3 pathway and inhibition of DNMT1, the proliferation of lung CSCs was reduced and their formation of spheres and ability to initiate tumor growth were decreased. These data suggest that targeting of the IL‐6/JAK2/STAT3 signaling pathway and DNMT1 may become important strategies for treating lung cancer.     

上调LINC00665对小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其作用机制

目的:探讨长链非编码RNA LINC00665在小细胞肺癌H446细胞中的表达，以及LINC00665高表达后对H446细胞增殖的影响。方法:以小细胞肺癌H446细胞系为实验组，非小细胞肺癌A549细胞系为对照组。应用实时荧光定量PCR方法检测H446和A549细胞中LINC00665的表达水平。通过病毒转染的方式，使H446和A549细胞中LINC00665高表达，分别检测H446和A549细胞中miR-186-5p的表达水平。病毒转染0、24、48和72小时后，采用MTT法检测H446细胞的增殖能力。结果:LINC00665的表达水平在H446细胞略低于A549细胞；给予相同数量的LINC00665高表达病毒分别转染后，miR-186-5p的表达水平在H446细胞略低于A549细胞，差异均没有统计学意义。与空白对照组和NC组相比，LINC00665高表达组H446细胞的增殖能力明显提高。结论:LINC00665可能通过调控miR-186-5p的表达，促进小细胞肺癌细胞的增殖。本研究有助于寻找小细胞肺癌潜在的治疗靶点，对提高小细胞肺癌患者的疗效具有积极意义。     

The novel miR-9501 inhibits cell proliferation,migration and activates apoptosis in non-small cell lung cancer

Accumulating evidences suggest that lots of microRNAs (miRNAs) play crucial roles in (patho-)physiological processes of lung cancer, including metastasis, drug-resistance or tumorigenesis. They mediate the progression of cell growth, migration and invasion by regulating the expression of special genes. MiRNA expression patterns could also serve as diagnostic/prognostic biomarkers. Cancer therapies mediated by miRNAs remain tremendous potential and challenges. Our previous small RNA-seq assay found that the novel miR-9501 was down-regulated in lung cancer tissues compared with adjacent non-cancer tissues. In this study, our results verified that miR-9501 was significantly down-regulated in lung cancer tissues and its expression levels were remarkably suppressed in non-small cell lung cancer cell lines. Then, we characterized and investigated the novel miR-9501 in A549 cells. Transient transfection of miR-9501 into cultured A549 cells led to remarkable decrease in cell proliferation, migration and increase apoptosis. These data demonstrated that miR-9501 might be a tumor suppressor for lung cancer therapy.     

托瑞米芬协同顺铂对人肺癌细胞株A549的影响

目的：研究托瑞米芬（TOR）对人肺腺癌细胞系A549的毒性作用及其与顺铂（DDP）联用的协同效应,探讨肺癌综合治疗的方向。方法：用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对A549细胞的毒性作用,测定其吸光度（A）值。用流式细胞仪检测细胞DNA含量,Western blot法检测p21蛋白表达。结果：TOR能直接抑制A549细胞的生长,≥5μmol/L的TOR可明显增强DDP的细胞毒性作用。TOR可加强DDP对S期、G2期及M期细胞的作用,且DDP＋TOR后p21蛋白表达增加。结论：≥5μmol/L的TOR与DDP联用对A549细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。