没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其促凋亡的相关分子机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法观察细胞在GA作用24、48、72 h后的增殖情况;用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;透视电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;采用RT-PCR技术研究p53 mRNA的变化;应用Western blot法检测p53蛋白水平的表达。探讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。结果剂量为6.25⁵0μmol·L-1GA作用SMMC-7721细胞48 h有明显的增殖抑制活性,引起核固缩、凝聚、碎裂,诱导细胞凋亡,并呈剂量依赖性;RT-PCR和Western blot结果显示,GA能升高p53 mRNA水平和p53蛋白表达。结论 GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导凋亡,可能与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

玉米须多糖对人肝癌SMMC-7721细胞Caspase-3和p53表达的影响

目的:观察不同浓度的玉米须多糖(stigma maydis polysaccharide SMPS)对肝癌SMMC-7721细胞Caspase-3和p53表达的影响.方法:将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用免疫组化法检测Caspase-3和P53的表达;分别观察制片后的Caspase-3和p53表达,胞膜和细胞浆出现棕黄色或褐色为Caspase-3表达阳性细胞,胞核内出现棕黄色或褐色为P53阳性表达细胞.结果:经SMPS(20～80mg/L)作用于SMMC-7721细胞,随着作用时间和剂量的增加,Caspase-3及p53的表达增高.结论:免疫组化法检测SMPS促进SMMC-7721细胞的Caspase-3及p53的高表达,其作用呈一定的浓度和时间依赖性.     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞p53和PUMA蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞形态和p53和p53上调凋亡调控因子(PUMA)蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法用倒置显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;采用免疫组化方法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞p53和PUMA蛋白表达的影响。结果倒置显微镜观察可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞体积减小,形态轮廓不清晰,细胞皱缩变形,细胞脱壁增加。免疫组化检测结果显示,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞p53蛋白和PUMA蛋白表达均明显高于与对照组(P<0.01)。结论透骨草提取物可能通过上调p53和PUMA蛋白表达,诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

汉防己甲素诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制研究

目的:研究汉防己甲素(Tet)诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制。方法:以4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;线粒体膜电位(JC-1)染色工作液染色,荧光显微镜下观察细胞JC-1情况;酶标仪测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法测定胞浆细胞色素C(Cyto-C)、Caspase-3原酶(Pro-caspase-3)蛋白表达。试验均设空白对照(常规培养基或培养0 h)。结果:4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后对细胞生长有明显抑制作用,且呈时间、剂量依赖关系。与空白对照比较,6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后细胞凋亡率升高,细胞JC-1降低,且呈时间依赖关系;6 mg/L Tet培养细胞24、48 h后Caspase-3活性增强;6 mg/L Tet培养细胞24 h后Cyto-C蛋白表达增强,Pro-caspase-3蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :Tet可诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活有关。     

白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖影响的量效与时效关系;应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3酶活性。结果白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖且诱导其凋亡;100μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞24、48或72h显著抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间依赖性。白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性增加SMMC-7721细胞caspase-3活性。结论白藜芦醇可抑制人肝癌细胞株洲C-7721的增殖,诱导细胞凋亡,其机制与增强细胞内caspase-3活性有关。     

实时动态法分析七味红花殊胜丸抑制肝癌细胞线粒体代谢

目的：观察七味红花殊胜丸对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体代谢酶的影响。方法：运用实时动态法分析七味红花殊胜丸对细胞活性的影响及各给药组不同时间IC₅₀值的变化情况。采用MTT法检测七味红花殊胜丸对SMMC-7721细胞的抑制率;ELISA法检测七味红花殊胜丸对SMMC-7721细胞线粒体代谢和凋亡的影响,Western Blot法检测凋亡蛋白的表达状况。结果：实时动态检测结果提示,七味红花殊胜丸5 mg·mL^-1作用48 h对SMMC-7721细胞的抑制率最高（P<0.01）;ELISA检测结果提示,七味红花殊胜丸能降低SMMC-7721细胞内ATP、ATPase、线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ酶的表达量,影响细胞的能量代谢;升高促凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达量,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,诱导细胞凋亡。结论：七味红花殊胜丸可通过影响细胞的能量代谢,诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响

目的:观察苦参素注射液联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性、野生型p53(wtp53)、端粒酶逆转录酶(h TERT)m RNA表达的影响。方法:将Dulbecco改良Eagle培养基培养的人肝癌SMMC-7721细胞分为苦参素组、DDP组、联合组和对照组。苦参素组低、中、高质量浓度分别为0.75、1.5、3.0 mg/ml,DDP组低、中、高质量浓度分别为1、2、4 mg/ml,联合组浓度按两药联合用药1∶1的比例应用,对照组加入200μl磷酸缓冲盐溶液(PBS),不给予药物干预。观察4组人肝癌SMMC-7721细胞凋亡率及药物间的相互作用,端粒酶活性吸光度差值(ΔA),wtp53和h TERTm RNA相对表达量。结果:联合组人肝癌SMMC-7721细胞凋亡率>苦参素组>DDP组>对照组,4组比较差异有统计学意义(P<0.01),q值提示苦参素与DDP存在单纯相加或协同作用。苦参素组、DDP组及联合组SMMC-7721细胞端粒酶活性ΔA、h TERTm RNA均显著低于对照组,且联合组DDP组>苦参素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参素注射液联合DDP可增加人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,其机制可能与wtp53表达上调、h TERTm RNA表达下调,从而影响端粒酶活性有关。     

重楼皂苷 Ⅶ通过 p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的观察重楼皂苷 Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法于 2021年 6月至 2022年 6月,对数期人肝癌 HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷 Ⅶ组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L)、SB203580［p38丝裂原活化蛋白激取酶( p38 MAPK)信号通路抑制剂］组( SB203580 10 μmol/L)、联合组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L、SB203580 10 μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白 Ⅴ(Annexin Ⅴ)/碘化丙啶( PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞 p38 MAPK、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶( p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶( p-ERK1/2)蛋白表达。结果与对照组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 74.33±9.37)%,凋亡率( 3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数( 364.92±47.99)个比较,重楼皂苷 Ⅶ组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 11.21±3.35)%降低,凋亡率( 39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数( 54.84±7.41)个减少( P<0.05); SB203580组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 89.30±14.56)%升高,凋亡率( 1.05±0.15)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 617.04±75.34)个增加( P<0.05)。与重楼皂苷 Ⅶ组比较,联合组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 40.52±8.18)%升高,凋亡率( 11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 141.36±16.75)个增加( P<0.05);与 SB203580组比较,联合组 24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、 p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少( P<0.05)。结论重楼皂苷 Ⅶ可抑制肝癌 HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活 p38 MAPK信号通路相关。     

新型大气污染物MMT诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制

目的 研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制.方法 MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度.结果 在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P＜0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P＜0.01).提高细胞存活率(P＜0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P＜0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P＜0.05),抑制Caspase-3的活性(P＜0.01).结论 MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与.