低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶 (JAK)基因表达的作用。鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养 ,采用半定量RT -PCR技术检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的JAK1、JAK2 和JAK3基因的表达水平 ,并对PCR产物进行测序。结果显示低氧复合培养 2h组肺动平滑肌细胞中JAK1、JAK2 、JAK3mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,与正常组比较均有明显差别 ,低氧 1 2h组的表达量低于 6h组 ,但高于正常组。RT -PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结果表明 ,缺氧可以明确促进JAK基因在PAS…     

肺动脉平滑肌细胞对低氧诱导的肺微血管内皮细胞白介素表达的调节及机制

目的 研究低氧对肺微血管内皮细胞(PMVECs)的白细胞介素(IL)6、IL-1β、受体酪氨酸激酶(RTK)和Janus激酶3(JAK3)表达的影响,以及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)在其中的调控作用.方法 单独培养的大鼠PMVECs分为正常(N)组及低氧2h(H2)组、6h(H6)组、12h(H12)组,另设立PMVECs共培养组(与PASMCs共同培养)和单纯培养组,均接受6h或12h的低氧(氧浓度为3%)处理.应用RT-PCR方法 检测IL-6、JAK3的mRNA表达水平,放免法测定培养细胞上清中的IL-6蛋白含量,放射性酶分析法测定细胞膜、胞质中RTK的活性,ELISA法测定细胞培养上清中的IL-1β蛋白含量.结果 低氧刺激后,PMVECs的LL-6、JAK3 mRNA表达及IL-6、IL-1β蛋白含量均增加.与N组比较,低氧处理各组的以上各指标均有所上升(P<0.01),以6h时间点最为明显(P<0.01).胞膜RTK活性在低氧刺激各组明显降低(P<0.01),而胞质RTK活性明显升高(P<0.01),以12h时间点最为明显(P<0.05).在低氧刺激6h后,共培养组的PMVECs内IL-6、JAK3的mRNA表达,以及IL-6、IL-1β蛋白含量均较单纯培养组有所降低(P<0.05);在低氧刺激12h后,共培养组的PMVECs的RTK活性也较单纯培养组降低(P<0.05).结论 低氧可以促进PM-VECs的IL-6 mRNA表达.并能增加IL-6和IL-1β蛋白含量,复合培养情况下PASMCs对此具有下调作用,其机制可能与RTK和JAK涉及的信号转导通路有关.     

缺氧对PC12细胞中活性氧含量和缺氧诱导因子 血管内皮生长因子表达的影响

目的研究缺氧对PC12细胞中ROS含量和HIF-1α、VEGF表达的影响,初步探讨缺氧损伤的分子机制。方法使用三气培养箱建立PC12细胞缺氧损伤模型;观察缺氧环境下细胞形态的改变;MTT法检测细胞存活率;DCHF-A染色检测ROS的含量;RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达;Western Blot检测HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果与正常组相比较,缺氧24 h后ROS明显升高;HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达较正常组明显升高。结论缺氧24 h后可以导致PC12细胞中ROS含量、HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达升高。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号转导及转录激活因子基因表达的影响

作者研究了低氧对肺动脉平滑肌细胞中信号转导及转录激活因子 (STATs)基因表达的影响。低氧处理培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,采用半定量RT -PCR方法检测常氧组、低氧 2h、6h、1 2h组的STAT3和STAT5基因的表达水平。结果显示 :低氧培养 2h肺动脉平滑肌细胞中STAT3、STAT5、mRNA表达水平升高 ,在低氧 6h组达最高 ,与正常组比较均有明显差别。低氧 1 2h组的表达量低于 6h组 ,但高于正常组。研究表明缺氧可以明确促进STATs基因在PASMC的表达 ,缺氧能够激活复合培养的PASMC中白细胞介素 6等细胞因子 ,可能是刺激STATs基因表…     

JAK2/STAT3信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

目的探讨JAK2/STAT 3信号通路在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤中的作用。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NC组)和SAP 6h、12h、18h组,每组8只。动态测定各组血清淀粉酶(AMY)水平;光镜下观察胰腺及肺组织病理变化,并计算肺湿/干重比;ELISA法检测血清IL-6及IL-18表达情况;West-ern blotting检测肺组织中JAK2和STAT 3蛋白的表达水平。结果与NC组比较,SAP各组AMY水平均明显升高(P<0.01);光镜下胰腺和肺组织损伤随病情进展而逐渐加重;SAP组肺湿/干重比与NC组比较显著升高(P<0.01)。各组血清中均有IL-6及IL-18表达,与NC组比较,SAP各组IL-6及IL-18表达水平均显著上调(P<0.01)。NC组有极少量的JAK2和STAT 3表达,SAP各组JAK2和STAT 3蛋白表达明显高于NC组,且随造模时间延长逐渐增高(P<0.01);JAK2和STAT 3表达变化与肺组织的严重程度一致。结论 JAK2/STAT 3信号通路的激活可诱导IL-6及IL-18过度表达,可能加重SAP时的炎症反应和肺损伤。     

模拟高原缺氧复合梭曼中毒大鼠心肌G蛋白的变化

作者通过对检测大鼠心肌G蛋白表达和含量的变化研究,探讨G蛋白在高原缺氧条件下梭曼中毒心功能损害效应加重过程中的作用,为临床救治高原环境下神经中毒引发的心功能损害提供理论依据。作者将体重为(220±25)g的雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、高原缺氧组、梭曼中毒组和缺氧复合梭曼中毒组,设置缺氧中毒后     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞STAT3表达及细胞增殖的影响

目的探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达及细胞增殖的影响。方法采用组织块法原代培养PAsMCS并进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2、6、12和24h STAT 3mRNA和酪氨酸活性水平的变化;。H-TdR掺入法观察缺氧6、12和24h细胞增殖情况。结果缺氧2hSTAT3mRNA表达升高,6h达高峰。12h开始下降,但仍高于常氧组;Western blot定量分析示缺氧6hSTAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h达高峰,24h下降;^3H-TdR掺入法测定结果示PASMCs。H-TdR掺入量在缺氧6h开始增加,随着缺氧时间延长,。H-TdR掺入量逐渐增加,至缺氧24h。HTdR掺入量最高。结论缺氧诱导PASMCs中STAT3 mRNA和蛋白酪氨酸活性水平增加,提示STAT3在缺氧致PASMCs增殖过程中可能发挥重要作用。     

8-Br-cAMP对THP1细胞中ABCA1及单核细胞趋化因子的影响

 目的 以THP1细胞株为靶点,研究8-Br-cAMP对ABCA1、MCP-1基因mRNA和蛋白质表达及IL-1β蛋白质的影响,阐明ABCA1基因在AS及泡沫细胞形成中新的可能机制.方法 复苏培养THP1细胞株,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染THP1细胞,给予上述8-Br-cAMP的刺激,同样的方法观察上述指标的改变.结果 予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24 h ABCA1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP刺激下,THP1细胞中ABCA1可增加炎症因子表达,参与AS的发生.     

缺氧复合梭曼中毒大鼠脑损伤的药物保护研究

本文旨在研究抗胆碱能药物解磷复方和红景天对低压缺氧复合梭曼中毒大鼠脑损伤的作用效果。作者选取72只Wistar大鼠,体质量180g～280g,实验期间动物进食、饮水不限制。将动物分为缺氧对照(Hc组)、缺氧梭曼中毒(Hs组)、缺氧梭曼中毒 解磷复方(Hsaa组)、缺氧梭曼中毒 抗毒复方(解磷复方 红景天0．5Va)治疗(Hsaar组)等共4组,每组18只。动物梭曼(72μg/kg,sc)中毒后置低压舱内(62kPa)缺氧48h,于12h、24h、48h等时间点处死动物取脑组织。用生化法测脑组织伊文思蓝(evansblue,EB)含量和磷脂酶A2(phospholipase,PLA2)活性,放射免疫法测钙调蛋白(Calmodulin,CaM)含量。     

急性脊髓损伤后炎症反应、自噬和凋亡相关因子的变化以及JAK2/STAT3信号通路研究

目的观察大鼠急性脊髓损伤（Acute Spinal Cord Injury,ASCI）后神经细胞炎症反应、自噬和凋亡相关因子的变化,探讨靶向干预JAK2/STAT3信号通路活化的治疗作用。方法选择健康成年8～10周龄SD雄性大鼠共45只,随机分为假手术组、模型组和JAK2抑制剂AG-490干预组各15只,采用改良Allen法复制模型。分别于6、12、24 h处死大鼠（每组每个时间点各5只）,采用免疫组织化学染色法检测脊髓组织白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和热休克蛋白-27（Heat Shock Protein-27,HSP-27）阳性表达,Western Blot法检测组织JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达,免疫荧光标记法检测组织微管相关蛋白Ⅰ轻链3（Microtubule-Associated Protein1 Light Chain 3,MAP1LC3）-Ⅱ阳性表达,Western Blot法检测组织Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组各时间点组织IL-6、TNF-α和HSP-27阳性表达率,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平,MAP1LC3-Ⅱ阳性表达率以及Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白表达水平均有所增加,而干预组各时间点上述指标均低于模型组（P<0.05）。结论ASCI早期病理改变可能涉及神经细胞的炎症反应、自噬和凋亡以及JAK2/STAT3信号通路的活化,靶向干预JAK2/STAT3信号通路的活化可能为ASCI的治疗提供新的方向。     

CyclinD1、P27、CK19、ALDH1A1在乳腺病变中表达及意义

目的探讨细胞周期D1(Cyclin D1)、P27、细胞角蛋白19(CK19)、ALDH1A1在乳腺病变中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测79例乳腺组织标本(包括正常乳腺、乳腺增生、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌)中Cyclin D1、P27、CK19、ALDH1A1的表达情况,分析其与乳腺癌干细胞增殖及乳腺病变组织分化程度之间的关系。结果正常乳腺、乳腺增生、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌中Cyclin D1、ALDH1A1的表达逐渐上升,P27、CK19的表达逐渐下降;乳腺正常及良性增生组织中Cyclin D1、CK19、ALDH1A1的表达明显低于乳腺导管原位癌及浸润性导管癌(P<0.05);乳腺正常及良性增生组织中P27的表达明显高于导管原位癌及浸润性导管癌(P<0.05)。结论 Cyclin D1、P27相互作用调节乳腺癌干细胞的发生及发展过程,CK19、ALDH1A1可作为乳腺癌诊断及恶性程度评估的参考指标。     

胸腰椎骨质疏松性骨折血清网膜素-1、转化生长因子-β1、铁蛋白与骨转换关系的临床研究

目的分析胸腰椎骨质疏松性骨折血清网膜素-1(Omentin-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、铁蛋白(SF)与骨转换关系。方法河池市人民医院创伤骨科2016年1月—2018年5月收治69例胸腰椎骨质疏松性骨折患者作为骨质疏松性骨折组,另外选择85例骨质疏松症患者(骨质疏松组)及38例健康体检者(健康组)作为对照,比较三组血清Omentin-1、TGF-β1、SF与骨转换指标,并分析胸腰椎骨质疏松性骨折患者血清Omentin-1、TGF-β1、SF与骨转换的关系。结果骨质疏松性骨折组血清Omentin-1、TGF-β、平均骨密度BMD分别为(30.19±3.93)ng/mL、(4.31±0.62)ng/mL、(0.48±0.06)g/cm2,骨质疏松组分别为(46.93±6.73)ng/mL、(9.65±1.56)ng/mL、(0.55±0.07)g/cm2,健康组分别为(62.14±9.15)ng/mL、(18.71±2.76)ng/mL、(0.63±0.09)g/cm2,骨质疏松性骨折组均显著低于骨质疏松组和健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。骨质疏松性骨折组血清SF、β-CTX及PINP分别为(289.07±40.11)ng/mL、(0.63±0.11)ng/mL、(68.70±9.75)ng/mL,骨质疏松组分别为(193.46±27.06)ng/mL、(0.51±0.08)ng/mL、(57.09±6.86)ng/mL,健康组分别为(134.18±17.84)ng/mL、(0.32±0.05)ng/mL、(42.14±5.40)ng/mL,骨质疏松性骨折组均显著高于骨质疏松组和健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。胸腰椎骨质疏松性骨折患者血清Omentin-1、TGF-β1与骨转换指标呈负相关,SF与骨转换指标呈正相关。多元线性回归分析显示Omentin-1、TGF-β1、SF、年龄可作为骨转换的独立影响因素。结论胸腰椎骨质疏松性骨折患者骨转换水平高,血清Omentin-1、TGF-β1、SF和骨转换有良好相关性,可能是预测胸腰椎骨质疏松性骨折风险的参考指标。     

运动性低血色素形成中大鼠十二指肠铁吸收蛋白HCP1、DMT1及FPN1表达的动态变化

目的:研究运动性低血色素形成中大鼠十二指肠铁转运蛋白血红素转运蛋白1(heme carrier protein 1,HCP1)、二价金属离子转运体1(divalent metal transporter1,DMT1)及膜铁转运蛋白1(ferroportin1,FPN1)表达的动态变化,探讨运动性低血色素的发生机制。方法:36只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和运动组。运动组大鼠进行为期5周、6 d/周、坡度为0、速度30 m/min的递增负荷跑台训练。前2周每天训练1次,时间从1 min开始,每次递增2 min。从第3周开始,每天训练2次。分别于运动第3、4、5周末取材,采用血细胞自动分析仪测定血红蛋白(Hb)含量;Western Blot检测十二指肠上皮细胞HCP1、DMT1及FPN1表达。结果:(1)长时间大强度运动后大鼠Hb含量逐渐降低。运动组3周末Hb与其对照组相比有下降趋势,4周和5周末显著低于其对照组(P<0.05,P<0.01)。(2)运动组大鼠3周末小肠上皮细胞HCP1、DMT1及FPN1表达均显著高于其对照组(P<0.01),4周末与其对照组相比均无显著差异(P>0.05),5周末均显著低于对照组(P<0.01)。结论:大强度运动开始阶段,机体通过增加肠铁吸收维持运动机体对铁的需求,随运动时间延长,机体肠铁吸收能力降低,这是引发运动性低血色素的重要原因之一。     

小鼠外周血白细胞节律基因bmal1、clock、cry1、per1表达的近日节律性研究

目的 探讨12 h光照、12h黑暗交替（12 h-light and 12 h-dark cycle,12L/12D）光制条件下,小鼠外周血白细胞中4种节律基因bmal1、clock、cry1、per1近日节律性的表达特点. 方法 将48只雄性C57/BL6小鼠在12L/12D光制条件下饲养4周后,按随机数字表法分为6组,每组8只.分别在6个时相点（9：00、13：00、17：00、21：00、1：00、5：00）取外周血并分离白细胞.抽提总RNA,利用实时聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测小鼠外周血白细胞中bmal1、clock、cry1、per1 4种节律基因的mRNA水平.用余弦函数作曲线拟合,获取节律参数.并经one-ANOVA分析比较基因表达峰值和谷值的差异. 结果 在明暗交替光制条件下,bmal1、clock、cry1、per1 4种基因存在明显的近日节律性,各基因表达的峰值明显高于谷值（P＜0.01）.利用拟合方程预测的clock表达峰值相位时间在5：00左右,雨bmal1、cry1、per1基因表达的峰值时间在13：00-15：00左右.clock表达的峰值时间比bmal1超前,峰值及振幅也比bmal1高（P＜0.01）;而cry1和per1表达的峰值时间、峰值大小比较接近. 结论 C57/BL6小鼠外周血白细胞bmal1、clock、cry1、per1基因表达存在明显的近日节律性.clock在正反馈中的作用强于bmal1,而cry1、per1在负反馈中的作用相似.     

T1, T2, and concentrations of brain metabolites in neonates and adolescents estimated with H-1 MR spectroscopy

The protein and lipid content of the human brain increases dramatically from infancy to adolescence. The authors investigated whether this change influences the relaxation behavior of metabolites measurable with hydrogen-1 magnetic resonance (MR) spectroscopy. H-1 MR spectroscopy was performed in eight neonates and eight adolescents at 1.5 T with STEAM (stimulated-echo acquisition mode) sequences. Five spectra were obtained in each volume of interest with different TE and TR values. T1 and T2 were subsequently calculated. T1 and T2 for inositols, choline-containing compounds (Cho), phosphocreatine plus creatine (PCr + Cr), and N-acetylaspartate (NAA) did not differ significantly between the two subject groups. Metabolite concentrations were estimated by using the fully relaxed water signal as an internal standard. Mean estimated concentrations of NAA and PCr + Cr were higher in the adolescent group, whereas the concentration of Cho was lower. The concentration of inositols was similar in the two groups.     

Expression of pulmonary mRNA encoding ICAM-1, VCAM-1, and P-selectin following thoracic irradiation in mice.

PURPOSE: Recent studies have revealed that ionizing radiation induces the expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), and P-selectin in vitro. The purpose of this study was to investigate the expression of these adhesion molecules in mouse lung following whole thoracic irradiation. MATERIALS AND METHODS: C57BL/6J mice were irradiated with a single dose of 12 Gy to the thoraces and sacrificed at 4, 12, 24, and 48 hours and 1, 2, 4, and 8 weeks after irradiation. Expression of total lung mRNA for ICAM-1, VCAM-1, and P-selectin was quantified by the Northern blot method and normalized to beta-actin. RESULTS: There were increases in mRNA for ICAM-1 of 42% at 4 hours (p < 0.05), 76% at 24 hours (p < 0.01), and 51% at 48 hours (p < 0.05) compared with the controls. These returned to the control level at 1 week. The expression of VCAM-1 mRNA was also increased by 49% (p < 0.01) at 12 hours and was still increased by 25% at 1 week. P-selectin mRNA was transiently increased by 59% at 12 hours. CONCLUSIONS: These early inductions of mRNA for ICAM-1, VCAM-1, and P-selectin in mouse lung following thoracic irradiation were transient but significant, and are one of the most immediate changes reported in vivo.