绿色荧光蛋白转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的研究

目的： 探讨绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的可能性。方法：用乙基亚硝基脲 (N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导GFP转基因小鼠和普通小鼠基因突变,比较诱导后两种小鼠的嗜多染红细胞微核率变化情况。再观察GFP小鼠细胞克隆对GFP转基因小鼠hprt基因的DNA和mRNA序列进行验证,并对GFP转基因小鼠hprt突变克隆外显子1和外显子9进行了双向测序。结果：ENU诱导后GFP转基因小鼠和普通小鼠的微核率变化趋势相同。GFP转基因小鼠的微孔培养物比普通小鼠的微孔培养物易于确认,且降低了假阳性率和假阴性率。GFP转基因小鼠的hprt基因是完整的,与普通小鼠相比未见明显差异。GFP转基因小鼠hprt基因6个突变克隆外显子1的序列均与野生型小鼠细胞的序列一致,3个突变克隆外显子9的序列中有2个发生了A∶T→T∶A颠换。结论：ENU诱导的GFP转基因小鼠突变模型良好,GFP转基因小鼠可用作小鼠淋巴细胞hprt基因突变试验的动物模型,准确性高且试验难度低。     

PS8812多糖及其硒多糖抗诱变试验

背景与目的:探讨PS8812多糖及其硒多糖的抗诱变作用.材料与方法:采用Ames试验、小鼠骨髓微核及小鼠精子畸形抗突变试验.结果:多糖和硒多糖对鼠伤寒沙门氏菌突变菌株TA98及TA100的回复突变有明显抑制作用,最高抑制率分别为65.39%和73.21%;多糖和硒多糖也能显著降低环磷酰胺诱导的微核率和精子畸形率,微核抑制率为40.24%～60.37%,精子畸形抑制率为38.92%～62.36%.结论:PS8812多糖及其硒多糖均有明显的抗诱变作用.     

二代测序技术检测鼻咽癌相关基因突变与临床病理特征关系分析

目的:以二代测序（NGS）为基础分析鼻咽癌相关基因突变及突变功能区域,探讨突变基因与临床特征之间的关系及临床应用价值。方法:收集2018年2月-2018年11月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院/湖南省肿瘤医院头颈放疗二科28例初治鼻咽癌患者,采用基因测序平台Illumina NextSeqCN500进行全基因测序,描述基因检测结果,统计分析高频突变基因与临床病理特征之间的关系。结果:本研究共检测到93个基因及115个突变功能区域,因部分基因突变频率较低未纳入统计,纳入统计共20个突变基因及14个突变功能区域,其中泛素羧基末端水解酶1（BAP1）和肿瘤抑制因子（CYLD）基因的突变频率均为9.8%（5/51）,肿瘤蛋白p53（TP53）基因突变频率为7.8%（4/51）。结论:Illumina NextSeqCN500测序平台可作为鼻咽癌多基因突变检测手段,BAP1、CYLD及TP53在鼻咽癌中突变频率较高,对深入研究鼻咽癌发病机制及靶向药物治疗方面具有一定的指导意义。     

穿梭载体与哺乳动物细胞诱变研究

1.前言 哺乳动物细胞的诱变研究在近几十年中有了飞速的发展。但直接研究哺乳动物细胞还有在一定的困难,不象在原核细胞中那样容易得到许多资料。目前大多数是进行特定位点的诱变研究,即用一定的选择性培养基选择具有特定位点突变,并表现出一特定表型的细胞株作为研究系统。但要分离到某种可供选择的突变株是很困难的,耗时较多,而且得到的信息也很有限。 当Berg和Mulligan构建的穿梭载体一出     

黑腹果蝇突变研究的分子方法

本文对1989年第五届国际环境诱变剂讨论会中有关黑腹果蝇突变研究的分子方法的资料综合介绍如下。 在有关诱变作用的研究中,黑腹果蝇起了重要作用。在性细胞中检出诱发突变以及化学物质能够诱发突变并能够把突变传递至相继的后代中去的研究最初都是在黑腹果蝇中完成的。覆盖整条X染色体的臂间倒位能抑制同源染色体之间的基因交换,因此才设计并发展了性连锁隐性致死(SLRL)试验,使我们能够检出X染色体上700～800个基因     

应用穿梭质粒建立哺乳动物细胞诱变检测系统的实验研究

本文通过用已知诱变剂EMS对基于EB_2病毒的穿梭载体pMCi5在小鼠3T3细胞中的诱变作用的研究,初步建立了一种能在DNA水平研究哺乳动物细胞诱变作用的快速实验系统。pMCi5质粒带有细菌lacI基因,可作为体细胞诱变研究的靶基因,最后通过转化大肠杆菌,在含X-gal的培养基中快速检测lacI突变。该系统的自发突变率小于1.21×10~(-4),300μ/mlEMS的诱发突变率为3.8×10~(-3)。经酶谱分析得到的7个突变子,在DNA水平上没有大的改变,EcoRl酶切位点上无点突变发生。     

酵母有助于癌症研究

ras 突变基因与某些哺乳动物细胞的转化有非常密切的关系,细胞转化后可形成肿瘤。因此,从某些恶性肿瘤细胞的ras 基因中可以测出点突变,这些突变基因能完成NIH3T3成纤维细胞的转化。然而,正常或突变ras 基因产生的P21蛋白(对应于其分子量)的生化功能仍未完全阐明。酵母菌saccharomyces     

茶蛋白液预防辐射引起的突变效应

目的:研究茶叶中的茶蛋白抵抗电离辐射所引起的突变效应.方法:Ames试验、V79细胞染色体畸变试验、小鼠嗜多染红细胞(PCE)微核试验和显性致死试验.结果:茶蛋白可抵抗60Co辐射对沙门氏菌的诱变作用,降低中国仓鼠肺V79细胞的染色体畸变数,使小鼠PCE微核数明显减少,对60Co辐射引起小鼠的显性致死损害有保护作用.结论:茶蛋白液可防护60CO辐照所致突变效应,可以认为茶蛋白对预防放射治疗时引起的致突变效应有保护作用,对茶蛋白用于临床治疗有参考意义.     

牛鞭酒的诱变性试验研究

目的与方法:采用Ames 试验,小鼠骨髓细胞微核试验,小鼠精子畸形试验对牛鞭酒进行了诱变性研究。结果与结论:小鼠体细胞,生殖细胞及多种微生物检测系统的各项诱变试验均为阴性结果。该产品在本试验条件下无诱变作用。     

初诊急性髓系白血病患者十种常见突变基因的突变组分析

目的 探讨初诊急性髓系白血病(AML)患者中最常见的10种突变基因的突变组合规律.方法 选取AML患者129例,基因测序法检测初诊时骨髓样本中ASXL1、CEBPA、DNMT3A、FLT3、IDH1/2、KIT、NPM1、PHF6和TET2基因突变.结果 68.99％(89/129)患者上述基因突变阳性,30.23％(39/129)同时有多种基因突变.激酶类基因FLT3和KIT突变互斥,不同时出现.FLT多与其他基因伴随突变,而KIT突变多单独出现.转录因子基因CEBPA、NPM1和PHF6可相互伴随突变.表观遗传调控基因ASXL1、DNMT3A、IDH1/2和TET2的突变多与上述两组基因突变同时出现,但该组基因之间较少伴随突变.结论 首次对初诊AML中的突变组按基因的功能和分类进行谱型分析,显示基因突变的组合具有一定的规律,与基因的功能和分类相关.     

肿瘤线粒体DNA突变的特征及其研究进展

线粒体DNA(mtDNA)突变可改变线粒体在氧化代谢中的功能,是肿瘤中最常见的遗传事件之一。随着新一代测序技术的迅速发展,肿瘤mtDNA测序数据急剧增加,泛癌种的mtDNA突变特征得以揭示。肿瘤异质性在人类肿瘤中已被广泛报道,由于线粒体基因组的不稳定性,mtDNA突变对肿瘤异质性有重要作用。此外,mtDNA突变的进化选择对肿瘤异质性也有影响,阐明复杂的进化选择模式对肿瘤研究意义重大。近年来,直接针对mtDNA的基因工程技术取得进展,为精准表征mtDNA突变与肿瘤细胞表型之间的关系提供了研究手段。深入理解肿瘤中mtDNA突变的特征,可为肿瘤的基础研究及临床诊疗提供新的思路。     

易患乳腺癌的妇女更易患心脏病

一项新的研究发现,易患乳腺癌的妇女更易患心脏病.多数因遗传因素患乳腺癌和卵巢癌的妇女拥有变异的BRCA1(乳腺癌遗传基因) 或BRCA2基因,BRCA1或BRCA2基因通常抑制乳腺癌和卵巢肿瘤的生长.在圣迈克尔医院的心脏外科医生Verma(沃曼) 博士说,他的研究小组发现这种基因具有调节心脏功能的效果.与那些不具有突变基因小鼠相比,心脏病发作后, 具有BRCA1基因突变的小鼠的死亡率比一般小鼠高3至5倍.     

胃癌肝转移胆汁中P53基因突变的研究

目的　研究胃癌肝转移与胆汁中 p5 3基因点突变的关系。方法　采用核酸杂交、PCR扩增、直接测序等分子生物学技术 ,检测胃癌原发灶、肝转移灶、胆汁中相同突变位点的 p5 3基因。结果　在 6 6例胃癌中 ,检出 p5 3基因突变 43例 (6 5 .2 % )。其中 7例术中肝转移者的胆汁中检出与原发灶相同点突变基因 p5 36例 (85 .7% )。结论　胃癌肝转移细胞是来自与原发灶有相同点突变基因的瘤细胞。检测胆汁中与原发灶相同的点突变基因 p5 3,可能成为早期诊断胃癌肝转移的一种方法。     

甲基磺酸乙酯对穿梭质粒P~(Z189)的诱变作用及温度梯度凝胶电泳对SUP~F突变基因的检测

穿梭质粒P~(z189)转化原核细胞后,用甲基磺酸乙酯对转化的原核细胞进行诱变处理,使P~(z189)发生突变,突变的靶基因导致了再转化克隆在选择培养基上颜色改变。用温度梯度凝胶电泳技术检测突变子上的靶基因发现,当选择的试验条件合适时,这项技术能够检测出结构变异的DNA片段。     

转染人突变dhfr基因的小鼠骨髓细胞对小鼠造血功能的长期保护作用

目的:将转染了人突变dhfr基因的第二代小鼠骨髓,移植给经致死剂量照射的第三代小鼠,观察该基因对小鼠造血功能的长期保护作用.方法:分离存活的第二代小鼠骨髓有核细胞,直接移植给经致死剂量照射的同系小鼠,以MTX筛选,观察小鼠血象和生存率变化,PCR和Southem印迹杂交分析目的基因在小鼠染色体DNA中的整合与表达情况.结果:在大剂量MTX筛选下,实验组小鼠造血功能逐渐恢复,对照组3周内全部死亡.实验组生存率和生存期明显高于对照组,但较前两代生存率低.PCR和Southern印迹分析结果提示,实验组脾脏和肝脏组织中均检测到前病毒标志基因neo~R和dhfr基因的特异务带.结论:转染了人突变dhfr基因的第二代小鼠骨髓,能有效地重建经致死剂量照射的第三代小鼠造血功能.保护骨髓免遭大剂量MTX所致的严重骨髓抑制,dhfr基因在小鼠基因组DNA中的稳定整合是这种长期保护作用的物质基础.     

建立转基因小鼠突变研究模型的研究

建立转基因小鼠突变研究模型的研究黄建，成国辉，陈耀富，印木泉（上海第二军医大学卫生毒理教研室２００４３３扬州大学农学院生物所扬州２５０００９）本研究的目的是建立一个以ＸｙｌＥ（邻苯二酚氧化酶）基因为诱变靶基因，ｐＥＳｎｘ（１２．７ｋｂ）穿梭质粒为载体...     

东北地区亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的相关性研究

目的::研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的关系.方法:采用以人群为基础的病例对照研究方法,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测MTHFR基因型在东北地区乳腺癌患者和正常人群中的分布.结果:MTHFR基因677位点在乳腺癌组和对照组中等位基因频率及基因型分布有显著差异性(P<0.05).进一步分析表明,纯合突变G/G基因型、杂合突变C/G基因型与野生C/C基因型相比,患乳腺癌的危险度分别提高了2.23倍和2.00倍.结论:MTHFR基因C677T突变基因型与乳腺癌的易感性有关.     

复方首乌片的诱变性和抗诱变性研究

中药首乌及其复方具有降血脂、抗动脉硬化、保护肝脏、抗菌、提高免疫功能、抗衰老等作用。近年来,对它的抗肿瘤作用颇有研究。但对其诱变性和抗诱变作用研究,尚未见报道。本实验以复方首乌片为样品,应用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验(chrom-some aberration;CA)和骨髓多染红细胞微核试验(micronucleus of polychromaticerythrocyte;MNPCE)二项遗传指标,对该药进行诱变性和抗诱变性研究。     

小鼠淋巴细胞hprt基因突变检测的研究进展

肿瘤的发生、发展与突变事件密切相关。人类在环境中接触的突变剂的检出依赖于致突变试验。以次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,hprt)基因为报告基因的hprt突变试验是几个重要的致突变试验之一,其优点在于不仅能检测出突变剂的致突变能力大小,还可以对突变体进行突变谱分析,并且能为多种与hprt基因突变相关的人类疾病提供研究资料。以小鼠啮齿动物为试验模型的淋巴细胞hprt基因突变试验近年来得到广泛应用,本文对其研究进展作一综述。     

茶蛋白液预防辐射引起的突变效应

目的 :研究茶叶中的茶蛋白抵抗电离辐射所引起的突变效应。方法 :Ames试验、V79细胞染色体畸变试验、小鼠嗜多染红细胞 (PCE)微核试验和显性致死试验。结果 :茶蛋白可抵抗60 Co辐射对沙门氏菌的诱变作用 ,降低中国仓鼠肺V79细胞的染色体畸变数 ,使小鼠PCE微核数明显减少 ,对60 Co辐射引起小鼠的显性致死损害有保护作用。结论 :茶蛋白液可防护60 CO辐照所致突变效应 ,可以认为茶蛋白对预防放射治疗时引起的致突变效应有保护作用 ,对茶蛋白用于临床治疗有参考意义。