熊果苷和甘草黄酮对B16黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的比较观察甘草黄酮、熊果苷对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响。方法选择系列浓度梯度的药物作用于B16黑素瘤细胞株，测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率变化。结果在实验浓度时，甘草黄酮具有浓度依赖性黑素合成抑制作用，与熊果苷比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论两种化合物均显示有抑制黑素生成的作用，存在一定细胞毒性。     

芦荟苦素对色素化皮肤类似物模型中黑素细胞的影响

目的 观察芦荟苦素、熊果苷及茶多酚对色素化皮肤类似物模型中黑素细胞的影响.方法 体外构建色素化皮肤类似物模型,检测芦荟苦素、熊果苷及茶多酚作用于此模型后对细胞形态、黑素细胞酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响.结果 在色素化皮肤类似物模型中3种退色剂对黑素细胞酪氨酸酶活性有明显抑制作用,可显著减少黑素生成,其中以茶多酚的抑制作用最强,芦荟苦素次之.但茶多酚对细胞的毒性最大,熊果苷和芦荟苦素毒性均较小.结论 3种退色剂对色素化皮肤类似物中黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成均呈浓度依赖性抑制,而茶多酚则显示出较大的细胞毒性(P＜0.05).芦荟苦素所表现出的对酪氨酸酶和黑素的合成有较强的抑制作用及对细胞较低的毒性作用,有可能成为一种比较安全的退色剂.     

阿司匹林对正常人表皮黑素细胞系PIG1细胞黑素生成的影响

目的:观察阿司匹林对体外培养的正常人表皮黑素细胞系PI G1细胞的活力、黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法:用不同浓度的阿司匹林处理PIG1细胞72h,CCK-8比色法测定阿司匹林对PIG1细胞活力的影响;光学显微镜观察细胞形态学变化;氢氧化钠裂解法测定黑素的含量;体外多巴氧化反应法测定酪氨酸酶活性的变化。结果:阿司匹林浓度小于或者等于500μmol/L时无明显细胞毒性;浓度大于或者等于125μmol/L时以剂量依赖方式抑制黑素生成,差异有统计学意义(P<0.05);黑素细胞酪氨酸酶活性无显著性变化(P>0.05)。结论:阿司匹林抑制PIG1细胞的黑素生成,可能应用于色素增多性皮肤病。     

芦荟苦素对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的：研究芦荟苦素对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应。方法：利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系，MTT法测定芦荟苦素对黑素细胞活力的影响，以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性，图像信号采集与分析系统测定黑素含量，并与熊果苷及茶多酚的结果进行比较。结果：芦荟苦素对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制，可显著减少黑素生成量，对黑素细胞活力影响很小。结论：芦荟苦素对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显著抑制作用，且细胞毒性很低，值得进一步研究。     

多巴染色与光密度法在细胞水平评价原料美白功效的应用研究

目的：在细胞水平评价化妆品原料的美白功效。方法：体外培养小鼠黑素瘤细胞B16,通过多巴特异性染色,利用平均光密度法检测化妆品原料对细胞中黑素生成的抑制作用。结果：多巴对细胞内黑素具有特异性染色,浓度为25μg/ml的曲酸对黑素细胞内黑素生成的抑制率为（48.44±3.44）%,板内标准偏差值仅为7.09%,板间标准偏差值小于7.22%,曲酸、白藜芦醇和绿茶提取物均对细胞内黑素的生成具有较为明显的抑制作用,而桑白皮提取物对细胞内黑素生成几乎没有抑制作用。结论：采用多巴染色和平均光密度的方法检测黑素瘤细胞中黑素含量,精度较高、板间板内误差较小,能够成功用于化妆品原料美白功效的评测。     

芦荟苦素与熊果苷对体外培养的黑素细胞协同影响的实验研究

目的　研究芦荟苦素与熊果苷协同对体外培养的正常人表皮黑素细胞的效应。方法　在体外建立正常人表皮黑素细胞培养系 ,通过MTT法测定芦荟苦素与熊果苷的混合物对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,用图像信号采集与分析系统测定黑素含量 ,并与单纯芦荟苦素组及熊果苷组进行比较。结果　芦荟苦素与熊果苷的混合物对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性有明显抑制作用 ,可显著减少黑素生成量 ,与单一药物对照组相比 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,而对黑素细胞活力影响很小 ,与单一药物对照组相比 ,差异无显著性意义。结论　芦荟苦素与熊果苷的混合物对体外培养的黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显著抑制作用 ,并较单一药物作用增强 ,说明两者呈协同作用。     

人源Dickkopf1原核表达产物对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的:观察人源Dickkopf1原核表达产物(DKK1蛋白)对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖情况;光学显微镜观察细胞形态学变化;氢氧化钠裂解法测定黑素合成;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:DKK1蛋白对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P<0.05);光学显微镜观察到DKK1蛋白作用的黑素细胞胞体较大,形态略呈多角形,树突较粗短;并能使黑素合成显著下降(P<0.05);使酪氨酸酶活性显著减弱(P<0.05)。结论:DKK1蛋白能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,为DKK1蛋白应用于治疗色素增多性疾病奠定实验基础。     

N-乙酰氨基葡萄糖对小鼠B16黑素瘤细胞凋亡的影响

目的研究N-乙酰氨基葡萄糖对体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞增殖和凋亡、酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法采用MTT法、流式细胞仪技术和投射电镜方法测定N-乙酰氨基葡萄糖对培养的小鼠B16黑素瘤细胞的增殖抑制作用和细胞的凋亡,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果25mM、50mM和100mMN-乙酰氨基葡萄糖明显抑制B16黑素瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡并抑制黑素生成,50mM和100mMN-乙酰氨基葡萄糖明显抑制酪氨酸酶活性,差异具有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论N-乙酰氨基葡萄糖抑制培养的小鼠B16黑素瘤细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

具有透皮美白功效的短肽筛选和评价研究

目的：筛选具有透皮性能的短肽并评价其美白功效。方法：采用噬茵体表面展示技术透WiStar大鼠腹部皮肤筛选透皮短肽,以L-多巴为底物,检测短肽对酪氨酸酶活性的抑制作用。体外培养B16小鼠黑素瘤细胞,检测短肽对细胞内黑素生成的抑制作用。以豚鼠为实验对象,考察短肽对豚鼠皮肤内黑素的生成抑制作用。结果：通过噬菌体表面展示技术筛选出4条透皮短肽,其中一条氨基酸序列为ACSSQPPYACG的短肽P1,其对酪氨酸酶活性的半数抑制浓度IC50值为25．64ug／ml,能够明显抑制B16小鼠黑素瘤细胞和豚鼠皮肤内黑素生成。结论：成功建立了利用噬菌体表面展示技术筛选具有美白功效短肽的方法,为美白成分的筛选提供了新的途径。     

莫诺苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:探讨莫诺苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响。方法:将黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)以1:2比例建立共培养模型,以不同浓度莫诺苷进行干预,通过MTT法测定细胞增殖率;NaOH裂解法测定黑素含量;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:与阴性对照组相比,10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对细胞增殖无影响(P>0.05),10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对共培养体系酪氨酸酶活性和黑素合成有极显著差异(P<0.01);与阳性对照药熊果苷组相比,10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对共培养体系酪氨酸酶活性和黑素合成有差异(P<0.05或P<0.01)。结论:莫诺苷可能通过抑制酪氨酸酶活性来抑制共培养模型的黑素合成。     

中药及组方对常见厌氧菌的体外抑菌作用

为了探讨中药对厌氧菌的作用，我们采用具有清热解毒、活血化瘀、通里攻下功用的五十种常用中草药及１２株临床常见厌氧菌，进行了体外抗菌实验。在体外中药抑菌作用的初步筛选实验基础之上，我们选用了有较强抗厌氧菌作用的黄连、黄岑、木通、大黄、加上活血化瘀药物丹参，组成方剂，并暂定名为“厌氧灵”。本实验研究采用琼脂稀释法，对厌氧灵及组成的五种单味药物分别进行了抑菌实验，并测定了最小抑菌浓度。实验结果表明，五十种中草药中，黄连、黄岑、大黄、五味子、木通对六种以上的脆弱类杆菌的抑菌环直径分别为１８ｍｍ、２２ｍｍ。厌氧灵对包括脆弱类杆菌在内的六种厌氧菌有良好的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌在内的三种需氧菌亦有较好的抑菌作用。黄连、黄芩、木通、大黄、丹参和厌氧灵对脆弱类杆菌的最小抑菌浓度分别为０．０６２ｇ／ｍｌ、０．５００ｇ／ｍｌ、０．０３１ｇ／ｍｌ、０．１２５ｇ／ｍｌ、０．５００ｇ／ｍｌ、０．０３１ｇ／ｍｌ。说明厌氧灵在体外可同时抑制某些厌氧菌和需氧菌的生长。     

熊果苷对A375细胞与HACAT共培养模型中黑素合成的影响

目的：体外构建研究色素问题的黑素瘤细胞（A375）与角质形成细胞（HACAT）直接接触的共培养模型,利用熊果苷对此共培养体系进行验证。方法：MEM培养基分别培养A375细胞与HACAT细胞,A375细胞与HACAT以1：2的比例共培养,构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测熊果苷对细胞增殖、酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响。结果：A375细胞与HACAT能共同存活,1.0mg/ml、0.5mg/ml和0.2mg/ml熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：成功构建了A375细胞与HACAT细胞直接接触的共培养模型;脱色药熊果苷作用于本模型后引起酪氨酸酶及黑素的变化与预期结果一致;本模型为进一步研究色素问题奠定了基础。     

清胰汤Ⅰ号主要药味对胰蛋白酶活性的抑制作用（体外试验）

目的：研究某些治疗急性胰腺炎中药对胰蛋白酶活性的抑制作用。方法：应用测定胰蛋白酶活性的反应系统测走了某些中药的抑酶作用。结果：所选择的中药，如元胡、大黄及栀子都有抑酶作用且其抑酶作用随应用浓度的增加而增加。此外，活血化瘀中药中桃仁几乎没有抑制作用而赤芍或丹皮的抑制胰蛋白酶作用甚至比根子还强。结论：包括元胡、大黄和振子等的某些中药对胰蛋白酶有不同程度的抑酶作用。     

人永生化胰腺星形细胞系的构建及其功能的验证

目的构建人永生化胰腺星形细胞(PSCs)系并探讨其生物学功能。方法采用outgrowth方法提取人原代胰腺星形细胞(hPSCs),慢病毒感染方法导入SV40LT基因和hTERT基因,嘌呤霉素筛选稳定高表达两个基因的细胞(im PSCs),qRT-PCR和Western bolt方法检测表达水平;CCK8法、核型分析、免疫荧光、体内成瘤实验检测im PSCs生长曲线,染色体数目,胶原基质蛋白表达和有无恶性表型转化;共培养方法、CCK8法、细胞划痕、迁移侵袭方法检测imPSCs促瘤作用。结果hPSCs呈多角形和梭形,慢病毒感染的im PSCs,显微镜下有亮绿色荧光;im PSCs细胞高表达SV40LT基因和hTERT基因;im PSCs生长曲线呈典型的“S”型,染色体数目增多,体内不能成瘤,表达α-SMA、Collagen I、Fibronectin,具有PSCs的生物学功能和特点;其与胰腺癌细胞共培养后,明显促进肿瘤生长,与人原代PSCs功能相当。结论采用慢病毒转染SV40LT基因和hTERT基因可成功构建人胰腺星形细胞永生化细胞系,为胰腺星形细胞本身及胰腺癌微环境相关研究提供实验材料和模型。     

一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A表达的影响

目的：探讨在体外一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A（SP-A）mRNA和蛋白表达的影响。方法：Ⅱ级SD雄性大鼠,腹腔注射25ml0.25%胰蛋白酶消化液后,2h后处死大鼠,获取的腹膜间皮细胞用DMEM/F12培养液（含10%FBS）培养于6孔培养板中,待细胞传致第3代时,加入不同浓度的SNAP（nirtic oxide donor）分为：正常对照组、0.6μmol/LSNAP组、0.9μmol/L SNAP组、1.2μmol/L SNAP组、2.4μmol/L SNAP组,每个组6孔,培养24h后提取细胞RNA及蛋白;另外,将1.2μmol/L SNAP与腹膜间皮一起培养,分别于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h及48h时提取细胞RNA及蛋白。分别用RT-PCR及Western blot检测腹膜间皮细胞SP-A mRNA的表达和蛋白的合成。结果：与正常对照组相比,SNAP能抑制SP-A mRNA的表达和蛋白的合成（P〈0.05）,且随着SNAP浓度的增高而增加,当SNAP浓度为1.2μmol/L时,随着培养时间的增加,SP-A mRNA的表达和蛋白的合成也逐渐被抑制。结论：一氧化氮能抑制腹膜间皮细胞SP-AmRNA的表达和蛋白的合成,且呈剂量及时间依赖性。     

内皮素受体拮抗剂对前列腺癌细胞PC3和成骨细胞相互作用的影响

目的 在细胞共培养微环境下,观察内皮素(ET)受体拮抗剂阻断内皮素轴对前列腺癌细胞PC3和成骨细胞SaOS_2相互作用的影响.方法 利用细胞体外共培养系统,比较前列腺癌细胞PC3和成骨细胞SaOS_2在共培养微环境下和单独培养环境下细胞增殖的差异.共培养微环境下,分别以ET_A受体(ET_AR)拮抗剂BQ123和ET_B受体(ET_BR)拮抗剂BQ788阻断相应的ET受体,观察其对前列腺癌细胞和成骨细胞增殖的影响.同时,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组培养液中的ET-I浓度,通过逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)测定PC3细胞、SaOS_2:细胞ET-I及其受体的mRNA表达,比较它们的表达差异.结果 与单独培养比较,共培养微环境下的PC3细胞和SaOS_2细胞的增殖数量均显著升高(P均＜0.05).ET_AR拮抗剂BQ123能阻断共培养微环境对SeOS:细胞的生长促进作用,部分阻断共培养微环境对PC3细胞的生长促进作用,而ETBR拮抗剂BQ788则无显著的干预作用.EUSA结果显示共培养组培养液中ET-1浓度[(14.26±1.06)βg/L/10~5个细胞]显著高于单独培养组[(6.58±0.74)pc/L/105个细胞,P＜0.05].RT-PCR结果显示PC3细胞表达ET-1和ET_AR,SaOS_2细胞只表达ET_AR;与单独培养比较,共培养微环境下PC3细胞ET-l的表达显著升高(P＜0.05),而PC3细胞和SaOS2细胞ET_AR的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ET-1及ET_AR构成的内皮素轴是共培养微环境中前列腺癌细胞PC3和成骨细胞之间相互作用促进增殖的重要链接因子,而ETAR拮抗剂能有效地抑制两者间的相互作用,抑制PC3细胞增殖.     

An immunohistochemical study of intracranial germ cell tumours

Summary Histologically verified intracranial tumours, mainly germ cell tumours of the pineal and suprasellar regions, were studied immunohistochemically using anti-serum of alpha fetoprotein (AFP), human chorionic gonadotropin (HCG), carcinoembryonic antigen (CEA), human placental lactogen (HPL), pregnancy specific -1 glycoprotein (SP-1), glial fibrillary acidic protein (GFAP), S-100 and neuron specific enolase (NSE). In germinomas, HCG positive cells were occasionally demonstrated in cells presenting as syncytiotrophoblastic giant cells (STGC), and GFAP and S-100 positive cells were found in the surrounding gliotic lesions. Teratomas were positive for CEA in their epithelial components. Endodermal sinus tumours were positive for AFP, choriocarcinomas for HCG and SP-1, and embryonal carcinomas for AFP, HCG and SP-1. HCG and SP-1 positive cells were demonstrated in STGC. As for the relationship between serum AFP level and tissue localization, many cases presenting a serum AFP level exceeding 220 ng/ml were positive for AFP in tumour tissue.     

Physiologic levels of resistin induce a shift from proliferation to apoptosis in macrophage and VSMC co-culture

Background

Resistin, an adipokine with inflammatory properties, has been associated with plaque vulnerability. Vascular smooth muscle cells and macrophages are the major cellular components in advanced atherosclerotic plaques and interdependently affect plaque stability. The purpose of this study was to examine the effects of resistin on the interactions of vascular smooth muscle cells and macrophages using co-culture systems.

人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养体外模型的建立

目的：建立人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养的体外模型,观察α-促黑素以及烟酰胺对黑素在两细胞间传递的影响。方法：分别培养人表皮黑素细胞和HaCaT细胞,接种黑素细胞48h后再将HaCaT细胞以1：2的比例与黑素细胞共培养,分别以不同浓度的α-促黑素和烟酰胺干预共培养的细胞9天,Fontana—Masson银染法观察共培养模型中黑素颗粒在两细胞间传递的情况。结果：培养3天即可观察到约20％HaCaT细胞核周围出现从邻近黑素细胞传递来的黑素颗粒,随着时间的延长阳性染色HaCaT细胞比例逐渐增多,第7天达到高峰（约80％）,α-促黑素以及烟酰胺分别以浓度依赖方式促进／抑制了黑素颗粒在两细胞间的传递。结论：成功建立了人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养体外模型,为大规模筛选促／抑黑素传递的药物奠定了实验基础。     

枸杞、黄芪对大鼠睾丸支持细胞功能的影响

目的:探讨中药枸杞、黄芪对大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)功能的作用及机制。方法:对18~22 d的SD大鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,用MTT法检测枸杞(50、100、200、400μg/m l枸杞多糖)、黄芪(12.5、25、50、100 g/L黄芪提取液)对Sertoli细胞增殖的影响,用一步法RT-PCR方法检测枸杞、黄芪对正常培养状态和过氧化物(H2O2)损伤状态下Sertoli细胞抑制素(INH)βB亚基转录的影响。结果:高浓度枸杞(400μg/m l)、黄芪(100 g/L)对Sertoli细胞的增殖有促进作用(P<0.05),高浓度杞芪合剂(400μg/m l枸杞+100 g/L黄芪)对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(P<0.01);在正常培养状态下,枸杞、黄芪及杞芪合剂对Sertoli细胞INHβB亚基的转录具有明显促进作用(P<0.01);在过氧化物(H2O2)损伤状态下,Sertoli细胞INHβB亚基的转录明显降低(P<0.01),黄芪对Sertoli细胞INHβB亚基的转录水平具有上调作用(P<0.05),枸杞、杞芪合剂对其转录水平具有明显上调作用(P<0.01)。结论:枸杞、黄芪及杞芪合剂对体外培养的Sertoli细胞INHβB亚基的转录具有促进和保护作用。