复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨复方丹参注射液(ISM)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡保护作用的机制.方法:在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst-PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况,RT-PGR检测par-4和NF-gB P 65基因mRNA表达,Western b1ot检测Par-4和NF-κB P 65蛋白表达.结果:不同剂量ISM预处理1 h可提高PC12细胞的存活率,降低par-4和NF-κB P 65的mRNA表达以及蛋白表达.结论:ISM可剂量依赖性地对抗H2O2的神经毒性作用,其机制可能与降低凋亡基因par-4的表达有关.     

H2O2诱导PC12细胞凋亡的作用机制

目的 探讨H2O2诱导PC12细胞凋亡的作用机制。方法用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst—PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况；通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测par-4、NF—KB、caspase-3基因表达水平的变化；用比色法检测Caspase-3相对活性。结果（1）用终浓度分别为0～400nmol／L H2O2处理PC12细胞8h，随H2O2浓度从25～400nmol／l。增加，PC12细胞存活率逐渐降低（P〈0．05）：     

Par-4基因在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸的抗凋亡作用

目的研究前列腺凋亡反应基因4(Par4)在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)的抗凋亡作用。方法在正常或缺氧条件下培养PC12细胞,分组将不同浓度Par4反义寡核苷酸转染PC12细胞,吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率。Westernblot测定Par4蛋白表达量,比色法检测Caspase3的酶活性。结果缺氧24h,PC12细胞中Par4蛋白表达量上调157.42±7.53,明显高于正常对照组10.51±3.36(P<0.01)。10μmol/L的Par4,ASODN使Par4蛋白降为31.79±3.09,明显低于缺氧组157.42±7.53(P<0.01)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,10μmol/LASODN使细胞凋亡百分数降为(34.5±3.5)%,明显低于缺氧组的(69.3±5.7)%(P<0.05)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞中Caspase3的酶活性上调,10μmol/LASODN使其活性降为0.549±0.078,与缺氧组0.917±0.051相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论Par4基因可能参与了缺氧诱导的PC12细胞损害。Par4ASODN可拮抗缺氧诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与Caspase3酶活性下调有关。     

原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的　探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β淀粉样肽25~35(βamyloidpeptide25 -35, Aβ25-35 )诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制。方法　采用MTT比色法分析细胞存活率, Hoechst33258 PI荧光染色法检测凋亡, RT PCR检测P53和bcl 2基因mRNA表达,Westernblot检测P53和Bcl 2蛋白表达。结果　不同剂量PC预处理PC12细胞 1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡,提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的核固缩,凝聚和碎裂,降低P53mRNA表达以及P53蛋白表达,增加bcl 2mRNA表达以及Bcl 2蛋白表达。结论　PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因bcl 2表达有关。     

蒺藜皂苷对PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin tribulus terrestris,GSTT)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258荧光核染色,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及Western blot方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.01),凋亡细胞减少,凋亡比率下降(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡及影响凋亡相关蛋白的表达有关。     

iNOS和COX-2在过氧化氢预处理诱导的适应性细胞保护中的作用

目的探讨H2O2预处理对PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达的影响及其在适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,采用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测iNOS与COX-2蛋白表达水平。结果用10μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min可明显地抑制20～100μmol.L-1H2O2作用24h后引起的细胞毒性和细胞凋亡,并可明显地促进PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达;选择性iNOS抑制剂AG和COX-2抑制剂NS-398分别阻断H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理可诱导适应性细胞保护作用,其机制之一可能与促进PC12细胞的iNOS与COX-2蛋白表达有关。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤保护作用比较研究

目的：比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤的保护作用。方法：采用细胞株培养的方法,建立PC12细胞H2O2损伤模型,通过MTT法和流式细胞分析仪检测细胞存活率和凋亡率;采用免疫细胞化学染色法检测PC12细胞bcl-2和bax表达。结果：PC12细胞经H2O2损伤后,细胞存活率降低、凋亡率增加,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液处理组均可有效缓解上述改变（P〈0.05）;两药均使bcl-2表达增加（P〈0.05）,bax表达减少（P〈0.05）。结论：甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤具有明显保护作用。其机理可能与增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,进而抑制细胞凋亡有关。     

二苯乙烯苷对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的抗凋亡作用

目的:探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-O-β-D-glucoside,TSG)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的抗凋亡作用。方法:本实验分为正常对照组、H2 O2处理组和H2 O2+TSG(0.1,1,10和50μmol.L-1)预处理组。采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡程度,Western Blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果:与正常对照组相比,细胞经H2O2诱导处理后,细胞存活率降低,LDH释放增加,Hoechst染色显示凋亡细胞增多,细胞核呈固缩突亮或碎块状致密浓染,Western Blotting显示促凋亡蛋白Bax表达升高,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bcl-2与Bax的比值降低。不同浓度TSG预处理能改善H2O2所致的细胞存活率降低,减轻细胞凋亡程度,减少促凋亡蛋白Bax的表达以及增加抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:TSG可抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与抗凋亡有关。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

咯利普兰对H_2O_2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨PDE4抑制剂咯利普兰(rolipram)对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制。方法以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞存活率;碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化;化学比色法测定细胞清除羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2·)的能力;以及培养上清液中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。Western blot和Real-time RT-PCR检测细胞内硫氧还蛋白(Trx)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果咯利普兰能明显提高H2O2损伤的PC12细胞存活率,恢复细胞增殖;提高细胞清除·OH和O2·的能力;降低MDA和NO含量,提高GSH含量和SOD活性;使Trx蛋白和mRNA表达增加,同时下调iNOS蛋白和mRNA表达。结论咯利普兰对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力相关。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

川芎嗪对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨盐酸川芎嗪对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法采用川芎嗪预处理PC12细胞后,制备H2O2细胞损伤模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及细胞活性氧(ROS)水平来反映细胞损伤程度,流式细胞术和蛋白印迹法分析细胞凋亡发生机制。结果川芎嗪预处理后,PC12细胞的存活数提高,LDH释放及ROS水平显著降低(P<0.05),总凋亡率降低,caspase-3活性降低,Bax/Bcl-2比值降低。结论川芎嗪预处理后可以降低H2O2诱导的PC12细胞凋亡。     

Propofol attenuates oxidative stress-induced PC12 cell injury via p38 MAP kinase dependent pathway

Aim： To investigate the neuroprotective effect of propofol and its intracellular mechanism on neurons in vitro. Methods： Cell viability was determined with 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl tetrazolium bromide reduction. Apoptotic cell death was determined by Hoechst 33258 staining and a fluorescence-activated cell sorter. The caspase-3 activity was measured by fluorometric assay. Mitogenactivated protein （MAP） kinase phosphorylation was detected with Western blotting. Results： The pretreatment of rat pheochromocytoma cell line PC 12 with propofol （1-10 μmol/L） resulted in a significant recovery from hydrogen peroxide （H2O2）-induced cell death and the inhibition of H2O2 induced caspase-3 activation and PC12 cell apoptosis. Propofol inhibited the H2O2-induced p38 MAP kinase, but not c-Jun N-terminal kinase or extracellular signal-regulated kinase 1 and 2 activations. Conclusion： Propofol might attenuate H2O2-induced PC 12 cell death through the inhibition of signaling pathways mediated by the p38 MAP kinase.     

3，4，5，6-四羟基（口山）酮对缺氧／复氧所致PC12神经细胞凋亡的保护作用涉及DDAH／ADMA途径

目的 研究3，4，5，6-四羟基。（口山）酮对缺氧/复氧所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞凋亡的保护作用与二甲基精氨酸-二甲胺水解酶（DDAH）/非对称性二甲基精氨酸（ADMA）通路的关系。方法 将体外培养的PC12细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组和3个剂量的。山酮（3、10、30μmol·L^-1）处理组。用hoechst33342染色和膜联蛋白V（Annexin V）＋碘化丙啶（PI）流式细胞仪法检测细胞凋亡率，用高效液相色谱（HPLC）法测定DDAH活性及ADMA的浓度；用活性氧及caspase-3试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）生成及caspase-3活性。结果缺氧/复氧处理PC12神经细胞能增加ROS生成，降低DDAH活性，升高ADMA水平，激活caspase-3诱导细胞凋亡。外源性ADMA（3、10和30μmol·L^-1）能激活caspase-3并诱导PC12神经细胞凋亡。3，4，5，6-四羟基。（口山）酮（3、10和30μmol·L^-1）能抑制缺氧/复氧所致的PC12神经细胞凋亡，抑制ROS生成，增加DDAH活性，降低ADMA水平，抑制caspase-3活性。结论3，4，5，6-四羟基。（口山）酮对缺氧／复氧所致PC12神经细胞凋亡具有保护作用，其机制与抑制氧化应激调节DDAH/ADMA途径有关。     

西洋参皂苷对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导PC12细胞损伤模型,化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶活性,并在显微镜下观察其形态学特征。结果200μmoL/L H2O2诱导PC12细胞,10 h呈明显损伤作用,250μg/mL西洋参皂苷对H2O2致PC12损伤的细胞有增殖作用。结论西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧能力有关。     

H_2O_2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的　探讨H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用及与脑源性神经营养因子 (brain de rivedneurotrophicfactor,BDNF)的关系。 方法　采用MTT法检测细胞活力 ,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡 ,间接免疫荧光流式细胞术检测细胞BDNF的表达。结果　PC12细胞经 10 μmol·L-1H2 O2 预处理 90min后 ,2 0～ 6 0 μmol·L-1H2 O2 对PC12细胞生长的抑制程度明显下降 ,H2 O2 (2 0、30μmol·L-1)对PC12细胞凋亡的诱导作用明显受到抑制 ,BD NF的表达强度增强。结论　H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用 ,其作用机制可能与增加脑源性神经营养因子表达有关     

人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

通过测定细胞的凋亡率 ,内源性NO的水平和iNOSmRNA的表达及半胱天冬酶 3的活性 ,探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理 .结果表明多巴胺 (0 .15～ 0 .60mmol·L- 1)可诱导PC12细胞凋亡 ,预先经过 10 μmol·L- 1Rg 1处理后 ,PC12细胞的凋亡率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,同时NO2- 水平和iNOSmRNA表达水平及半胱天冬酶 3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P <0 .0 0 1) .结果提示 ,Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶 3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理 .