公羊精子对完整牛卵的体外穿透

科学家作了许多努力以弄清存在于绵羊和山羊间的受精屏障。实验表明,在自然状态下绵羊精子就能使山羊卵子受精,而绵羊用山羊精液授精后的受精率极低。McGovern(1973)研究表明,绵羊卵子并不具有阻 止山羊精子穿入的内部屏障,低受精率是由于绵羊输卵管中存在影响山羊精子运输、存活和获能的因子。所有试验都是在自然状态下进行的,即雌性动物通过子宫内或输卵管途径用异种精子授精。本试验将采用完全不同的方法,绵羊和牛的卵母细胞在体外培养 成熟并在体外受精。     

体外成熟和受精的犊牛

母牛屠宰后3小时,卵巢置于199培养液在15—20℃下送列宁格勒肉品联合工厂实验室,用每毫升含1单位肝素的199培养液或液,从卵巢中冲洗出切开卵泡的卵母细胞。冲洗3次之后,将冲洗液里的卵子放入凡士林油覆盖的199培养液微滴中。培养液含血清20％,青霉素100单位/毫升,链霉素50微克/毫升。在有5％二氧化     

发情牛血清和绵羊卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟和受精的影响

本试验研究了绵羊卵泡卵母细胞在体外成熟时,以M-199为基础液,加入FBS,OCS,以及不同直径(小于8mm或大于10mm)卵泡的卵泡液对体外成熟率和体外受精率的影响。在添加同等浓度促性腺激素(FSH,0.4μg/ml;LH,2iu/ml)时,添加5%FBS或5%OCS的成熟率分别为10.00%和69.30%(P<0.05);体外受精分裂率分别为0和60.84%(P<0.05)。在添加以上浓度促性腺激素和5%OCS的基础上添加3%大卵泡液或小卵泡液时,卵母细胞成熟率分别为53.10%和78.20%(P<0.05);体外受精分裂率分别为50.00%和71.67%(P<0.05)。结果表明,发情牛血清配合大卵泡液可以充分满足绵羊卵母细胞体外成熟的需要。     

用一步细管法移殖牛体外受精冻胚

本场1985年11月开展了体外受精技术从试验到实用化的研究,1987年4月用一步细管法移植了牛的体外受精的存活冻胚,得到双犊。 体外受精的方法基础按梶原等的方法进行。使用的卵泡卵是1987年11月5日从芝浦牧场的日本黑牛卵巢上取出的150个未成熟卵母细胞。用成熟培养基(在25mM Hep-es缓冲Earle型TCM-199中添加5％灭活供体血清,丙酮酸钠,乳酸钠和抗菌素)在5％二氧化碳、95％氧气、38℃条件下培养24小时。     

不同离心速率对波尔山羊精液低温保存效果的影响

本试验研究了离心速率对波尔山羊精子的活率、顶体完整率、存活时间、生存指数的影响 ,以期为波尔山羊的推广、利用提供科学依据和有效方法。对波尔山羊精液进行 10 0 0、2 0 0 0、30 0 0、4 0 0 0rpm离心处理 ,用含葡萄糖、柠檬酸钠、EDTA和卵黄的稀释液代替精清 ,在 4℃下保存 ,每隔 12h检测一次精子活率和精子顶体完整率。结果表明 :在这四种离心处理中以 10 0 0rpm处理效果最好 ,生存指数和保存 4 8h后的精子活率显著优于其它离心处理 (P <0 .0 1) ,精子顶体完整率显著高于其它三种离心处理 (P <0 .0 1) ,精子的存活时间达到 90h ,精子顶体完整率、精子活率和生存指数随着离心转数的增加而下降。离心冲洗处理为精子的冻前保存提供了新的试验方法 ,为进一步深入研究精清和稀释液在精液中的作用提供了新的思路。     

猪卵子体外受精研究

本研究旨在探讨影响猪卵子体外成熟、猪精子体外获能和猪卵子体外受精的某些因素。主要研究:(1)猪卵体外成熟所需的时间;(2)促性腺激素和猪卵泡液对猪卵体外成熟的影响;(3)咖啡因、肝素和离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能的促进作用;(4)不同体外受精次数对猪卵体外受精结果的影响;(5)不同种类猪精液的体外受精能力。各试验组的结果比较主要根据体外受精后卵子的卵裂率,数据用卡方(x~2)进行统计学分析。 试验结果表明:(1)猪卵子体外成熟需要32—36小时,经32—36小时体外成熟的 卵子体外受精后卵裂率(2—4细胞期)达31.16％,明显高于其他对照组(P<0.01);(2)促性腺激素和猪卵泡液能够促进猪卵子体外成熟,当0.25国际单位/毫升PMSG和10％猪卵泡液,或者0.25国际单位/毫升FSH和10％猪卵泡液分别加入到猪卵子体外成熟中,经此培养后的猪卵子体外受精卵裂率分别达到23.95％和35.00％,明显高于对照组(P<0.05);(3)咖啡因、肝素、离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能有促进作用。在精子预培养液中加入0.05毫克/毫升肝索,在受精液中加入2毫克/毫升咖啡因,获得了体外受精后最高的卵裂率36.16％,明显高于其他组(P<0.01);(4)多次体外受精法有助于提高体外受精率,因为卵子的体外成熟是不同步的,但是超过2次又是有害的。用2     

Percoll密度梯度离心法分离牛、羊精子试验

试验采用Percoll密度梯度离心法对牛、羊精子进行分离,试验结果表明,当温度为4℃、15℃,用250克离心25分钟,分离牛冻精,精子回收在3-7层较密集,占回收精子总数的85.1％-87.4％,8-9层精子占到8.8％-9.14％,从第6层精子活率明显提高,畸形率显著降低,第8层低于10％,第9层无畸形精子,两种温度间差异不显著。通过试验选择出牛冻精在室温条件下适宜的分离条件,离心力250克,离心时间15分钟,取8、9层精液给生产母牛及超排供体牛输精,获得6头犊牛,其中4头母犊、2头公犊。 绵羊鲜精在室温15℃-18℃,250克离心15-20分钟分离条件下,得到清晰且较均匀的分离层,分离精子的回收率、畸形率、活力与分离牛冻精结果类同。母羔率75％(18/24)。用注射器作为分离管,直接从底部取第9层精液,母羔率达76.5％(13/17)。     

一步稀释对在不同冷冻保护剂中冷冻的体外受精牛胚胎体外培养和直接移植的影响

本研究的目的是确定甲基cellosolve(MC)二甘醇(DEG)、甘醇(EG)和1,2-丙三醇(1、2Propanediol PG)对冷冻的牛体外受精胚胎在支持培养基中进行体外培养和直接移植对其直接用水气是否有益的作用。 仅将具有致密卵丘且用已获能精子受精的牛卵母细胞在添加有5％超排牛血清(SCS)中,培养20—22小时(38.5℃,5％CO_2)。7—8日龄胚胎在1.3M甲基cellosolve(MC),1.1M二甘醇(DEG),1.8M甘醇(EG),1.6M丙三醇(PG)和1.1M buthylene glycol(BG)溶液中平衡10分钟,再装入0.25毫升塑料细管中,于0℃放进酒精冷冻机中,然后以-1℃/分钟从0℃降至-6℃植冰,保持10分钟,再以-0.3℃/分或-0.5℃/分降到-30℃。在将塑料管入液氮中保存。在30℃水浴中解冻后,把胚胎放入TCM-199中(内含5％SCS)培养48小时,进行胚胎的直接再水化。解冻后发育至较晚阶段且形态好的胚胎被认为是存活的。将放入每种冷冻保护剂中的某些胚胎在不去掉冷冻保护剂的情况下进行非手术移植,在冷冻 和直接再水化期间,对于保护孵化胚胎的浓度来说1.8M EG(64.3％)和1.3M MC(54.5％),1.1M DEG(60.0％)要优于其他浓空。胚胎冷冻的速度中(0.3℃/分和0.5℃/分)没有明显差异(P≤0.05),但是以0.3℃降温时,体外培养后形成孵化胚胎的比率为64.6％(31/48);而以0.5℃/分冷冻的则为2     

以精子作为外源DNA载体通过人工授精途径生产转基因绵羊的研究

本试验以绵羊精子作为外源基因载体,将获能处理的精子与未获能仅洗涤处理的精子分别同bGHDNA(牛生长激素基因)共同孵育30～50分钟,放射自显影结果表明:两种处理的精子都能携带外源DNA;携带外源DNA精子的比率分别为5％—6％(洗涤处理)和11％—12％(获能处理)。将处理的精液给自然发情的母羊输精,输精方法采用常规子宫颈法或手术——子宫角、输卵管法。207只母羊的输精效果;第一周期不返情138只(66.7％);产羔98只。斑点杂交证明,98只羔羊中有5只整合外源bGHDNA,在斑点杂交呈阳性反应的5只中有3只为Southern杂交阳性。本试验证明:以精子为外源DNA载体用人工授精方法可以生产整合外源基因的羔羊。     

牛卵母细胞体外成熟培养时间对体外受精及早期胚胎体外发育的影响

本文报道了牛卵母细胞经不同时间体外成熟培养对其后体外受精及早期胚胎体外发育能力的影响。 实验用的母牛卵巢从附近的屠宰场收集。卵母细胞采用穿刺抽取法采集。将外观形态正常的卵母细胞随机分成6组,在含10％发情牛血清的TCM-199培养液中分别经12(G1)、16(G2)、20(G3)、24(G4、对照组)、28(G5)和32小时(G6)的体外成熟培养(IVM)后进行体外受精(IVF),早期胚胎(2-8细胞阶段)在采用卵泡颗粒细胞作为支持细胞的单层上皮细胞液滴中进行 复合培养至囊胚及孵化囊胚阶段。结果表明,经过12—32小时IVM的牛卵母细胞,在IVF后48小时检查,卵裂率均可达到81％以上(80.9％—91.9％);但IVM时间短至12小时(G1)及超过24小时(G5、G6)的卵裂率(分别为80.9％,83.5%和83.4％)显著地低于24小时的对照组(G4,91.9%,P>0.05)。     

青春期少男“下身”怪味哪里来

<正>勇勇今年16岁。近段时间,他总觉得自己在换内裤的时候"下身"会发出一股难闻的怪味,特别是在天气炎热或运动之后怪味更是严重。可勇勇的"下身"并没有什么异常,这是怎么回事呢?其实,勇勇"下身"出现的怪味是一种生理现象,一般男孩子进入青春期后都会出现,只不过这种怪味的轻重程度和个人对其敏感性不同而已。这种怪味主要来自以下几个方面:随着青春期的发育,男孩阴囊里的睾丸开始产生精子,而精子必须在合适温度(比体温低1～2℃)下才能产生。     

卵母细胞体外成熟体外受精生产犊牛

建立的牛体外受精（ＩＶＦ）程序包括屠宰厂采集卵巢、卵母细胞外培养成熟（ＩＶＭ０、精子体外获能受精和受精卵体外发育成胚泡。将卵巢置于２３℃－３８℃的生理盐水中运输，能使大量的卵母细胞在体外成熟和体外受精后发育成胚泡。卵泡切开后，用一匙子将其内容物刮出以采集多个卵母细胞，而不用１８号针头抽取，这样每对卵可采集卵母细胞１３．４个，用针头抽取每对卵巢仅能采集７．２个。体外成熟和体外受精后，卵裂能力取决于卵     

用无蛋白质培养液培养牛卵母细胞

许多实验室通常以体外成熟、体外受精(IVM/IVF)的牛卵母细胞中获得桑椹胚及囊胚。然而,培养液中仅添加血清时,大多数胚胎在8～16细胞期或之前停止发育。用含有卵丘细胞或输卵管单层细胞的培养液培养,可以克服这种发育阻断。另一方面,输卵管细胞在无细胞培养液,典型的有TCM-199,加血清中培养24～48小时后,同输卵     

西宁地区不孕症患者体外受精与胚胎移植的护理

体外受精与胚胎移植(In vitro fertilization and embryo transfer IVF-ET)给不孕症患者带来希望,它是将不孕夫妇双方的精子与卵子取出体外受精并进行培育,当培养至4～8细胞时．将胚胎移至母亲的子宫腔内,这是一项高技术的助孕方法,该技术在平原发达地区已广泛开展;但在西宁地区(海拔2260m)低氧、低气压地区尚属首次。     

山羊卵巢卵母细胞的体外受精

本试验选用10mMHepes缓冲的①TCM199+FCS(10％)+hCG(20微克/毫升);②TCM199+FCS+hCG+E_2 (1微克/毫升)和③Ham′sF_(12)+FCS+hCG+E_2三种培养基,研究了山羊卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精。252枚卵丘细胞层完整而致密的卵母细胞培养24—26小时,其成熟率分别为55.6％(25/45)、79.4％(104/131)和76.3％(58/76)。结果表明,TCM199和Ham′sF_(12)都是山羊卵母细胞体外成熟的合适培养基;雌激素的存在可显著地提高其成熟率;24小时的成熟培养可使山羊卵母细胞的核成熟。用17枚经①和②体外成熟的卵母细胞进行体外受精,受精率为70.6%(12/17)。将12枚受精卵(pbⅡ阶段)移植给5只受体山羊,2只妊娠,妊娠率达到40％(2/5)。其中一只妊娠受体于移植后52天因意外事故死亡,取得一只发育正常 的雄性胎羔,胎长8.5厘米。另一受体已妊娠4个月,预产期为1992年4月7日,属世界首例。     

非致死热疗对低剂量率照射的增敏作用

中国仓鼠V_(79)原代细胞在F_(12)培养基中培养(37℃、潮湿、5%CO_2、95%空气、pH=7.3),取指数生长细胞经处理置于T75瓶(2.5×10~5细胞/瓶),37℃培养12h,细胞于Lauda WGW/B水浴中作加热处理,温度变化小于0.05℃;经胰蛋白酶处理、冲洗、计数、形成集落,培养7～9天后固定、染色、测存活率,部分细胞用流式细胞光度计测细胞周期位置.高剂量率照射用15MeV线性加速器,5Gy/min,热处理后立即照射,低剂量率照射用~(60)Co,0.8Gy/min,与加热同时进行,源距细胞180cm.     

精子显微注射研究的现状

精子显微注射是指用显微操作的方法将处理后的精子核或完整精子直接注入卵质,从而完成受精过程。作为一种更新的辅助受精方法,精子注射无论从理论还是实践上都有广阔的应用前景,因为这一方法排除了透明带及精-卵膜融合这两个障碍,精子不需要有运动能力、存活或完整性。     

公牛精子存活时间的快速测定法

精子存活时间的长短能最客观地反映精子的受精能力,它一方面决定于生理上的完善性,一方面决定于处理技术、保存规程和其他条件。 冻精应用前,按规程从每次射精量中取两个剂量的冻精,38℃水浴解冻。解冻后精子活力不低于3级,存活时间不少于5小时。但这些指标只能说明是否适用,而实际生产中经常要求在短时间内准确判定精子     

牛体外受精卵核移植技术的研究

将采自屠宰场的牛卵巢中的卵母细胞以TCM-199+10％FCS培养成熟,用0.1％的透明质酸酶将卵丘细胞除去,以10微克/毫升的细胞松弛素B处理胚胎后,用固定在显微操作器上的微吸管将卵母细胞透明带内第一极体下面的细胞质吸去一部分,然后将取自体外受精后发育至8细胞期胚胎的卵裂球注入去核卵母细胞的卵周隙之中,将移入卵核的卵母细胞置于融合液中并施以110V,40微秒的脉冲刺激后,将胚胎移入TCM-199+5％OCS的培养液中培养,以观察胚胎的融合率及发育率。结果表明,核移植胚的融合率为71.1%(27/38),发育为2-8细胞期的胚胎占培养的核移植胚胎总数的42.3％(11/26),其中有1枚胚胎发育至桑椹胚阶段。     

用自动降温程序快速冷冻细管牛胚胎

把含在1.5M二甲亚砜(DMSO)的磷酸盐缓冲液(PBS)中6.5—9天的牛胚胎,以2℃/分的速率,从诱发结晶的温度降至-25℃,然后直接放入液氮或在-25℃中放置10分钟后再入液氮。以9℃/分的速率,将其从20℃降至-5℃,于-5℃时依靠喷射液氮蒸气自动诱发结晶。试验Ⅰ组,胚胎直接放20℃水浴中解冻。试验Ⅱ组,胚胎的解冻要放入37℃的水浴中进行。用体外培养或移植的方法确定其存活力。试验Ⅰ组解冻