正常骨髓基质细胞促进残留耐药Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨正常骨髓基质细胞对残留耐药Jurkat细胞凋亡的促进作用及其可能机制。方法体外分离培养急性淋巴细胞白血病患者和健康供者骨髓基质细胞(BMSCs),分别模拟白血病和正常骨髓造血微环境,并与获得柔红霉素(DNR)耐药的Jurkat细胞(Jurkat/DNR细胞)共培养。绘制悬浮培养和与BMSCs共培养4d的Jurkat/DNR细胞的增殖曲线,并检测悬浮培养及共培养14、1、0d的Jurkat/DNR细胞的caspase3/7活性和bcl-2、bax、DAPK1 mRNA表达情况。结果与骨髓基质细胞共培养比较,悬浮培养的Jurkat/DNR细胞生长受到明显抑制。共培养41、0d后,Jurkat/DNR细胞caspase3/7活性升高,且共培养10d的活性高于共培养4d(P<0.05)。共培养4、10d后,Jurkat/DNR细胞bcl-2表达增加,共培养14、1、0d后,死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达增加(P<0.05)。而bax表达在各时间点间差异无统计学意义(P>0.05)。结论正常骨髓基质细胞能促进Jurkat/DNR凋亡,其机制可能与过表达的DAPK1诱导Jurkat/DNR细胞凋亡和bcl-2转录下调c、aspase3/7活性升高有关。     

浓缩铀诱发PC12细胞的凋亡

细胞凋亡是一种正常生理条件下的程序性死亡和外来因素的细胞自杀过程 ,是细胞针对所处环境因素的特定改变所产生的应答 ,与细胞生长一样 ,在机体中承担着重要调节作用[1 ] 。大剂量照射产生细胞坏死 ,但是发生细胞凋亡的剂量远远低于细胞快速死亡所需的剂量。研究辐射诱发细胞凋亡的量效、时相关系以及阐明细胞凋亡和有关的影响因素具有极为重要临床应用意义[2 ] 。随着α辐射体在核燃料和工业、医疗等方面的应用[3] ,由放射性核素所产生的内照射危害已成为一个具有现实意义的重要课题。笔者研究了浓缩铀诱发神经元样细胞凋亡的时相关系。…     

股骨的朗格汉斯细胞组织细胞增生症一例报告

朗格汉斯细胞组织细胞增生症（Langerhanscell histiocytosis，LCH）是一组罕见的属于单核细胞系统的特定树突细胞和网状细胞增生为共同特点的疾病，其儿童年发病率为3．5—7．0／百万。由于其缺乏典型的临床病史和特异性的临床表现常常导致临床与病检漏诊和误诊。我院近期曾遇一例原发于股骨的LCH，现介绍如下。     

完整细胞打点杂交技术的建立

介绍一些将完整细胞收集在硝酸纤维素膜上裂解释放DNA，并在此基础上进行点杂交的新方法，结果可达到相对定量，此技术较传统打点杂交更为简便、快速且适于批量检测和筛选，易于推广。     

心肌梗死后延迟骨髓细胞移植对大鼠心肌细胞bcl-2/bax mRNA及蛋白表达的影响

目的观察心肌梗死(MI)后恢复期延迟的骨髓单个核细胞(BM-MNCs)移植对心肌细胞bcl-2/bax mRNA及蛋白表达的调节作用,并探讨影响凋亡的可能机制.方法通过结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支制成MI模型.2周后第2次开胸,移植组在心外膜下梗死区及周边区多点注射BM-MNCs混悬液200μl(5×106个细胞),对照组予等体积PBS液.TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白在心肌细胞中的表达水平,原位杂交法检测bcl-2、bax mRNA表达变化.结果 TUNEL结果显示心肌细胞凋亡指数在移植组明显低于对照组(4周0.095±0.017 vs 0.173±0.018, P<0.05;8周0.0926±0.014 vs 0.182±0.015,P<0.05).免疫组化结果表明,移植组Bcl-2蛋白表达高于对照组(4周12.66±3.37 vs 5.68±2.53, P<0.05;8周13.08±3.09 vs 5.02±1.91, P<0.05),Bax蛋白表达则低于对照组(4周11.48±3.13 vs 20.12±3.91, P<0.05;8周9.98±3.03 vs 22.74±3.12, P<0.05).第4、8周(治疗后第2、6周),移植组bax mRNA积分光密度和阳性面积较第2周降低,并低于对照组(P<0.05).结论延迟至心肌梗死后2周行骨髓单个核细胞移植可抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与对bcl-2、bax表达的调节有关.     

树突状细胞疫苗设计策略的研究进展

近年来，树突状细胞（dendritic cells，DC）作为抗原提呈能力最强的、也是惟一能激活初始型T细胞的专职抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC），已成为肿瘤生物治疗领域备受关注的焦点之一。DC在体内含量甚微，仅占外周单个核细胞（peripheral blood mononudear cell，PBMC）的0．1％～0.5％，但其抗原提呈能力是巨噬细胞的10～100倍。DC强大的免疫刺激功能使其成为极具潜力的癌症及慢性感染性疾病的治疗性疫苗。迄今已有约60多项DC疫苗的临床Ⅰ、Ⅱ期研究正在进行中。尽管已取得显著进展，然而由于缺少临床疗效的客观证据，例如肿瘤消退的评价标准，DC疫苗还不能进入Ⅲ期临床实验。因此，优化DC疫苗的设计和制备策略，最大限度地发挥其免疫诱导潜能成为本领域研究亟须解决的问题之一。     

T细胞亚群的生物学特性及临床应用进展

细胞免疫治疗技术作为一项新的治疗手段,近年来在临床上相对传统疗法发挥了其特有的优势,已逐渐成为研究的热点。T细胞作为免疫细胞的重要组成部分,已在细胞治疗领域得到越来越广泛的应用。作者对辅助型T细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞3类亚群的作用机制与临床应用进行综合评述,并对树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞、自然杀伤T细胞、γδ T细胞、CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞4种T细胞亚群在肿瘤治疗领域的应用进行详细比较。随着医学免疫学、细胞生物学及病理生理学的发展,细胞免疫治疗将发挥其更为重要的作用。     

移植培养表皮细胞片时创面局部抗生素的合理选用

目的：优选出适于移植培养表皮细胞片（ＣＥＡ）的局部抗菌用药方案。方法：将培养的人表皮细胞置于含不同浓度抗生素的培养液中培养３天后，用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定其细胞生长率，同时采用定量铂环法和Ｋ－Ｂ纸片扩散法分别测定其在创面上和在体外的抗菌效果；并以此分别准备烧伤或肉芽创面，观察了对ＣＥＡ早期成活的影响。结果：对培养的人表皮细胞毒性作用为：碘伏（ＰＶＰ－Ⅰ）＞磺胺嘧啶银（ＡｇＳＤ）氟哌酸银（ＡｇＮ）＞丁胺卡那霉素（ＡＫ）／ＡＫ与ＰＲ复合抗生素（ＤＡＢ）＞氧哌嗪青霉素（ＰＲ）；ＡｇＮ和ＤＡＢ在临床使用浓度时抗菌效果较好，以此分别准备烧伤或肉芽创面，显著地提高了ＣＥＡ早期成活率。结论：烧伤创面外用１％ＡｇＮ、肉芽创面外用０．１％ＡＫ和０．２％ＰＲ的ＤＡＢ液湿敷、术后局部预防性应用０．０１％ＡＫ和０．０２％ＰＲ的ＤＡＢ液，可有效地提高ＣＥＡ的早期成活率。     

自制细胞分离器提取表皮细胞治疗白癜风36例

白癜风为皮肤科常见病，病因不明，治疗棘手。目前，国内外医学界普遍认为表皮细胞移植术治疗白癜风疗效较好，尤其对局限性、稳定期的病变，疗效更显著。1999开始，我们应用自制表皮细胞分离器提取含有黑素细胞的表皮移植，在门诊治疗白癜风36例，疗效良好。     

角质细胞生长因子及其受体在葡萄胎恶性变中的作用

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在葡萄胎组织发生、发展及预后中的意义和作用。方法收集葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织,采用免疫组化、原位杂交法分别从蛋白质、mRNA水平检测KGF和KGFR在良恶性葡萄胎组织中的表达,染色强度及阳性细胞数进行统计分析。结果良性葡萄胎组织滋养细胞中KGF和KGFRmRNA、蛋白均有一定程度表达,定位于细胞滋养细胞、合体滋养细胞胞质。恶性葡萄胎组织KGF表达与良性葡萄胎无差异,但KGFR在合体滋养细胞中表达明显高于良性葡萄胎,两者之间有显著性差异(χ2=12·775,P<0·01)。KGFR在侵蚀性葡萄胎及绒癌组织中的表达也明显高于良性葡萄胎(χ2=19·542,χ2=24·723,P<0·001)。结论KGF及KGFR的表达与滋养细胞肿瘤转移密切相关,在葡萄胎恶性变及浸润、转移中起重要作用。     

吃出你的免疫力

免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等）,处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。     

鞘磷脂与细胞生长,凋亡调控

鞘脂分子包括鞘磷脂和鞘糖脂两大类。它们不仅是维持细胞膜结构的重要组分，而且它们的代谢产物参与了细胞的生长、分化和凋亡等重要生理活动。１－磷酸鞘氨醇（ＳＰＰ）和神经酰胺是两类重要的代谢产物，它们通过活化或抑制蛋白激酶、磷酸酶、离子通道，传递细胞生长和凋亡的信号。在细胞内，它们的作用是拮抗的，细胞的生与死往往取决于哪一种作用占了主导地位。本文就鞘磷脂的结构与代谢、神经酰胺和ＳＰＰ的信号转导机制及其在治     

AT细胞对电离辐射敏感原因的探讨

AT细胞具有对电离辐射和拟辐射物质的高敏感性以及DNA合成抑制市性，存在复杂的基因异质性，本从AT细胞的遗传学互补性分析，DNA损伤修复缺陷以及DNA拓扑酶学研究三方面对AT细胞辐射敏感性的分子机理等进行了讨论，认为DNA双链修复缺陷与重接忠实性下降可能是AT细胞电离辐射敏感性的原因。     

一种改良的小胶质细胞培养方法及初步研究

为寻求一种简便、高效的小胶质细胞分离纯化技术,本实验利用“营养丧失”、振摇分离等改良的小胶质细胞培养方法,并结合原位分子杂交、免疫组化染色进行纯度鉴定。获得小胶质细胞比例占95%以上,分离纯化的小胶质细胞在LPS作用后,iNOS mRNA等表达显著。该方法简便易行,纯化程度高,为体外研究小胶质细胞的生物学特性及功能提供了条件。     

正交设计优化低温应激诱导IEC-6细胞损伤条件的实验研究

目的 采用正交实验设计法,优化低温应激诱导大鼠小肠隐窝上皮细胞（intestinal epithelial crypt,IEC-6）损伤的条件。方法 以温度、处理时间和接种密度为正交优化的3个因素,每个因素设定3个水平,分别为处理温度（4 ℃,10 ℃,22 ℃）,低温处理时间（2 h,4 h,6 h）,接种密度（1×105/mL,2.5×105/mL,5×105/mL）,根据三因素三水平设计正交实验表,得到9个实验组,按相应条件处理,细胞增殖/毒性检测试剂法分析细胞毒性,在50%<细胞存活率<90%范围内获得最优组合条件。应用最优组合条件处理实验组IEC 6细胞,同时设置正常对照,镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位。结果 ①在50%<细胞存活率<90%范围内,低温应激诱导IEC 6细胞损伤的最优组合条件为：处理温度4 ℃,接种密度5×105/mL,低温处理时间4 h。②与对照组相比,最优组合条件下实验组细胞失去正常形态,同时线粒体膜电位去极化增强,细胞凋亡显著加重（P<0.01）。表现为前者以早期凋亡为主,细胞凋亡率为（4.41±1.36）%,低强度红色荧光细胞（R2）占比（5.24±0.57）%,后者则以晚期凋亡和坏死为主,细胞凋亡率为（23.70±2.94）%,低强度红色荧光细胞（R2）占比（31.12±3.66）%。结论 在50%<细胞存活率<90%范围内,低温应激诱导IEC 6细胞损伤的最优组合条件为处理温度4 ℃、接种密度5×105/mL、低温处理时间4 h,在该条件下,IEC-6细胞出现明显凋亡。     

骨髓单个核细胞移植对心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡及bcl - 2表达的调节

 目的观察骨髓单个核细胞(BM-MNCs)移植对心肌梗死(MI)后恢复期心肌细胞凋亡及心功能的影响,并探讨其可能机制.方法通过结扎左冠状动脉前降支制成MI模型.2周后第2次开胸在心外膜下梗死区及周边区多点注射BM-MNCs混悬液200μl(5×106个细胞).经超声心动图测定左室射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)等指标.采用DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测bcl-2蛋白在心肌细胞中表达水平.结果术后4周,移植组EF、FS值均高于对照组(P＜0.05);8周时EF、FS值升高达22.4%、28.1%(P＜0.05).TUNEL结果显示心肌细胞凋亡指数在移植组明显低于对照组(4周:0.0946±0.0170 vs 0.1730±0.0180,P＜0.05;8周:0.0916±0.0140 vs 0.1820±0.0150,P＜0.05).免疫组化结果表明,移植组bcl-2蛋白表达高于对照组(4周:12.66±3.37vs 5.68±2.53,P＜0.05;8周:13.080±3.087 vs 5.02±1.91,P＜0.05).结论骨髓单个核细胞移植可抑制MI后心肌细胞凋亡的发生,从而保护心功能,其机制可能与对bcl-2表达的调节有关.     

乙酰胆碱对人表皮细胞冷存的影响

目的：探讨乙酰胆碱（Ach）对人表皮细胞冷存活力的影响。方法：应用人表皮细胞的分离、培养技术，并进行MTT检测、病理切片以及电镜检测等手段进行观察。结果：不同浓度的Ach对冷存的表皮细胞均有一定的保存活力作用，其中以10^-1-10^-10mol/L的浓度为最佳。结论：认为Ach对冷存中的人表皮细胞有一定的保存作用，它可提高表皮细胞的保存活力。