辛伐他汀对慢性阻塞性肺病大鼠血浆及肺泡灌洗液中5-羟色胺表达的影响

目的观察5-羟色胺(HT)在吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血浆及肺泡灌洗液中的表达,探讨5-HT在COPD发病中的作用及辛伐他汀对其影响。方法 1采用烟熏法建立COPD大鼠模型。将30只大鼠随机分为三组:对照组、烟雾暴露组、辛伐他汀组各10只。自烟雾暴露之日起辛伐他汀组给予辛伐他汀(5 mg/kg),于烟雾暴露前灌胃,每日一次。16 w后,测量体重、肺动脉压(PAP)、肺功能,并对肺组织病理形态学进行观察。2采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测5-HT在COPD大鼠血浆及肺泡灌洗液中的含量,观察辛伐他汀对其表达的影响。结果 1三组实验前体重无明显差异(P>0.05)。实验结束时,烟雾暴露组体重较对照组明显下降(P<0.01);辛伐他汀组体重较烟雾暴露组升高(P<0.05)。2与对照组比较,烟雾暴露组平均内衬间隔(MLI)明显增加(P<0.01),平均肺泡数(MAN)明显降低(P<0.01);辛伐他汀治疗后MLI降低(P<0.05),MAN增加(P<0.01)。3相对于对照组,烟雾暴露组动态肺顺应性(Cdy)、用力呼气容积(FEV)0.3/用力呼气量(FVC)明显下降(P<0.05),呼气相气道相应阻力(Re)、吸气相气道相应阻力(Ri)升高(P<0.05);辛伐他汀组治疗后Re、Ri、FEV0.3/FVC、Cdy相对于烟雾暴露组均有改善(P<0.05)。与对照组比较,烟雾暴露组和辛伐他汀组m PAP明显升高(P<0.05)。辛伐他汀治疗后m PAP明显降低(P<0.05)。4三组右心和左心室、室间隔重量比〔RV/(LV+S)〕值差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,烟雾暴露组RV/(LV+S)增大(P<0.05);辛伐他汀组治疗后RV/(LV+S)降低(P<0.05)。5与对照组比较,烟雾暴露组及辛伐他汀组血浆及肺组织中5-HT较对照组明显升高(P<0.05)。肺泡灌洗液中5-HT水平无明显变化(P>0.05)。辛伐他汀组治疗后血浆及肺组织中5-HT降低(P<0.05),肺泡灌洗液中5-HT水平无明显变化(P>0.05)。65-HT在血浆中及肺组织中的表达与右心室肥厚指数(RVHI)呈正相关(r=0.702,0.543,P=0.000,0.002),与m PAP呈正相关(r=0.772,0.821,P=0.000)。结论 1大鼠香烟烟雾暴露16 w建立COPD模型成功。25-HT在COPD发生、发展过程中有明显的变化及联系,在COPD发生发展中起重要作用。辛伐他汀可能是治疗COPD有效的方法之一。     

单纯烟雾暴露建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的方法学研究

目的探讨单纯烟雾暴露建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型的方法,为COPD动物模型的建立提供参考。方法将24只Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾暴露8周组、烟雾暴露10周组、烟雾暴露12组,每组6只。将烟雾暴露组大鼠置于自制玻璃染毒箱中,烟雾暴露2 h/d,5 d/周;对照组大鼠同时放在另一自制玻璃染毒箱中,自由呼吸空气。观察各组大鼠一般情况,比较各组大鼠肺功能指标、支气管肺泡灌洗液炎性细胞计数及肺组织病理学检查结果。结果 (1)一般情况:对照组大鼠整个实验过程中活动正常,毛发白亮细密,精神佳,无气促、发绀,食量好;烟雾暴露8周组大鼠活动减少,倦卧,毛发黄涩无光泽;烟雾暴露10周组大鼠活动进一步减少,精神不佳,毛发黄涩,食欲下降,间歇咳嗽偶有喘息;烟雾暴露12周组大鼠活动较烟雾暴露8周组、烟雾暴露10周组大鼠减少,精神萎靡,毛发枯糙发黄脱落,口唇及指抓发绀,消瘦。(2)肺功能指标:烟雾烟雾暴露12周组大鼠0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)和肺动态顺应性(Cdyn)低于对照组、烟雾暴露8周组、烟雾暴露10周组,吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)高于对照组、烟雾暴露8周组、烟雾暴露10周组(P0.05);烟雾暴露8周组和烟雾暴露10周组大鼠Cdyn低于对照组(P0.05)。(3)支气管肺泡灌洗液炎性细胞计数结果:烟雾暴露8周组、烟雾暴露10周组、烟雾暴露12周组大鼠炎性细胞计数和中性粒细胞分数高于对照组,巨噬细胞分数低于对照组(P0.05);但4组大鼠淋巴细胞分数比较,差异无统计学意义(P0.05)。(4)肺组织病理学检查结果显示,对照组大鼠支气管和肺泡结构清晰,气道黏膜上皮细胞排列整齐,肺泡大小均匀;烟雾暴露8周组大鼠肺组织以炎性细胞浸润为主;烟雾暴露10周组大鼠肺组织炎性细胞浸润更明显,气管壁平滑肌、纤维结缔组织增生,可见少许肺泡壁破坏;烟雾暴露12周组大鼠气道上皮脱落,气道内黏液和细胞阻塞,肺组织结构破坏明显,肺泡扩张,肺泡间隔断裂,相邻肺泡融合形成肺大泡,小血管壁增厚。结论在自制玻璃染毒箱中单纯烟雾暴露12周可成功建立COPD大鼠模型。     

辛伐他汀对COPD大鼠肺组织血红素氧化酶-1及炎性因子表达的影响

目的探讨辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织血红素氧化酶(HO)-1表达的影响。方法 24只SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组8只。对照组:第1、15天气管内滴入生理盐水0.2 ml,其余时间正常喂养;烟雾暴露组:第1、15天气管内滴入脂多糖0.2 ml,将8只大鼠放进大鼠吸烟装置染毒箱内COPD建模;辛伐他汀组:建立COPD模型方法同上,每次熏烟结束后,给予辛伐他汀灌胃治疗(5 mg/kg),置于相同的环境中喂养。右心导管测定大鼠平均肺动脉压(m PAP),以右心室肥厚指数(RVHI)作为评价右心室肥厚的指标。苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肺组织病理学变化。实时定量PCR(RT-PCR)方法测定肺组织HO-1 mRNA的表达,通过Western印迹及免疫组织化学方法检测肺组织HO-1蛋白的表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平。结果辛伐他汀组m PAP较烟雾暴露组下降,烟雾暴露组较对照组升高(P<0.05)。辛伐他汀组RVHI较烟雾暴露组下降(P<0.05)。辛伐他汀组镜下观察气管壁增厚,管腔变窄且肺动脉壁增厚,但是较烟雾暴露组减轻。免疫组织化学实验结果显示,辛伐他汀组肺动脉平滑肌细胞、内皮细胞膜上出现的棕黄色颗粒最多。辛伐他汀组HO-1 mRNA是对照组的(7.26±2.11)倍。烟雾暴露组大鼠HO-1表达增强,辛伐他汀治疗后表达进一步增强。在BALF中,IL-6和TNF-α在辛伐他汀组、烟雾暴露组较对照组表达增加(P<0.05)。辛伐他汀组、烟雾暴露组均较对照组血清IL-6表达增加(P<0.05),TNF-α在辛伐他汀组、烟雾暴露组较对照组表达增加(P<0.05),辛伐他汀组中TNF-α表达量较烟雾暴露组降低(P<0.05)。结论辛伐他汀能够促进COPD表达HO-1,减轻COPD炎症反应,改善COPD的发生发展及预后。     

辛伐他汀对烟雾暴露大鼠肺泡上皮细胞的作用

目的 探讨辛伐他汀对烟雾暴露大鼠肺气肿肺泡上皮细胞及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 24只12周龄健康雌雄各半Wistar大鼠随机数字表法分为对照组、烟雾组、药物组和烟雾+药物组(烟+药组),每组6只,同步饲养16周,雌雄大鼠同步、分箱饲养16周.分别采用逆转录PCR法测定肺组织中VEGF的mRNA表达,酶联免疫吸附法测定BALF和组织中VEGF含量,免疫组织化学二步法检测VEGF和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 烟+药组大鼠肺泡上皮细胞PCNA阳性细胞构成比[(10.3±2.0)%]明显高于烟雾组[(4.8±0.8)%];BALF和组织匀浆中VEGF水平[(187±15)ng/L和(6782±50)ng/L]接近于对照组[(200±20)ng/L和(7558±330)ng/L],明显高于烟雾组[(71±16)ng/L和(4149±110)ng/L];肺泡和支气管上皮细胞中VEGF表达[(67.7±5.0)%和(49.0±3.0)%]近似于对照组[(68.3±3.3)%和(51.3±2.9)%],明显高于烟雾组[(27.0±5.9)%和(16.3±2.7)%].烟+药组与烟雾组比较,差异均有统计学意义(t值为1.117～12.001,均P＜0.01).结论 辛伐他汀可部分促进肺泡上皮细胞增殖,提高肺组织中VEGF含量及肺泡上皮细胞表达,延缓烟雾暴露所致大鼠肺气肿的进展.     

生长因子在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑中的作用

目的　观察转化生长因子 (TGF) β1、表皮生长因子 (EGF)及碱性成纤维生长因子(bFGF)在慢性阻塞性肺疾病 (COPD)大鼠模型肺内表达与分布的变化 ,探讨其与气道重塑的关系及药物干预的影响。方法　两次气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠COPD模型 (B组 )。C组于制作模型后雾化吸入肝素溶液。D组于制作模型后静脉注射 2次TGF β1单抗。用图像分析系统检测支气管平滑肌及胶原厚度 ,用免疫组化及原位杂交法检测各生长因子蛋白和基因表达的相对含量。结果　与A组 (对照组 )相比 ,B组大鼠支气管平滑肌及胶原纤维显著增厚 (P <0 0 1) ,三种生长因子在支气管黏膜上皮、肺小动脉内皮和肺泡巨噬细胞的表达显著增强 (P <0 0 0 1～ 0 0 5 )。D组TGF β1较B组显著减少 (P <0 0 1) ,C组各生长因子有减少趋势。支气管上皮细胞三种生长因子与平滑肌厚度、TGF β1与胶原厚度、肺小动脉内皮细胞TGF β1及bFGF与平滑肌厚度之间均呈正相关 (P <0 0 5～0 0 1)。结论　TGF β1、EGF及bFGF在气道重塑和肺小动脉重建中可能起重要作用。     

HO-1对肺气肿大鼠模型肺组织MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察血红素加氧酶1（HO-1）对肺气肿大鼠模型肺组织单核细胞趋化蛋白1（MCP1）和转化生长因子B。（TGF-β1）表达的影响。方法Wistar雄性大雄18只,随机分为正常未暴露组（c）、烟雾暴露组（sM）、氯化血红素（Hemin）＋烟雾暴露组（H）,每组6只。利用烟雾暴露方法建立大鼠肺气肿模型,采用HE染色观察肺组织病理形态学变化,细胞学计数和分类BALF,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF、血清中MCP1的浓度,免疫组织化学法测定肺组织内的HO-1、TGF-β1。表达情况。结果与SM组比较,H组病理改变轻,BALF中白细胞总数、巨噬细胞（AM）、中性粒细胞数下降,肺组织HO—1的表达明显升高,肺组织TGF-β1,的表达及BALF中MCP1的浓度明显下降。结论MCP—1和TGFG-β1与COPD的发病密切相关,HO-1的早期干预可抑制AM、中性粒细胞、MCP-1、TGF-β1,表达,从而减轻了肺组织及气道炎症。     

白介素-17、转化生长因子-β1在烟雾暴露大鼠肺组织中的表达及与肺血管重塑的关系

目的观察烟雾暴露大鼠肺组织中IL-17表达及对肺血管重塑的影响,并探讨其作用机制。方法将72只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组和烟雾暴露+药物干预组,每组各24只。分别在造模成功后8周、12周取组织行苏木精-伊红染色和Masson染色,观察大鼠肺血管重塑的程度,并采用免疫组化法检测大鼠肺组织中IL-17、Smad3的表达及肺动脉中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,采用ELISA法检测大鼠血清中IL-17水平。结果与同期对照组相比,烟雾暴露组8周、12周大鼠肺血管管壁面积/血管总面积比值(WA%)及管壁厚度和血管直径的比值(WT%)都明显增大(P0.05);血清IL-17水平,肺组织中IL-17、Smad3及肺动脉中TGF-β1表达量明显增加(P0.05);且烟雾暴露组12周时,上述指标水平均明显高于8周的大鼠(P0.05)。烟雾暴露+药物干预组除TGF-β1水平外,其余上述指标水平均高于同期对照组,但低于同期烟雾暴露组。烟雾暴露组肺动脉中TGF-β1表达水平与WA%、WT%以及肺组织IL-17、Smad3表达水平均呈正相关(P0.01)。结论烟雾暴露后大鼠肺组织及血清中IL-17表达增高,IL-17可能参与了肺血管重塑过程,而TGF-β/Smad信号转导途径可能是调节血管重塑工程的关键之一。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠慢性阻塞性肺疾病模型细胞因子和基质金属蛋白酶的影响

目的观察大鼠烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFNγ)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-12、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)的表达及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其的影响.方法Wistar大鼠30只,分为3组,每组10只;(1)A组(烟雾暴露COPD模型组)建立大鼠烟雾暴露COPD模型;(2)B组(NAC干预组)从烟雾暴露2个半月开始用NAC灌胃,800 mg/kg,1次/d;(3)C组健康对照组.小动物肺功能仪测3组大鼠的肺功能.ELISA测支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中IL-4、IFNγ的含量,逆转录(RT)-PCR测肺组织中MMP-9、MMP-12、TIMP-1的表达.结果(1)与C组比较,A组大鼠第0.3秒钟用力呼气容积(FEVo.3)/用力肺活量(FVC)、动态顺应性(Cdyn)降低,呼气阻力(Re)升高,肺平均内衬间隔(Lm)增加,平均肺泡数(MAN)减少(P＜0.05);NAC干预后,FEV0.3/FVC、Cdyn、Re明显改善(P＜0.05),Lm、MAN无变化.(2)与C组比较,A组大鼠肺组织中IL-4、IL-4/IFNγ比值升高,IFNγ降低(P＜0.05),NAC干预后,IL-4/IFNγ比值降低,IFNγ升高(P＜0.05),IL-4无明显变化;BALF中IL-4、IFNγ、IL-4/IFNγ比值无明显变化,NAC干预后,IL-4、IL-4/IFNγ比值无变化,IFNγ升高(P＜0.05).(3)与C组比较,A组大鼠肺组织中MMP-12mRNA表达增强,MMP-12/TIMP-1比值升高(P＜0.05),TIMP-1无差异(P＞0.05);NAC干预后,MMP-12、TIMP-1、MMP-12/TIMP-1比值与A组比无差异(P＞0.05).结论吸烟可使IL-4升高,IFNγ降低,MMP-12/TIMP-1比值升高,这可能是吸烟引起肺功能改变、导致肺气肿的原因之一.NAC干预后,IL-4/IFNγ比值恢复至正常水平,肺功能亦改善,但对MMP-12/TIMP-1比值及肺气肿无影响.     

SB203580对烟雾暴露的哮喘大鼠的影响

目的建立烟雾暴露的支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型,观察p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)抑制剂SB203580对其的治疗作用。方法将Wistar大鼠随机分为4组,即正常对照组、哮喘组、烟雾暴露的哮喘组及SB203580干预组。动物肺功能仪测定大鼠呼气阻力、吸气阻力及肺顺应性,观察肺组织病理学改变,通过ELISA检测大鼠肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的表达。结果与烟雾暴露的哮喘组相比,SB203580干预组大鼠的气道阻力显著下降,肺顺应性显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);气道炎症明显减轻;肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可以改善烟雾暴露的哮喘大鼠的气道炎症,减轻其支气管收缩反应。     

SB203580对烟雾暴露的哮喘大鼠的影响

目的 建立烟雾暴露的支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型,观察p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580对其的治疗作用.方法 将Wistar大鼠随机分为4组,即正常对照组、哮喘组、烟雾暴露的哮喘组及SB203580干预组.动物肺功能仪测定大鼠呼气阻力、吸气阻力及肺顺应性,观察肺组织病理学改变,通过ELISA检测大鼠肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的表达.结果 与烟雾暴露的哮喘组相比,SB203580干预组大鼠的气道阻力显著下降,肺顺应性显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);气道炎症明显减轻;肺组织中IL-4、IL-5和IL-8的含量显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可以改善烟雾暴露的哮喘大鼠的气道炎症,减轻其支气管收缩反应.     

CD+4 Foxp3+调节性T细胞对断烟大鼠肺部炎症及肺气肿的作用

目的 观察香烟暴露及断烟后大鼠Treg细胞的变化,探讨Treg细胞与断烟后大鼠肺部炎症反应和肺气肿持续存在的关系.方法 将50只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为5组:健康对照组、香烟暴露组和断烟组,其中健康对照组和香烟暴露组又分为12周组(对照1组和实验1组)和24周组(对照2组和实验2组).香烟烟雾暴露法建立大鼠肺气肿模型.HE染色观察大鼠肺气肿的改变,酶联免疫吸附法检测大鼠BALF中白细胞介素(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测大鼠外周血和肺实质中CD4+Foxp3调节性T细胞(Treg细胞)比例,实时定量PCR法检测大鼠外周血和肺实质中Foxp3的mRNA表达.多组间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用SNK和Games-Howell检验.结果 实验1组和实验2组平均内衬间隔(MLI)为(64.9±5.3)μm和(77.9±11.5)μm,均明显高于对照1组和对照2组的(39.0±3.8)μm和(40.3±2.7)μm,差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组MLI[(71.5 ±5.8)μm]介于实验1组和实验2组之间,但肺气肿程度较实验1组明显加重,差异有统计学意义(P＜0.01).实验1组和实验2组IL-8水平[(68±17)ng/L和(85±16)ng/L]及TNF-α水平[(14.1±1.8)ng/L和(20.1±8.7)ng/L]均明显高于对照1组和对照2组[(44±8)ng/L、(43±9)ng/L及(6.3±2.3)ng/L、(5.8±1.6)ng/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).实验1组和实验2组肺实质中CD+4Foxp3+Treg细胞[(6.6±0.8)%和(5.3±0.9)%]明显少于对照1组和对照2组[(9.0±1.0)%和(9.6±0.9)%],差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组肺实质中CD+4Foxp3+Treg细胞[(7.2±0.6)%]与实验1组比较虽无明显减少,但未能恢复至正常水平.实验1组和实验2组肺实质中Foxp3的mRNA表达量(17±7和9±7)明显低于对照1组和对照2组(39±6和42±7),差异均有统计学意义(P＜0.01);断烟组肺实质中Foxp3的mRNA表达量(21±9)与实验1组比较未见明显减少,但未能恢复至正常水平.结论 香烟暴露肺气肿大鼠肺内调节性T细胞下调可能导致大鼠肺内炎症反应放大,并在断烟后持续存在,提示调节性T细胞下调可能是大鼠肺气肿持续进展的原因之一.     

戒烟对吸烟大鼠肺组织MCP-1和TGF-β的影响

目的 :研究戒烟对吸烟大鼠肺气肿模型肺组织中的单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)和转化细胞生长因子 β(TGF β)的影响。 方法 :建立吸烟肺气肿大鼠模型。 6 0只雄性Wistar大鼠 ,随机分为对照组4个月组和 6个月组 ,吸烟组 4个月组和 6个月组以及吸烟 4个月和 6个月后戒烟组 ,每组 10只。用免疫组化法观察MCP 1和TGF β在肺内的表达 ,用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)观察MCP 1在模型肺泡灌洗液 (BALF)中的表达 ,及测定各组肺组织中溶胶原活性和总羟脯氨酸的含量。结果 :与对照组相比 ,吸烟 4个月组肺组织MCP 1和TGF β的表达高于吸烟 6个月组 ,吸烟 4个月后戒烟组低于吸烟 6个月后戒烟组 ;各组BALF中MCP 1差异无统计学意义 ;各组各时段溶胶原激活活性均比自发活性高。结论 :戒烟影响MCP 1和TGF β在吸烟大鼠肺气肿模型肺组织中的表达 ,可作为肺气肿防治的有效措施。     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的影响

目的 通过观察香烟烟雾暴露后支气管哮喘(简称哮喘)大鼠Th1/Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的变化.探讨吸烟加重哮喘的免疫学机制.方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组、哮喘+烟雾暴露组;建立慢性哮喘大鼠模型和哮喘大鼠香烟烟雾暴露模型,普通病理观察气道壁厚度的变化,酶联免疫吸附试验检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)和白介素4(IL-4)含量;免疫印迹检测肺组织GATA-3蛋白表达水平.结果 ①哮喘+烟雾暴露组气道壁厚度[(18.34±0.87)μm 2/μm]较哮喘组[(15.72±0.82)μm 2/μm]和对照组[(8.52±0.58)μm 2/μm]均明显增加,差异有统计学意义(P值均<0.01);②哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织IL-4含量[(34.07±6.11)ng/L]、[(1.41±0.31)ng/L]较哮喘组[(22.57±4.32)ng/L]、[(0.80±0.14)ng/L]和对照组[(11.38±2.90)ng/L]、[(0.27±0.08)ng/L]均增高,差异有统计学意义(P值均<0.05);哮喘+烟雾暴露组血浆INF-γ含量[(9.53±3.28)ng/L]较哮喘组[(58.83±19.57)ng/L]和对照组[(150.87±55.54)ng/L]均降低,差异有统计学意义(P值均<0.05),肺组织INF-γ含量[(0.48±0.10)ng/L]较哮喘组[(0.58±0.23)ng/L]差异无统计学意义;③哮喘+烟雾暴露组GATA-3蛋白表达(1.29±0.08)较哮喘组(0.87±0.04)和对照组(0.45±0.06)均增加,差异有统计学意义(P值均<0.01).结论 香烟烟雾暴露可以通过上调转录因子GATA-3蛋白表达,进而调控Th1/Th2偏移,在哮喘气道炎症及气道重塑的形成中扮演重要角色,为吸烟加重哮喘的免疫学机制之一.     

香烟烟雾暴露对大鼠肺组织血小板衍生生长因子BB表达的影响

目的 研究烟雾暴露对大鼠肺组织血小板衍生生长因子BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF BB)和核因子κB(nuclear factor-κB,NFκB) p65表达的影响,探讨烟雾暴露致大鼠肺动脉高压的发生机制.方法 雄性Wistar大鼠32只,随机分为对照组、烟雾暴露4、8、12周组,每组8只,制备各组烟雾暴露致肺动脉高压模型.RT-PCR方法检测PDGF-BB mRNA表达,免疫组织化学方法测各组大鼠肺组织PDGF-BB、NF-κBp65蛋白表达.结果 ①大鼠肺组织中PDGF BB mRNA相对表达量在烟雾暴露4周组(2.823±0.453)、8周组(4.015±0.052)、12周组(6.098±0.439)高于对照组(1.024±0.231),差异有统计学意义(P＜0.05);②大鼠肺组织中PDGF-BB蛋白相对表达量在烟雾暴露4周组(0.220±0.005)、8周组(0.367±0.004)、12周组(0.492±0.003)高于对照组(0.077±0.003),差异有统计学意义(P ＜0.05),NF-κBp65蛋白相对表达量在烟雾暴露4周组(0.330±0.003)、8周组(0.452±0.003)、12周组(0.596±0.003)高于对照组(0.186±0.001),差异有统计学意义(P＜0.05);③PDGF-BB蛋白的表达与PDGF-BB mRNA的相对表达量及与NF-κBp65蛋白的表达均呈正相关(r=0.686、r=0.501,P值均＜0.01).结论 烟雾暴露大鼠肺组织中PDGF-BB在转录和翻译水平表达均增高,且PDGF-BB和NFκB蛋白表达有相关性,提示PDGF-BB和NF-κB在烟雾暴露引起肺动脉平均压增高的过程中可能发挥了一定作用.     

香烟烟雾暴露对大鼠肺组织缺氧诱导因子1α表达的影响

目的 研究烟雾暴露对大鼠肺组织缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible faetor-1α,HIF-1α)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB) p65表达的影响,探讨烟雾暴露致大鼠肺动脉高压的发生机制.方法 雄性Wistar大鼠32只,随机分为对照组、烟雾暴露4、8、12周组,每组8只,制备各组烟雾暴露模型.右心导管法测肺动脉平均压(mPAP),并计算右心肥厚指数(RVHI),荧光定量PCR测各组大鼠肺组织HIF-1α mRNA,免疫组织化学方法测各组大鼠肺组织HIF-1α、NF-κB p65蛋白表达.结果 ①大鼠mPAP烟雾暴露8周组[(14.700±1.125) mm Hg]、12周组[(17.830±2.437)mm Hg]明显高于对照组[(10.670±1.125)mm Hg],差异有统计学意义(P＜0.05);烟雾暴露12周组大鼠RVHI(0.260±0.006)高于对照组(0.220±0.020),差异有统计学意义(P＜0.05);②大鼠肺组织中HIF-1αmRNA相对表达量在烟雾暴露8周组(1.170±0.211)、12周组(1.360±0.185)高于4周组(0.920±0.141)及对照组(0.760±0.137),差异有统计学意义(P＜0.05);③各烟雾暴露组大鼠肺血管平滑肌中HIF-1α及NF-κBp65蛋白的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);④HIF-1α蛋白的表达与mPAP、RVHI、HIF-1α mRNA的相对表达量及NF-κBp65蛋白的表达均呈正相关(r=0.688、r =0.497、r =0.706、r =0.583,P值均＜0.01).结论 HIF-1α和NF-κB在烟雾暴露大鼠肺组织中表达均增高,HIF-1α和NF-κB在烟雾暴露引起肺动脉平均压增高的过程中可能发挥了一定作用.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织细胞凋亡和增殖的变化

目的　观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织细胞凋亡和增殖的变化规律,探讨细胞凋亡在COPD发病中的意义。方法　33只Wistar大鼠随机分为 3组:正常对照组 (NC组 ),烟雾暴露 1个月组(COPD 1组),烟雾暴露 2个月组(COPD-2组)。观察肺组织病理学变化和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数和分类。利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法对大鼠肺实质凋亡细胞、增殖细胞的阳性细胞率(AI、PI)进行检测。结果　烟雾暴露大鼠支气管黏膜和肺实质均有大量炎细胞浸润,BALF中白细胞总数和中性粒细胞数均显著高于NC组,COPD-2组大鼠出现明显肺气肿改变。COPD-1和COPD-2组大鼠气道上皮细胞、肺泡上皮细胞和血管平滑肌细胞的AI分别为 [ ( 36.2±8.5 )%、( 32.7±6.4)%、(16. 1±7.2 )% ]和 [ ( 39.5±9.3 )%、( 37.3±7.6 )%、( 21.4±6.5 )% ];与NC组 [ ( 5.8±1 .7)%、(6.1±2.3)%、(4.9±1.4)% ]比较差异均有统计学意义 (P均 <0.01);COPD-1和COPD-2组PI分别为 [ ( 33.4±6. 3 )%、( 30.1±4.6 )%、( 28.4±6.3 )%, ( 35.5±9.8 )%、( 33.2±7.7 )%、(34.5±6.7)% ],显著高于NC组[ (7.4±2.3 )%、( 5.2±2.1 )%、( 4.4±1.8 )%,P均 <0.01 ]。且COPD 2组大鼠的     

COPD肺动脉高压大鼠肺组织血红素氧合酶1的表达及辛伐他汀治疗对其的影响

目的 研究辛伐他汀对COPD所致肺动脉高压的作用,以及对肺组织血红素氧合酶1(hemeoxygenas-1,HO-1)表达的影响.方法 24只大鼠随机分为3组:对照组、烟雾暴露组和辛伐他汀组.右心导管测定大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),以右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)作为评价右心室肥厚的指标.Real time RT-PCR方法测定肺组织HO-1 mRNA的表达,通过免疫印迹法(Western blot)及免疫组织化学方法检测肺组织HO-1蛋白的表达.结果 烟雾暴露组mPAP[(29.1±1.0) mmHg]、RVHI (0.29±0.004)较对照组[(16.1±1.0) mmHg、(0.21±0.005)]升高(P＜0.01),HO-1 mRNA是对照组的(2.82±1.77)倍;与烟雾暴露组相比,辛伐他汀组mPAP [(21.3±0.7)mm Hg]、RVHI (0.25±0.004)明显降低(P＜0.01),HO-1 mRNA明显升高(P＜0.05),是对照组的(7.56±2.91)倍;Western blot及免疫组织化学结果显示烟雾暴露组大鼠HO-1表达增强,辛伐他汀治疗后表达进一步增强.结论 辛伐他汀降低COPD所致肺动脉高压,其机制和诱导HO-1表达增加有关.     

结缔组织生长因子和周期蛋白D1在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的表达变化

目的 探讨烟雾暴露致大鼠肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)和周期蛋白D1的表达变化及其意义.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为对照组,烟雾暴露2周、4周和8周组检测PaO2,HE染色和平滑肌细胞α肌动蛋白染色观察肺血管重塑情况,行免疫组织化学染色观察CTGF和周期蛋白D1在肺动脉平滑肌中的表达,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA和周期蛋白D1 mRNA表达,Western blot法检测CTGF和周期蛋白D1的蛋白表达量.结果 各组大鼠PaO2分别为(91±4),(92±5),(91±4),(93±4)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),差异均无统计学意义(F=0.15,P＞0.05).随烟雾暴露时间的延长,肌化血管比例、肺血管壁厚度和血管直径比值(W/T)、CTGF和周期蛋白D1的mRNA和蛋白表达均呈时间依赖性增加,各组间比较差异均有统计学意义(F=51.06～590.20,P＜0.05).CTGF与周期蛋白D1表达与肺W/T呈显著正相关(r=0.097～0.918,P＜0.01),二者的表达之间也呈显著正相关.结论 烟雾暴露大鼠的CTGF和cyclinD1表达量均随暴露时间延长而显著升高,二者可能与烟雾暴露致肺动脉平滑肌细胞异常增殖有关.     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及转录因子Foxp3表达的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及转录因子Foxp3表达的影响.方法 将40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、烟雾暴露组、哮喘组和哮喘+烟雾暴露组,每组10只;哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,生理盐水组雾化生理盐水,烟雾暴露组采用吸入香烟烟雾,哮喘+烟雾暴露组于每日雾化激发OVA前给予香烟烟雾吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+ CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ干扰素(INF-γ)以及白细胞介素4(IL-4)含量;Western blot检测肺组织Foxp3蛋白表达水平.结果 (1)哮喘组大鼠CD4+CD25+Treg为(6.4±1.0)%,低于生理盐水组的(9.9±1.0)%,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为(3.3±0.8)%,低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=92.59,P＜0.01).(2)哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[(22.6±4.3)ng/L、(0.8±0.1)ng/L]高于生理盐水组[(11.4±2.9)ng/L、(0.3±0.1)ng/L],差异有统计学意义(F值分别31.69和49.29,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组血浆和肺组织中IL-4含量[(34.1±6.1)ng/L、(1.4±0.3)ng/L]高于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F值分别为31.69和49.29,P＜0.05);哮喘组血浆中INF-γ含量[(59±20)ng/L]低于生理盐水组[(151±56)ng/L],差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05),哮喘+烟雾暴露组INF-γ含量[(10±3)ng/L]低于生理盐水组和哮喘组,差异有统计学意义(F=21.83,P＜0.05).(3)哮喘组Foxp3蛋白表达为8.18±0.26,低于生理盐水组的10.27±0.33(F=43.33,P＜0.01);哮喘+烟雾暴露组为6.36±0.38,低于生理盐水组和哮喘组(F=43.33,P＜0.05).结论 香烟烟雾暴露可能通过下调CD4+CD25+Treg数量并抑制Foxp3蛋白表达,进一步加重哮喘的Th1/Th2失衡.     

胆红素干预对肺气肿大鼠模型层黏连蛋白和表皮生长因子表达的影响

目的　观察胆红素干预对肺气肿大鼠模型肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞 (ATⅡ )层黏连蛋白(Ln)及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法　健康Wistar大鼠 36只,随机分为 3组,每组 12只。(1)A组:健康对照组; (2)B组:制作肺气肿模型; (3)C组:制作肺气肿模型,每日烟雾暴露前给予间接胆红素灌胃 20mg/kg一次,灌入液量为 1 8~2ml/次。6个月末时处死大鼠,行ATⅡ的分离、纯化和培养。用放射免疫测定法测ATⅡ培养上清液中Ln的含量。间接免疫荧光法和免疫组化法测肺组织Ln及EGF的表达。结果　ATⅡ培养上清液中Ln含量及肺组织Ln免疫荧光表达B组高于A组(均P<0 05);C组低于B组 (均P<0 05),但仍高于A组。肺组织EGF的表达B组高于A组(P<0 05);C组低于B组(P<0 05),但仍高于A组。结论　胆红素通过下调Ln及EGF在ATⅡ与肺组织中的表达,对肺气肿形成过程中细胞外基质的重塑有一定的影响。