人肺腺癌细胞系与支气管上皮细胞系差异蛋白质组学研究

目的:通过对肺腺癌细胞系A549细胞和正常上皮细胞系HBE蛋白组成差异的分析,寻找与肺癌发生、发展相关的差异蛋白,为进一步阐明肺癌发病机制提供更多有价值的信息;为诊断或者预后提供候选分子标记物。方法:运用固相pH梯度双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)分析技术筛选出A549细胞和支气管上皮细胞系HBE间表达水平显著差异的蛋白,并且利用免疫印迹方法对筛选的标记物蛋白进行验证。结果:筛选出21个差异蛋白,涉及到细胞的代谢、蛋白质修饰、细胞运动,通道蛋白和信号转导调控等方面。鉴定并且验证在A549细胞中显著高表达热休克蛋白27(HSPB1)。结论:肺腺癌细胞系与正常支气管上皮细胞系蛋白质表达存在显著差异,其中肺腺癌中高表达HSPB1可能在肺腺癌癌变过程中发挥重要作用,本结果为进一步寻找肺腺癌癌变蛋白标志物奠定了基础。     

H22肝癌小鼠血清差异蛋白质的质谱鉴定

目的 分析正常小鼠和H22肝癌小鼠血清之间差异表达的蛋白并对部分差异蛋白进行鉴定分析,筛选可能与肝癌发生密切相关的蛋白质.方法 利用双向凝胶电泳技术（2-DE）与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）,分析正常组和肿瘤组筛选并鉴定部分差异表达的蛋白,再进行生物学分析.结果 通过2-DE图谱研究发现,与正常组相比,肿瘤组存在明显差异的蛋白质点.选择其中可能为关键功能蛋白的蛋白点进行质谱分析,获得肽指纹图谱（PMF）,运用Mascot软件查询NCBI数据库分析并鉴定得出其中2个蛋白：假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白.结论 肝癌的发生机制与假尿苷合成酶和线粒体核糖体大亚基蛋白2个差异表达蛋白密切相关,其参与肝癌的发生发展.     

糖尿病大鼠胰腺差异表达蛋白质组分析

目的 运用蛋白质组学方法,对糖尿病大鼠胰腺蛋白质的表达进行分析。方法用链脲佐菌素（STZ）诱发建立1型糖尿病大鼠模型。用双向凝胶电泳（2D-PAGE）分离大鼠胰腺组织蛋白质,图像分析软件对比分析大鼠的双向电泳图谱,差异表达蛋白经胶内酶切,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析获得肽质量指纹图,使用Mascot方法进行检索鉴定。结果 对11个差异表达蛋白质进行分析鉴定,其中4个蛋白质得到有意义结果。结论 糖尿病大鼠胰腺蛋白质组的分析,有助于探索糖尿病的发病机制。     

肺腺癌SPC-A1细胞双向电泳图谱的优化

双向电泳技术＋质谱技术已经成为蛋白组学研究的基本策略之一。获得细胞或组织经过某种处理前后的双向电泳图谱，然后经专业2－D图像分析软件找到差异表达（有无的差异或是表达量的差异）的蛋白质斑点，再经过质谱分析鉴定这些蛋白质的种类，可以全面、系统地研究该处理因素对总蛋白质表达的影响。而要想准确地获得某种组织或细胞的双向电泳图谱，建立与之兼容的方法必不可少。本文通过使用和SPC－A1细胞株兼容的总蛋白质抽提方法，采用不同pH梯度的IPG（immorbilized pH gradient）干胶条，获得了较为清晰的蛋白质斑点，并重点分离了特定局部区域的蛋白质，优化了本细胞株的双向电泳图谱，为进一步分析药物处理前后的总蛋白质表达差异创造了条件。     

脑瘤患者脑脊液肿瘤相关蛋白的蛋白质组学初步研究

通过比较脑肿瘤患者和正常人脑脊液的二维凝胶电泳图谱（two-dimensional electrophoresis,2DE）,并对差异蛋白进行质谱鉴定,以寻找肿瘤特异脑脊液蛋白。以脑肿瘤患者和正常人的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）2DE分离总蛋白质,凝胶经银染显后,用ImageMaster2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质。结果得到肿瘤患者脑脊液蛋白点924个,正常脑组织蛋白点507个,匹配512个,匹配率分别为55．4％和84．3％,去冗余后发现,有35个蛋白点只在脑肿瘤患者脑脊液图谱中出现。肿瘤患者脑脊液和正常对照脑脊液双向电泳图谱有明显差别,但是本实验尚未对这些差异蛋白进行质谱鉴定,所以未找出肿瘤特异蛋白。     

甲状腺乳头状癌的蛋白质组学研究

目的 对甲状腺乳头状癌(PTC)的蛋白质组进行研究,并与正常组织对比,寻找其中差异显著的蛋白.方法 应用蛋白质组学技术,提取10例PTC与周围正常甲状腺组织(NT)的蛋白质样品进行双向电泳分离及对比,应用Image Master软件对电泳图谱进行分析;将选出的差异性蛋白质点进行质谱鉴定和数据库查询.结果 得到了PTC及NT的双向电泳图谱;通过软件分析、对比,从中初步选取4个差异蛋白质点进行质谱鉴定,确认为4种相应的蛋白质:其中脂皮质蛋白(annexinⅠ)、peroxiredoxin Ⅰ、线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase)在PTC中表达上升,碳酸酐酶Ⅰ(carbonic anhydrase Ⅰ)在PTC中表达下降.结论 蛋白质组学为PTC的研究提供了新的发展方向,在寻找肿瘤的特异性蛋白标记物、进一步探究肿瘤的发病机制以及寻找治疗肿瘤的分子靶点等方面发挥作用.     

N—乙酰半胱氨酸对气道上皮细胞核因子—kB表达的影响的实验研究

目的：探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对炎前性细胞因子TNF-α刺激正常人气道上皮细胞株（16HBE）和肿瘤病人气道上皮细胞株（H2920的核因子-kB（NF-kB）表达的影响及作用机理。方法：采用Western-Blot免疫印迹电泳法：提取胞核蛋白，经SDS-PAGE凝胶电泳分离，以抗NF-kB抗体P50，P65作探针来确定NF-kB蛋白的存在，观察16HBE细胞和H292细胞的NF-kB在不同剂量（100，1000u/ml)和不同作用时间（1，2，4，6hrs)的TNF-α刺激下的表达；以及在相同TNF-α（(1000u/ml,2hrs)刺激条件下，不同剂量NAC（4，8，16，32mM)对NF-kB活化抑制作用。结果：TNF-α在体外能刺激激活人气道上皮细胞16HBE和H292的NF-kB表达；同时发现：NAC能以一种剂量依赖方式抑制由TNF-α刺激激活的NF-kB。结论：NAC通过抑制上皮细胞激活NF-kB的途径，可能在哮喘的炎症控制中起着一定作用。     

新基因NOR1对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响

目的:研究NOR1基因对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响.方法:将pcDNA3.1( )/ NOR1的表达质粒经脂质体导入HepG2 细胞,Northern blot筛选出阳性克隆,通过双向电泳分离过表达NOR1的HepG2细胞内蛋白质,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定.结果:鉴定出6种表达上调的蛋白质点,包括锌指蛋白、肿瘤坏死因子受体、酪氨酸蛋白磷酸化受体等,这些蛋白质涉及基因转录、信号转导等肿瘤发生相关事件.结论:NOR1基因可能通过上调这些蛋白参与多种途径影响肝癌的发生发展.     

蛋白质组学技术分析5-aza-2dC处理白血病细胞HL-60前后的差异表达蛋白质

目的:研究甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine, 5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞HL-60细胞蛋白质表达谱的影响,探讨5-aza-2dC抗急性髓系白血病作用的机制.方法:采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离5-aza-2-dC处理与未处理HL-60细胞的总蛋白质,PDquest 图像分析软件识别差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点. 然后采用Western 印迹检测差异蛋白质半乳糖凝集素1(Galectin-1) 在药物处理与未处理HL-60细胞中的表达水平.结果: 建立了5-aza-2dC 处理与未处理HL-60 细胞蛋白质的2-DE 图谱,识别了35个差异表达的蛋白质点,鉴定了27个差异表达的蛋白质,其中包括Galectin-1在内的21个蛋白质在5-aza-2dC 处理后的HL-60 细胞中表达上调,6个蛋白质表达下调或缺失.Western 印迹结果证实Galectin-1在5-aza-2dC 处理HL-60细胞中表达上调.结论:21个表达上调蛋白质的编码基因可能是HL-60细胞的甲基化失活基因,它们可能与急性髓系白血病发病以及5-aza-2-dC抗人急性髓系白血病细胞作用有关.     

蛋白质组学检测结直肠腺瘤及早期恶变患者血清的差异蛋白质变化及意义

目的： 通过比较分析结直肠腺瘤及早期恶变患者血清蛋白质的表达差异,寻找结直肠癌早期诊断的血清标记物。方法：建立结直肠腺瘤及腺瘤早期恶变患者血清蛋白双向电泳图谱,比较分析差异蛋白质斑点,切取酶解行MALDI-TOF／TOF质谱分析鉴定。结果：成功建立结直肠腺瘤及早期恶变患者血清蛋白双向电泳图谱,其平均蛋白质点分别为1672±73和1732±46,早期恶变组表达差异大于1.5倍的蛋白质斑点有28个,其中15个下调,13个上升;质谱分析鉴定出23个蛋白质,鉴定率达82.14%;合并重复鉴定的蛋白质,共获得的差异蛋白13种,其中8种为上调蛋白,5种为下调蛋白,分为6类,包括蛋白酶抑制剂、补体系统、免疫球蛋白、角质素、信号转导蛋白及未知蛋白。结论：蛋白质组学技术能灵敏分析结直肠腺瘤及早期恶变患者血清蛋白质的异常改变,本研究鉴定的蛋白质可能成为结直肠癌早期诊断的血清肿瘤标记物。     

老年性痴呆大鼠血清的蛋白质组学研究

目的以老年性痴呆（AD）大鼠为研究对象,应用蛋白质组学方法在血清中筛选与AD密切相关的蛋白质,为研究AD的发病机制提供理论支持。方法通过Morris水迷宫记忆行为学筛选符合痴呆标准的AD大鼠模型,收集AD组大鼠及假手术组大鼠的血清后,去除血清中的高丰度蛋白质并进行蛋白质浓度的测定,之后进行双向凝胶电泳,挑选差异最为明显的蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,经数据库查询,鉴定差异蛋白质。结果经观察二维凝胶电泳图谱后,发现AD组大鼠与假手术组大鼠的血清中共有10个差异明显的蛋白质点,选取了2个最为明显的蛋白质点进行鉴定,分别为：血浆视黄醇结合蛋白前体,补体成分4,基因2（C4b）。结论C4b是新发现的与AD相关的蛋白质,有可能是潜在的AD标志物,有助于更深刻地理解AD的发病机制。     

中国对虾肝胰腺蛋白质组学双向电泳技术体系的建立

建立中国对虾肝胰腺蛋白质组学双向电泳技术体系。利用双向电泳技术,以中国对虾肝胰腺为研究对象,通过离心等手段提取蛋白,双向电泳分离,硝酸银染色,进行图谱分析。结果表明:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点。验证了用双向电泳技术研究对虾免疫及其他生理现象的可行性。通过建立中国对虾蛋白质组学双向电泳技术体系,可极大拓宽对虾免疫生理研究的途径,从蛋白质水平探讨对虾发病机制,寻找有效药物靶点,为生物信息学分析奠定了基础,提供了理论依据。     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化

背景：肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤。 目的：比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制。 方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。 结果与结论：相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白。结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变。     

骨肉瘤组织与良性骨肿瘤的比较蛋白质组学分析

目的： 分析骨肉瘤与骨良性肿瘤差异蛋白质质点,寻找影响骨肉瘤恶性生物学行为的分子指标。方法：固相pH梯度双向凝胶电泳分离5例骨肉瘤组织与5例良性骨肿瘤组织总蛋白。Deep purple荧光染色, ImageMaster 2DE 软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定肽质指纹图谱并查询SWISS-PROT数据库。结果：获得重复性较好的双向电泳荧光染色图谱。图像分析检测骨肉瘤组织平均蛋白点数为1 386±101,良性骨肿瘤组织平均蛋白点数为1 270±202。初步鉴定出22个差异表达蛋白质点, 其中15个在骨肉瘤中表达上调,以锌指蛋白133 （zinc finger protein 133,Znf133)、laminB和T-复合多肽1（tailless complex polypeptide 1,TCP-1)上调明显;7个在骨肉瘤中表达下调,其中蛋白激酶C抑制因子-1（protein kinase C inhibitor protein 1,KCIP-1)表达缺失。结论：骨肉瘤组织与良性骨肿瘤的蛋白质表达存在明显差异,其中Znf133、laminB、TCP1、KCIP-1等可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为诊断骨肉瘤的分子标记物或治疗靶点。     

增生性瘢痕与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的 比较增生性瘢痕与正常皮肤组织的蛋白质组表达差异,筛选出增生性瘢痕的特异蛋白质.方法 以中山大学附属第一医院烧伤外科2010年1月至5月8例增生性瘢痕患者的增生性瘢痕组织和3例整形外科患者正常躯干皮肤为研究对象,运用蛋白质组学技术、双向凝胶电泳对比分析增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中蛋白表达差异,选择差异蛋白点进行MALDI - TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 获得重复性较好的双向电泳荧光染色图谱,增生性瘢痕和正常皮肤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白点分别为2975和3053,对其中表达差异超过4倍的蛋白点进行质谱分析和数据库检索,共鉴定出24种蛋白质,其中上调蛋白有11种,下调蛋白有13种.结论 成功地建立增生性瘢痕的双向电泳荧光染色图谱,鉴定出增生性瘢痕组织与正常皮肤组织间的差异蛋白质表达.     

质谱技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异蛋白

目的应用双向电泳(2-DE)和质谱技术分析多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的差异表达蛋白,寻找MM特异性蛋白标记物。方法收集MM患者5例、其他血液系统恶性肿瘤患者及正常对照者血清各10例,三组样本等体积混合,去除高丰度白蛋白和IgG,应用2-DE分离3组血清样本,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过凝胶软件分析MM与疾病对照组及正常对照组血清2-DE图谱,共得到51个三倍以上差异蛋白点,对上述差异蛋白进行MALDI-TOF-MS质谱分析,共鉴定出22种阳性蛋白,其中13种蛋白表达上调,包括高表达蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RIO1亚型2、Rab相关蛋白Rab37亚型2、HP蛋白、锌指结构α2糖蛋白等;9种蛋白表达下调,包括α2-HS-糖蛋白、转铁蛋白、多聚素-1等。结论 MM组与疾病对照组和正常对照组间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有助于MM早期诊断和鉴别诊断,并为MM发病机制的进一步研究提供线索。     

结核分枝杆菌耐药株和敏感株菌体碱性蛋白的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐多药菌株与敏感菌株菌体碱性蛋白的蛋白质表达差异。方法运用双向电泳技术（2-DE）比较8株耐多药菌株与9株敏感菌株的菌体碱性蛋白表达图谱差异，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸一电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF-MS）进行质谱分析，将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果比较发现重复性较好的差异蛋白质斑点10个，获得5个明确的肽质量指纹谱，鉴定5个蛋白分别为：NADH-CoQ氧化还原酶B链（NuoB，Rv3146）、乙酰羟酸合成酶小亚基（HvN，Rv3002c）以及3个假定蛋白，分别由Rv2159c、Rv0068、Rv0992编码。结论上述蛋白的鉴定在深入研究结核分枝杆菌耐药形成机制，筛选具有潜在价值的结核药物靶位和耐多药结核病诊断的分子标志物方面具有参考价值。     

霍乱弧菌O1群稻叶型流行株和非流行株的蛋白质谱特征分析

目的探讨霍乱弧菌01群稻叶型流行株和非流行株的蛋白表达的差异。方法利用裂解液处理霍乱弧菌,提取全菌蛋白;采用pH梯度等电聚焦对菌蛋白进行双向电泳;考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱,并利用ImageMaster2DElite5．0图象分析软件进行分析,找出差异蛋白;在此基础上,胰蛋白酶消化这些特殊差异蛋白,并进行质谱（MALDI-TOF—MS）分析。结果获得了（1081±16）个蛋白斑点,蛋白主要集中在pI4．00—7．20之间,重复胶的匹配点数为（1057±28）,匹配率为97．85％;发现了有明显差异的21个蛋白点,并进行了质谱鉴定。结论获得了霍乱弧菌01群稻叶型流行株和非流行株的差异表达蛋白。     

霍乱弧菌O1群有毒株和无毒株的蛋白质谱特征分析

目的 利用双向电泳和质谱鉴定技术探讨环境和人体中霍乱弧菌蛋白表达的差异.方法 利用适当的裂解液处理霍乱弧菌,提取全菌蛋白;采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳;考马斯亮蓝染色后获得双向电泳图谱,并利用ImageMaster 2D Elite 5.0图像分析软件进行分析,所得的数据采用SPSS15.0进行统计分析,找出差异蛋白;在此基础上,胰蛋白酶消化这些特殊差异蛋白,并进行质谱(MALDI-TOF-MS)分析.结果 获得1032±22个蛋白斑点,蛋白主要集中在等电点(PI)4.00～7.20之间,重复胶的匹配点数为1025±24,匹配率为96.30%;发现了有明显差异的21个蛋白点,并用质谱鉴定了其中4种蛋白.结论 获得了环境和人体中霍乱弧菌蛋白的差异表达蛋白.     

恶性胶质瘤细胞株的蛋白质组差异表达分析

目的 寻找和鉴定恶性胶质瘤细胞株的蛋白质组差异蛋白表达谱,为以其为基础的相关研究提供必要参考.方法 提取3个恶性胶质瘤细胞株CHG-5、TJ899和TJ905的总蛋白,等比例混匀后行双向电泳,正常胶质细胞为平行对照,筛选和鉴定差异蛋白质点,并就其中部分蛋白质进行免疫细胞化学和实体瘤免疫组织化学验证.结果 共筛选出13个差异蛋白质点,其中10个得到成功鉴定,它们主要分属于细胞骨架蛋白、代谢相关蛋白、肿瘤细胞迁移,以及应激与炎性反应相关蛋白;免疫细胞化学和实体瘤免疫组织化学检测结果与蛋白质组技术结果相一致.结论 恶性胶质瘤细胞株与正常胶质细胞比较具有明显的多个差异蛋白表达,它们可能共同参与脑胶质细胞的瘤变过程.