免疫双扩散法诊断乳牛白血病

1981年我们在上海市郊三个公社乳牛场,对临床症状和血检属白血病可疑患牛20头(其中包括血液学、病理解剖和组织学检查属阳性的2头病牛)进行免疫双扩散试验。将待检血清与乳牛白血病病毒的标准混合抗原进行反应,同时用标准抗血清作对照。 试验结果,20头病牛血清中阳性反应8头,其     

扁桃体细胞的表型及其自然杀伤功能

目的比较腭扁桃体细胞 (PTC)与外周血单个核细胞 (PBMC)的表型 ,观察IL 2刺激前后PTC的杀伤活性,探讨扁桃体的免疫功能。方法用流式细胞仪分别检测扁桃体与PBMC表面CD3,CD4 ,CD8 ,CD20,PTA1及9.1C3的表达情况。用4h51Cr释放实验检测静止时及IL 2刺激后PTC中NK细胞杀伤K562活性的改变。结果PTC中CD20的表达率为71.2 % ,PBMC为15.5 % ,且PTC中的平均荧光强度 (MFI)明显高于PBMC。静止的扁桃体细胞杀伤功能非常低 ,经IL 2刺激后杀伤功能显著提高 ,效靶比为200∶1时达到61.5 %。CD3阳性率在PTC和PBMC中分别为32.8%和57.7% ;CD4/CD8的比值分别为6.97和1.11。两种新分子血小板T细胞活化抗原1(PTA1)和9.1C3在扁桃体中均有表达。结论扁桃体单个核细胞中B细胞占多数 ,而且CD20的表达密度明显高于外周血B细胞 ;在T细胞中以CD4 细胞为主 ;IL 2活化后PTC有较高的自然杀伤活性 ;与CTL和NK细胞相关的膜标记PTA1和9.1C3均有表达。     

抗鼻疽菌单克隆抗体的研究——Ⅰ.抗鼻疽菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用马鼻疽菌菌体抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞在聚乙二醇的作用下融合,接种于5块40孔微量培养板,用微量间接血凝和ELISA测定。在应用补体结合反应抗原进行间接血凝测定中,出现4个阳性孔,其中2B1孔的血凝价为1:64。经扩大培养,细胞冻存,并利用有限稀释法2次克隆化。将克隆化后的杂交瘤细胞接种BALB/C小鼠,腹水效价达1:4096,同时对接种鼠诱发的病变进行了形态学、病理组织学及电子显微镜观察。用琼脂双扩散及兔疫电泳发     

抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体的制备和初步鉴定

以纯化的鸡蛋黄ＩｇＧ（ＩｇＹ）为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ筛选，３次克隆化后，获得２株能稳定分泌抗ＩｇＹ单克隆抗体的杂交瘤细胞ＩＧ１１和３Ａ６。用琼脂双扩散法鉴定，两者均为ＩｇＧ１亚类。特异性鉴定表明，１Ｇ１１和３Ａ６。两株单克隆抗体均与鸡血清ＩｇＧ和鸡蛋黄ＩｇＧ起强反应，而不与鸭蛋黄、鹌鹑蛋黄、小鼠血清、大鼠血清、兔血清、羊血清、马血清，以及人血清的ＩｇＧ起反应。１Ｇ１１与３Ａ６的腹水效价分别为３．１×１０－６和６．４×１０－６。     

SARS病毒S1蛋白重组C端片段免疫效果的实验研究

为获得纯化的重组SARS病毒S1蛋白C端 ,研究其刺激机体产生针对SARS病毒免疫应答的规律和机制 ,将编码SARS病毒S1蛋白C端 311个氨基酸残基的基因克隆 ,并在原核表达系统中表达 ,纯化获得了的重组蛋白。利用SARS患者恢复期的血清 ,对纯化的重组S1蛋白进行血清学分析。结果表明 ,本研究中克隆表达的重组蛋白序列与公布的SARS病毒S1蛋白C端的序列相同 ,其编码的重组蛋白相对分子质量约为 5 90 0 0Mr。SARS患者恢复期的血清均与重组蛋白反应 ,在5 9 0 0 0Mr处形成特异性的反应条带 ,而来自SARS流行前的正常人对照血清则不能与重组蛋白反应。在本研究中获得的重组蛋白可以为研究SARS病毒识别宿主细胞受体的过程及其机制提供条件。     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

按常规方法将O型人红细胞免疫的BaLb/C小鼠脾细胞和NS-1骨髓瘤细胞融合。两次克隆后,获得两株分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,H_4D_1和H_4E_(10)。细胞培养上清液经透析浓缩2～5倍,同小鼠Ig分型血清作免疫双扩散试验。结果     

胃癌血清中免疫抑制因子的初步探讨

带瘤动物血清能抑制小鼠脾细胞抗绵羊红细胞的空斑形成细胞反应(PFC),说明其血清中存在免疫抑制因子。1980年Takateru等报道用肺癌血清作PFC免疫抑制试验,阳性率达78％,非癌肺部疾病者为6％,正常人为7％,并提出有可能将此法用于肺癌的免疫诊断。由于此免疫抑制试验的结果与肺癌的组织分型无显著关系,提示可用于其他肿瘤的测定。我们尝试用胃癌血清作PGC免疫抑制试验,以了解,胃癌血清的免疫抑制活性,现将结果简要报道如下。 材料与方法 取C57BL/6J小鼠,每组3只。将0.4ml经56℃     

γδT细胞与哮喘特异性致敏原皮下脱敏疗法的研究

目的　探讨支气管哮喘γδT细胞与特异性致敏原脱敏疗法的关系 ,了解γδT细胞在哮喘发病机制中的作用。方法　应用卵清蛋白 (OVA)致敏并刺激Wistar大鼠 ,制作致敏大鼠哮喘模型 ;再用OVA皮下注射脱敏 ;观察脱敏前后OVA激发反应 ,测定气道反应性 (PC50 ) ;肺组织切片做HE染色观察炎症改变和做原位杂交检测IL 4mRNA和IFN γmRNA表达 ,并采用免疫组化法检测肺组织中γδT细胞数量 ;用ELISA法检测血清IL 4和IFN γ浓度 ,用流式细胞术检测PBMC和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδTCR阳性T细胞百分率。结果　在脱敏组 (C组 ) ,用脱敏前激发浓度的OVA激发不再有明显哮喘发作 ,支气管肺内嗜酸细胞 (Eos)消失、过敏性炎症消除 ,其PC50 与对照组 (即D组和E组 )比较差异均有显著性 (均为P <0 .0 1)、而与正常组 (即A组 )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;C组肺内IL 4mRNA表达及血清IL 4浓度均明显低于D、E组 (均为P <0 .0 1) ,而C组肺内IFN γmRNA表达及血清IFN γ浓度均明显高于A、D、E组 (均为P <0 .0 1) ;与此同时 ,C组肺组织内及BALF中γδT细胞数量则明显低于D、E组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论　特异性致敏原皮下脱敏疗法能纠正哮喘TH1 TH2反应失衡 ,同时伴随肺内及外周血γδT细胞异常分布的恢复 ,提示γδT     

分泌抗人Ig Kappa和Lambda轻链单克隆抗体细胞株的建立及其抗体的临床应用

本文报告获得的5株能稳定分泌高效价的McAb,其中3株为抗人McAb(1D1、5C3、11A7),2株为抗K McAb(4G12、14A6)。这5株杂交瘤细胞冻存一年后复苏其腹水滴度仍 在6.4×10~4～12.8×10~4之间。 特异性分析:①该5株McAb分别与纯的游离λ和κ链进行免疫双扩散试验,只与λ链或κ链形成清晰沉淀线,不与α、γ和μ链发生沉淀反应。②免疫电泳分析,5种McAb与正常     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200～1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景.     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

恶性淋巴瘤单克隆抗体的制备和初步鉴定

采用人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞作为免疫原免疫BALB/C小鼠, 按常规方法融合并经间接ELISA法筛选, 成功地制备了1株抗Raji细胞单克隆抗体(MAb), 命名为SZ138.用琼脂糖双扩散鉴定其为IgG1类, ELISA法测定其腹水效价为1:3.2×104.MAb流式细胞仪检测表明, 该抗体与Raji和Daudi呈阳性反应;与外周红细胞、白细胞(包括淋巴细胞和中性粒细胞)、未活化血小板、内皮细胞株ECV呈阴性反应.免疫组化SP法显示, MAb SZ138识别的抗原在胃肠道的腺体和肝脏有所表达, 而在心、脑、扁桃体、脾、脂肪组织、动脉血管壁、神经节、横纹肌、平滑肌等组织不表达或表达很低.Western blotting分析显示, MAb SZ138可特异识别还原条件下相对分子量为170kD的蛋白多肽.结果提示: MA SZ138对恶性淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的临床意义.     

结肠癌干细胞样细胞的体外培养、鉴定及n-3多不饱和脂肪酸对结肠癌干细胞样细胞的抗增殖作用

 目的:采取无血清培养法培养出SW620细胞球,并对细胞球细胞进行干细胞鉴定;在细胞水平研究n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFAs）对结肠癌干细胞样细胞的作用。 方法: 正常培养人结肠癌细胞株SW620并使其逐步适应无血清培养条件,经无血清培养1周后收集SW620细胞球。用免疫荧光法检测胚胎干细胞标志物SSEA-1和TRA-1-81;采用real-time PCR的方法检测干细胞相关基因Sox-2和Oct-4的表达情况;对比SW620贴壁细胞和干细胞样细胞（CSCLC）在软琼脂上的克隆形成能力;采用裸鼠移植瘤模型比较2种细胞的成瘤能力;用MTS法对比2种细胞在递增浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）或mitomycin C处理下的生长抑制情况;用MTS法、Annexin V/PI染色和台盼蓝染色分别观察递增浓度二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）作用于SW620 CSCLC后细胞生长抑制情况、凋亡情况和死亡情况;MTS法检测5-FU或mitomycin C联合n-3 PUFAs对结肠癌CSCLC增殖的影响。 结果: 无血清培养法成功从SW620中培养出细胞球。细胞球细胞高表达SSEA-1和TRA-1-81并一过性表达Sox-2和Oct-4基因;对5-FU及mitomycin C相对抵抗;在软琼脂上克隆形成率及在裸鼠皮下的成瘤率均显著高于贴壁细胞,表明这些细胞具有干细胞特性,即为来自于SW620的CSCLC。DHA和（或）EPA作用于SW620 CSCLC能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡,并能增强5-FU及mitomycin C对其抑制作用。 结论: 无血清培养法能够从SW620细胞中培养出具有干细胞特性的细胞,它们具有高克隆形成能力及高致瘤性,对化疗药物相对抗拒;DHA和EPA能够诱导SW620来源CSCLC发生凋亡并增强化疗药物的抗肿瘤活性。     

一个新的人B细胞活化抗原—5C5

用活化人B细胞株3D5细胞免疫小鼠和作为筛选的靶细胞,我们建立了产生单克隆抗体5C5的杂交瘤细胞株。此单抗识别的抗原5C5在25μg/ml anti-μ刺激的B细胞,于第10小时开始表达,亦即于G_1期开始表达。5C5细胞百分率随培养时间而增多。在PWM诱导下.外周血单一核细胞中5C5~ 细胞随培养时间而增加,至第3～4天达最高峰,然后减少,至第7天降至本底水平。5C5~ 细胞在不能为BCDF诱导分化至免疫球蛋白分泌细胞(ISC)的B细胞株3D5,Raji和Daudi阳性,但在能为BCDF诱导分化至ISC的CESS和SKW6细胞却不表达。这均表明5C5抗原表达于B细胞活化的早期和中期,但在B细胞终末分化阶段消失。在休止期B细胞、休止期T细胞、PHA激活的T细胞、单核细胞和中性粒细胞,以及在所检测的T细胞株和髓细胞株,5C5抗原均为阴性。~(125)I标记后用单抗5C5免疫沉淀提取的抗原,在还原与非还原条件下电泳,均只有分子量为52000的一条带,表明5C5是一个单链细胞表面蛋白。鉴于5C5抗原的分子量与文献中已报道的B细胞活化抗原分子量不同,以及5C5在细胞株表达的特点,它可能是一个新的人B细胞活化抗原。     

抗巨细胞病毒的单克隆抗体:迅速鉴定临床分离物和在诊断巨细胞病毒肺炎中的初步应用

用巨细胞病毒(CMV)免疫BACB/C鼠;取脾细胞与NS-1鼠骨髓瘤细胞融合,获得二个表型稳定的细胞系,6-E_3和6-C_5这二个细胞系分泌的抗体用标记的protein A作放射免疫分析,二个抗体与4株CMV有很高滴度的反应,而与单纯疮疹Ⅰ型、Ⅱ型病毒和带状疱疹病毒无反应。免疫沉淀反应表明,6-E_3抗体与分子量72,000道尔顿的病毒蛋白反应,而6-C_5抗体与80,000道尔顿的病毒蛋白起反应。用二个单克隆抗体进行间接免疫荧光试验表明,6-E_3抗体与感染后早期出现于胞     

人腭扁桃体上皮内郎格汉斯细胞的观察研究

应用ATP酶组化法、电镜观察和图像分析,对人腭扁桃体上皮内郎格汉斯细胞进行了观察.结果显示:儿童期和青年期腭扁桃体上皮基底层均存在郎格汉斯细胞,其形态结构与皮肤内的相似,但胞体较大,突起略少.青年期腭扁桃体上皮的郎格汉斯细胞的数量、面积、周长均大于儿童期,而ATP酶反应的灰度无显著差别.     

运动神经元单克隆抗体的制备及初步鉴定

以猪脊髓前角运动神经细胞制备的匀浆免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。按常规方法制备、筛选抗运动神经元单克隆抗体。总计３５株杂交瘤细胞所分泌的ＭｃＡｂ，与大鼠半月神经节细胞免疫组化反应均呈阴性，３０株与脊髓前角运动细胞（Ｍｎ）呈阳性反应、其中５株ＭｃＡｂｓ免疫组化反应特异性较强，用ＥＬＩＳＡ方法测定其滴度在２０４８～４０９６之间，免疫双扩散法测定，５株杂交瘤均分泌ＩｇＧ。     

新型佐剂SWZY对弱免疫原性小鼠黑色素瘤瘤苗的免疫增强作用

目的:评价佐剂SWZY对弱免疫原性黑色素瘤瘤苗的免疫增强作用。方法:C57BL/6小鼠分为6组,实验组分别用5种不同配方的佐剂(FCA,FCA IL-2 GM-CSF,FIA IL-2 GM-CSF,FIA SWZY,FIA SWZY IL-2 GM-CSF)和照射灭活的小鼠黑色素瘤细胞株D5制成瘤苗免疫小鼠,对照组免疫用不加任何佐剂的灭活D5黑色素瘤细胞。末次免疫后3d各组取半数动物检测DTH反应、脾细胞的杀伤活性以及免疫小鼠血清及脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-10的水平,剩余半数动物接种未灭活的D5黑色素瘤细胞,3周后再次检测上述各免疫学参数。结果:与对照组小鼠比较,各实验组小鼠的DTH反应及脾细胞的杀伤活性均明显升高(P<0.05),但成瘤后随着肿瘤的增大,则呈下降趋势。成瘤前各实验组小鼠血清及脾细胞培养上清中IFN-γ的水平均高于对照组小鼠(P<0.05),但IL-10的水平均低于对照组小鼠。成瘤后各实验组及对照组小鼠血清及脾细胞培养上清中IFN-γ的水平均下降,而IL-10的水平均明显上升,其中FCA瘤苗组和FIA SWZY瘤苗组免疫小鼠的血清及脾细胞培养上清中IFN-γ的水平仍高于对照组小鼠(P<0.05),IL-10的水平仍低于对照组小鼠(P<0.05)。结论:用5种佐剂配方制成的瘤苗免疫小鼠均能诱导对弱免疫原性肿瘤的细胞免疫应答,并增强Th1型细胞免疫的应答,但随着肿瘤的形成和逐渐进展,细胞免疫应答的效应逐渐减弱。其中佐剂SWZY与FCA的作用相当,但前者的毒副作用较小,有可能成为一种新型的人用肿瘤疫苗的佐剂。