白藜芦醇逆转急性髓系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制。方法:将HL-60/ADR细胞分为对照组(Control)、阿霉素(ADR)处理组、Res处理组和ADR+Res联合处理组4组。应用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADR)自发荧光强度和细胞凋亡率;RT-PCR法检测耐药基因MRP1、抗凋亡基因BCL-2和促凋亡基因BAX mRNA表达水平,Western blot法测定MRP1、BCL-2和BAX蛋白表达水平。结果:25、50、100和200μmol/L Res作用于HL-60/ADR细胞48 h后,细胞的最大抑制率分别为44%、61%、76%和81%,呈浓度依赖性(r=0.876,P0.05);与ADR组的半数抑制浓度(IC50)(8.534±1.111μmol/L)相比,ADR+Res组HL-60/ADR细胞的IC50(1.591±0.373μmol/L)明显减少(P0.05)。ADR联合Res后HL-60/ADR耐药细胞内ADR自发荧光强度明显增加(P0.05);Res组和ADR+Res组细胞凋亡率均显著增加(P0.05)。Res组和ADR+Res组的MRP1 mRNA、BCL-2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),BAX mRNA表达水平明显上升(P0.05)。Res组和ADR+Res组M RP1、BCL-2蛋白表达水平显著下降(P0.05),BAX蛋白明显上升(P0.05)。结论:白藜芦醇具有逆转HL-60/ADR细胞耐药的作用,可能是通过促进HL-60/ADR细胞凋亡、抑制耐药蛋白M RP1而发挥作用,其促凋亡机制与抑制BCL-2和增强BAX表达有关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Westernblot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达。结果 PDTC(50,100μmol/L)或TNF-α(30,60,120mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25μmol/L)与TNF-α(60mg/L)联合用药与单用TNF-α(60mg/L)或PDTC(50μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,最终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关。     

三氧化二砷对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞,应用MTS/PES方法检测细胞增殖,NBT实验测定细胞分化,流式细胞术检测细胞凋亡和分化相关抗原CD11b的表达,SYBR Green real-time RT-PCR方法检测C-FES、BCL-2、BAX、Survivin、P21和P27 mRNA水平变化。结果:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖,其效应呈剂量依赖和时间依赖性(r=-0.967;r=-0.954);低浓度(0.1、0.5和1.0μmol/L)As2O3能明显促进细胞分化,NBT阳性率和CD11b表达水平均有不同程度的增高;较高浓度As2O3(2.5和5.0μmol/L)能明显诱导细胞凋亡,抑制细胞分化。HL-60细胞经1.0和5.0μmol/L浓度As2O3处理后,C-FES mRNA表达均明显上调,但以1.0μmol/L组更为明显,证实C-FES mRNA表达水平与细胞分化程度成正比。此外,5.0μmol/L浓度As2O3显著下调了HL-60细胞BCL-2和Survivin的表达,相反明显上调了BAX、P21和P27的表达。结论:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖、促使细胞分化成熟及诱导细胞凋亡,其机制可能涉及C-FES以及细胞周期和凋亡相关基因的调控。     

跨膜谷氨酰胺通量的竞争性拮抗剂V-9302对急性髓系白血病细胞系HL-60、KG-1凋亡的影响

目的:研究跨膜谷氨酰胺通量的拮抗剂V-9302对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法:取对数生长期的HL-60、KG-1细胞,给予不同浓度V-9302处理,CCK-8检测细胞增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR、Western blot检测凋亡相关基因BAX、BCL-2、Caspase3的表达。结果:V-9302可以显著抑制HL-60、KG-1细胞的生长(P 0.05),10和20μmol/L的V-9302分别作用于HL-60、KG-1细胞系后,能显著促进细胞的凋亡(P 0.05);凋亡相关基因检测结果显示,10和20μmol/L的V-9302分别作用于HL-60、KG-1细胞后,促凋亡蛋白基因BAX、Caspase3表达水平显著高于对照组(P 0.05),而抗凋亡蛋白基因BCL-2的表达水平明显低于对照组(P 0.05),Western blot结果与RT-qPCR结果大致一致。结论:跨膜谷氨酰胺通量的竞争性拮抗剂V-9302能明显促进急性髓系白血病细胞系HL-60、KG-1的凋亡。     

厚朴酚对HL-60细胞增殖和凋亡的作用及分子机制研究

目的:探讨厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度厚朴酚(5、10、20、40、80和160μg/ml)作用于HL-60细胞24 h和48 h后的细胞增殖情况;应用光学显微镜检观察细胞形态学的变化;DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BCL-2和BAX的mRNA水平;用Western blot检测caspase家族蛋白表达变化。结果:厚朴酚能够明显抑制HL-60细胞的增殖,并随时间延长及剂量增加,细胞增殖抑制率也明显升高(P0.05);HL-60细胞经厚朴酚处理后体积明显变小、且有凋亡小体产生,细胞核固缩、碎裂,呈现典型的凋亡形态学改变;40μg/ml厚朴酚处理HL-60细胞24 h后细胞早期凋亡率为(11.7±2.4)%,与对照组(1.4±1.1)%相比具有显著统计学差异(P0.05);RT-PCR检测结果表明,厚朴酚可上调BAX、下调BCL-2的mRNA表达;Western blot检测结果表明,厚朴酚可提高caspase-3、caspase-8和caspase-9的剪切片段表达。结论:厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖具有较明显的抑制作用,并可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspase激活、促进BAX蛋白表达以及抑制BCL-2蛋白表达相关。     

多西他赛诱导HL-60/ADR细胞凋亡及对P-gp、BCL-2、BAX蛋白表达的影响

本研究观察多西他赛对白血病耐药细胞株HL-60/ADR诱导凋亡的作用并探讨其对P-gp、BCL-2、BAX蛋白表达的影响,为临床解决白血病耐药问题提供新的思路和理论依据。采用光学显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态学改变,Annexin V FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡比率,MTT法检测细胞增殖抑制率,免疫细胞化学染色及计算机图文分析系统检测P-gp、BCL-2、BAX蛋白的表达水平。结果表明:HL-60/ADR细胞高表达P-gp,各浓度组之间P-gp的表达量没有差别。多西他赛对HL-60/ADR细胞生长有明显的抑制作用,并具有浓度和时间依赖性(r=0.853,r=0.989)。多西他赛可以诱导HL-60/ADR细胞凋亡,凋亡率没有随浓度变化的趋势。多西他赛作用HL-60/ADR细胞使BCL-2蛋白表达下降,BAX蛋白表达上升。结论:多西他赛可以诱导HL-60/ADR细胞凋亡,使细胞BCL-2蛋白表达下降,BAX蛋白表达上升。     

黄芪甲苷通过抑制AKT和NF-κB通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的观察黄芪甲苷对胃癌MGC-803细胞凋亡的影响并探讨其诱导凋亡可能的机制。方法应用四唑盐比色法(MTT法)观察黄芪甲苷对胃癌MGC-803细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测其对胃癌MGC-803细胞周期和凋亡的影响,应用蛋白质免疫印迹(Western blot)方法观察其对蛋白激酶B(AKT)和核因子κB(NF-κB)等相关信号通路蛋白及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(BAX)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的影响。结果黄芪甲苷能够抑制胃癌MGC-803细胞的增殖并促进其凋亡,并呈时间和剂量依赖性。同时其能够抑制AKT及NF-κB通路,抑制抗凋亡蛋白BCL-2的表达,促进促凋亡蛋白BAX的表达,降低BCL-2/BAX的比例,增加Caspase-3的活化。结论黄芪甲苷能够促进胃癌MGC-803细胞凋亡,推测可能通过抑制AKT和NF-κB通路,降低BCL-2/BAX的比例,增加Caspase-3的活化的机制而实现。     

蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究

目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:100μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HL-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)%,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性。结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

LY294002对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)对多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖抑制作用及其机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色法检测细胞形态,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),Cyclin E表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的激活状况。结果:0、5、10和20μmol/L的LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,能显著提高细胞增殖抑制率,并具有时间及剂量依赖性(r=0.408,r=0.485)。5,10,20μmol/L的LY294002处理细胞48 h,能使细胞核呈现致密浓染,细胞周期明显阻滞在G1期(P0.01),显著下调BCL-2,Cyclin D1,Cyclin E,PI3K及p-AKT表达(P0.01),明显上调BAX表达(P0.01)。结论:LY294002能显著抑制多发性骨髓瘤细胞U266增殖,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

灯盏花乙素对急性髓系白血病细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:探讨灯盏花乙素(SCU)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、周期与凋亡的影响及相关分子机制。方法:体外培养人AML HL-60细胞，分别以0、2、4、8、16、32、64μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。以4、8、16μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，并设置阴性对照组(NC组)，采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡，Western blot法检测细胞周期、凋亡相关蛋白及JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达。结果:SCU对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用，且增殖抑制作用呈浓度(r=0.958)、时间(r=0.971)依赖性。与NC组比较，SCU 4、8、16μmol/L组HL-60细胞G0/G1期比例、细胞凋亡率均显著升高，S期比例均显著降低(P <0.05); p21、p53、caspase-3、Bax蛋白相对表达量均显著升高，CDK2、cyclin E、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低(P <0.05),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P <0.05)，且上述...     

TGF-β1和(或)三氧化二砷作用于HL-60细胞后P27~(Kip1)表达及凋亡情况的研究

本研究观察三氧化二砷(As2O3)和/或TGF-β1对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响,以及作用前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE和BCL-2的变化情况。As2O3和/或TGF-β1作用于HL-60细胞,用细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期改变情况,应用免疫组织化学检测药物处理前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE以及BCL-2表达的变化情况。结果表明:As2O3和TGF-β1单用均可以诱导HL-60细胞发生凋亡,联合处理对HL-60细胞生长抑制作用强于单药处理,其中5μmol/LAs2O3作用最强,5ng/mlTGF-β1处理可引起HL-60细胞的细胞周期阻滞于G1期(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组P27Kip1的表达较对照组增强(p0.05);5μmol/LAs2O3处理组P27Kip1的表达与对照组比较无明显差异(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组均可见cyclinE蛋白表达下调(p0.05)。5μmol/LAs2O3和联合处理组可见内源性TGF-β1表达上调(p0.05)。结论:As2O3、外源性TGF-β1均可诱导HL-60细胞凋亡,联合处理组诱导凋亡作用强于对照组和单药处理组,TGF-β1处理可引起HL-60细胞周期阻滞于G1期。TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程中P27Kip1表达增强,拮抗cyclinE和BCL-2的作用,细胞周期阻滞,诱导细胞发生凋亡,这表明P27Kip1是TGF-β引起细胞周期阻滞的关键效应物,外源性TGF-β1又通过上调内源性TGF-β1的表达增强As2O3诱导原代APL细胞凋亡的作用。     

地西他滨联合硼替佐米对套细胞淋巴瘤细胞株的增殖抑制作用及其相关机制

目的:观察地西他滨(DAC)联合硼替佐米(BTZ)对套细胞淋巴瘤(MCL)细胞系Jeko-1和Grante519细胞增殖的影响,并探讨其相关作用机制。方法:用不同浓度的DAC、BTZ单药和2药联合在体外对人MCL细胞株Jeko-1、Grante519细胞进行处理,采用CCK8法检测不同处理因素对细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测上述药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot方法从m RNA和蛋白水平检测上述药物对MCL细胞凋亡和信号传导相关基因PCDH8、NF-κB、Caspas3、BCL-2、CCND1和BAX表达水平的影响。结果:低浓度DAC能明显抑制Jeko-1、Grante519细胞的增殖并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.892,r=0.812;r=0.886,r=0.784)。单药DAC处理后,在Jeko-1和Grante519细胞中均可观察到Caspase3、BAX和PCDH8表达水平的升高(均P0.01),BCL-2、CCND1表达水平的降低(均P0.05),但对NF-κB表达水平无显著影响;高浓度BTZ能明显抑制Jeko-1和Grante519细胞的增殖,并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.854,r=0.763;r=0.927,r=0.742);单药BTZ能引起Jeko-1和Grante519细胞中Caspase3、BAX表达水平升高(P0.01),NF-κB、BCL-2和CCDN1表达水平的降低(P0.01),但对PCDH8表达水平无明显影响;与单药处理组相比,DAC联合BTZ显著增加了对Jeko-1和Grante519细胞的抑制率和凋亡率(P0.01),并显著提高Jeko-1和Grante519细胞PCDH8、Caspase3、BAX表达水平(P0.01),明显降低NF-κB、BCL-2和CCND1表达水平(P0.01)。结论:DAC与BTZ具有正协同作用,其对MCL细胞的增殖抑制作用可能是2药联合后加强了对NF-κB信号通路的抑制作用,并且下调BCL-2水平,上调BAX水平,从而引起下游的Caspase3蛋白表达水平进一步升高,以达到更高的抗肿瘤作用。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病细胞增殖的机制研究

目的:探讨长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、K562、KG-1、HT-93增殖的作用原理。方法:HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞与长柱重楼皂苷共同培养24、48和72 h,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞株的凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白PARP,Caspase3,Mcl-1, BCL-2, BAX,P53,P27的表达变化,GAPDH为内参对照。结果:与对照组相比,长柱重楼皂苷可以抑制HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞的增殖,且呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性(r=0.9436;r=0.8623;r=0.9922;r=0.8918)。不同浓度的长柱重楼皂苷(4和8μg/ml)分别作用于HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞24 h后,与表达对照组比较,凋亡细胞的比例均明显增加。随着药物浓度的增加,PARP与Caspase3的剪切带也逐渐增加(r=0.9945;r=0.965),同时BCL-2家族的促凋亡蛋白BAX表达逐渐增加(r=0.9916),而抗凋亡蛋白MCL-1与BCL-2表达逐渐减少(r=0.9959;r=0.9927)。抑癌基因p53蛋白及其下游p27蛋白的表达也随着药物浓度的增加而逐渐升高(r=0.9959;r=0.9778)。结论:长柱重楼皂苷通过活化内源性凋亡通路有效抑制白血病细胞增殖,这为临床上治疗AML白血病提供潜在新药物选择。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

三氧化二砷联合姜黄素对KG1a细胞的协同杀伤作用

本研究旨在探讨三氧化二砷联合姜黄素对KG1a细胞的增殖与凋亡的影响及可能的机制.采用MTT法检测细胞存活率;甲基纤维素集落形成实验检测细胞成集落能力;流式细胞术检测细胞表面分子、细胞凋亡率及细胞周期变化;瑞氏姬姆沙染色法观察细胞形态;Westerrn blot检测细胞BCL-2、BAX、PARP蛋白表达.结果表明：KG1a细胞表型为CD34＋ CD38-,HL-60细胞表型为CD34＋ CD38＋;前者成集落能力比后者强.姜黄素及三氧化二砷单用对KG1a细胞增值抑制作用均具有剂量依赖性.联合用药与单药对比,前者细胞存活率、克隆形成集落数更低,而细胞凋亡率更高.联合用药能够降低细胞的BCL-2、PARP两种蛋白表达、增加BAX蛋白表达.结论：KG1a细胞是比HL-60细胞更早期的白血病干/祖细胞.三氧化二砷联合姜黄素能更有效抑制KG1a细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与BCL-2、PARP蛋白表达下调、BAX蛋白表达上调有关.     

姜黄素联合硼替佐米对骨髓瘤H929细胞增殖抑制与凋亡诱导作用及其机理

本研究旨在探讨姜黄素(curcumin)联合硼替佐米(bortezomib)对人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系H929细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用的相关机理。采用MTT法检测不同浓度的姜黄素和硼替佐米单用或联合应用对H929细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术(FCM)分析单用和联合用药时细胞的凋亡比率;采用RT-PCR法分析凋亡相关基因BCL-2、BAX及细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达变化;采用免疫荧光染色法测定不同处理组NF-κB P65蛋白的分布变化。结果表明:姜黄素和硼替佐米单用及联合应用时均可抑制H929细胞的生长,呈剂量依赖性,联合用药在一定浓度范围内有协同效应;联用组细胞凋亡的比例明显高于单用组及对照组;与单用组相比,联用组cyclin D1,BCL-2基因表达下降,BAX升高。核因子NF-κB P65在单用组的胞核内的表达减弱,联合应用组NF-κB P65蛋白分布于胞浆。结论 :姜黄素与硼替佐米均可抑制H929细胞的生长增殖、促进凋亡,联合应用有协同效应。抑制核因子NF-κB的转录及影响其调节凋亡相关基因可能是作用机制之一。     

米哚妥林对急性白血病细胞株HL-60细胞抑制效应的研究

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂米哚妥林(PKC412)对HL-60细胞株增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度PKC412对HL-60细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法鉴定PKC412对HL-60细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测BCL-2、P53基因的mRNA表达,Western blot检测BCL-2、P53蛋白的表达;以尾静脉注射HL-60细胞构建急性白血病小鼠模型,以PKC41231.25nmol/kg尾静脉给药,生理盐水组作为对照组,研究PKC412在小鼠体内对HL-60细胞的抑制;ELISA法检测PKC412对肿瘤小鼠细胞因子TNF-α和TGF-β分泌的影响。结果:PKC412抑制HL-60细胞株细胞增殖,呈剂量依赖性(r=0.9973),其中IC50=0.31μmol/L;并能诱导HL-60细胞凋亡。PKC412作用HL-60细胞株48 h后,与对照组比较BCL-2基因mRNA表达下调(0.417±0.044 vs 0.933±0.033,t=9.347,P<0.001),P53基因mRNA表达上调(1.533±0.145 vs 1.050±0.161,t=2.231,P>0.05);BCL-2蛋白表达量下降,P53蛋白表达量升高。PKC412在体内可抑制HL-60肿瘤细胞生长,给药后小鼠生存率为50%,与对照组比较体重增加(18.02±0.403 g vs 16.44±0.562 g,t=2.272,P=0.0356)。PKC412组血清及脾细胞中TNF-α和TGF-β细胞因子较对照组分泌明显减少(P<0.05)。结论:PKC412能通过抑制BCL-2基因表达水平诱导HL-60细胞凋亡,体内给药可抑制肿瘤的生长。