miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

目的研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA）,探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株（SACC-LM/SACC-83）,采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235,P〈0.05）;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713,P〈0.05）。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。     

涎腺腺样囊性癌侵袭转移相关微小RNA的筛选

目的 探讨不同转移能力涎腺腺样囊性癌(ACC)表达微小RNA(miRNA)的差异,以期筛选与ACC侵袭转移相关的miRNA及其所调控的靶基因.方法 以ACC高转移细胞株(ACC-M)为实验组,低转移细胞株(ACC-2)为对照组,采用高通量miRNA微阵列初步筛选两株细胞中差异表达的内源性miRNA,然后挑选几个显著差异表达的miRNA,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)进一步加以验证,同时运用miRNA靶基因预测软件预测其可能调控的靶基因.结果 芯片初筛显示,与ACC-2相比,ACC-M中表达差异具有统计学意义的miRNA分子有23个,其中上调表达的有14个(miR-15a、miR-16、miR-509-3p等),下调表达的有9个(miR-24、miR-98、miR-320等).qRT-PCR验证与miRNAs芯片结果相符合.靶基因软件预测显示,miR-98的靶基因为Ras和高迁移率蛋白A2,miR-320的靶基因为整合素β3,miR-509-3p的靶基因为CD164,它们均与恶性肿瘤侵袭转移有关.结论 不同转移能力的ACC存在差异表达的miRNA、miR-98、miR-320和miR-509-3p可能与ACC侵袭转移相关,可能通过调控相关靶基因参与ACC的侵袭转移进程.     

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组（P<0.05）。结论 miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。     

BDNF/TrkB在唾液腺腺样囊性癌上皮-间质转化过程中的表达及意义

目的 研究BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞系中的表达,初步探讨BDNF、TrkB和E-cadherin与SACC高转移性及神经侵袭性之间的关系。方法 以SACC高、低转移细胞系SACC-LM和SACC-83为研究对象,利用实时荧光定量 PCR和Western 免疫印迹技术检测BDNF、TrkB和E-cadherin在其中的表达差异;在SACC-83细胞系中加入外源性BDNF因子、TrkB抑制剂k252a,分析BDNF/TrkB通路在SACC侵袭转移过程中的生物学作用;利用实时荧光定量 PCR、Western 免疫印迹、细胞形态观察、细胞迁徙和侵袭实验评估SACC细胞上皮-间质转化（EMT）进程。应用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 BDNF 和TrkB在SACC-LM中的表达高于SACC- 83,E-cadherin在SACC-LM中的表达低于SACC- 83;外源性BDNF刺激能有效诱导TrkB的激活和表达,降低E-cadherin的表达,提高N-cadherin的表达,使细胞形态呈长梭形改变,促进SACC-83细胞的迁徙、侵袭能力;而TrkB受体抑制剂k252a可有效抑制BDNF的各种作用,降低SACC-83细胞形态变化和迁徙、侵袭能力。结论 BDNF/TrkB信号通路通过介导SACC的EMT过程,促进SACC的迁徙、侵袭能力。     

微小RNA-181a抑制唾液腺腺样囊性癌细胞株增殖能力的研究

目的探讨微小RNA（miR）-181a对唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞增殖能力的体内外作用影响。 方法通过过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。实时荧光定量PCR检测转染后SACC细胞株中miR-181a的表达水平。MTT法检测miR-181a对SACC细胞体外增殖能力的影响。Western blot检测转染后生长因子因子表达的改变。裸鼠皮下移植瘤模型检测miR-181a对SACC细胞体内增殖能力的影响。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P<0.05为差异具有统计学意义。 结果实时荧光定量PCR结果示,转染后SACC-LM细胞中miR-181a表达升高（t = -9.198,P = 0.012）,而SACC-83细胞中miR-181a表达降低（t = -7.241,P = 0.019）;SACC-LM细胞增殖能力降低（t = -4.58,P = 0.045）,而SACC-83细胞增殖能力提高（t = 3.016,P = 0.03）;SACC-LM细胞中转化生长因子β2（TGF-β2）、神经生长因子（NGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平均下调,而SACC-83细胞中TGF-β2、NGF和VEGF的表达水平均升高。裸鼠皮下移植瘤模型结果显示,miR-181a mimics组移植瘤瘤体明显小于mimics NC组（t = -4.692,P = 0.043）。 结论miR-181a能抑制SACC细胞体内体外的增殖能力。     

人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs差异表达谱系分析

目的 对比研究两种人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs（miRNAs）差异表达,交集分析、筛选特异性miRNAs。方法 利用仙台病毒将人牙髓干细胞（DPSCs）和根尖乳头干细胞（SCAP）重编程为诱导性多潜能干细胞（iPSCs）,提取总RNA,miRNAs标记、杂交,扫描芯片、读取图像,筛选差异表达miRNAs,交集分析。结果 人DPSCs和SCAP均可重编程为iPSCs。miRNAs芯片分析结果显示人DPSCs重编程后有68个差异表达miRNAs（倍数>10）,其中37个表达上调,31个表达下调;人SCAP重编程后有107个差异表达miRNAs（倍数>10）,其中68个表达上调,39个表达下调。二者取交集,均上调的有miR-302e,下调的有miR-29b-3p、miR-181b-5p、miR-4328、miR-22-5p、miR-145-5p、miR-4324、let-7b-5p、miR-181a-5p、miR-27b-3p（倍数>10）。结论 人DPSCs和SCAP重编程为iPSCs过程中有多种miRNAs参与,多数与细胞周期、上皮-间充质转化、转化生长因子β信号通路等相关。     

有吸烟史的口腔白斑病患者microRNA异常表达及癌变相关生物信息学分析

目的 研究有吸烟史的口腔白斑病（oral leukoplakia,OLK）患者病损组织microRNA(miRNA)的异常表达,并对差异miRNAs进行癌变相关生物信息学分析。方法 利用人miRNA OneArray?v5.1微阵列芯片检测吸烟组（n=6）和非吸烟组（n=4）OLK石蜡标本间差异表达的miRNA,并运用生物信息学方法从中筛选出与OLK癌变密切相关的目标miRNA,随后对目标miRNA的靶基因进行基因本体数据库（gene ontology,GO）富集分析和KEGG通路分析以预测其可能的作用机制。结果 吸烟组与非吸烟组OLK组织中共检出174个差异表达的miRNAs(P <0.05),其中,39个miRNAs在吸烟组表达上调（log2(FC)≥0.585）,135个miRNAs表达下调（log2(FC)≤-0.585）。运用生物信息学方法从中筛选出8个与OLK癌变密切相关的目标miRNAs,包括：hsa-miR-6857-5p、hsa-miR-6745、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-363-5p、hsa-miR-6867-3p、hsa-miR-95-3...     

姜黄素对环孢素A诱导激活的大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的抑制作用

目的：体外实验研究姜黄素（curcumin,Cur）对环孢素A（cyclosporine A,CsA）作用大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的影响,为进一步探讨Cur抑制CsA所致药物性牙龈增生的发生机制提供理论依据。方法：使用CCK-8法观察0、5、10、20、30 μmol/L Cur对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响, 20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,牙龈成纤维细胞中转化生长因子TGF-β1、Smad3、平滑肌肌动蛋白α-SMA和I型胶原蛋白COL-I的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹实验检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA和COL-I的蛋白表达变化。细胞划痕实验观察20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA 对牙龈成纤维细胞迁移能力的影响。采用SPSS 23.0 软件包对数据进行统计学分析。结果：大鼠牙龈成纤维细胞在20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,细胞增殖和迁移能力明显降低;20 μmol/L Cur显著下调了牙龈成纤维细胞中TGF-β1、α-SMA 和COL-I的mRNA 表达,蛋白免疫印迹实验提示,TGF-β1、p-Smad3、α-SMA 和COL-I的表达同样显著下调。结论：Cur可能通过抑制CsA激活的牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3 信号通路,从而降低牙龈成纤维细胞增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白和胶原分泌,改善牙龈增生。     

口腔扁平苔藓差异表达MicroRNAs的筛选

目的:芯片筛选口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)损害黏膜中差异表达的miRNAs。方法:收集白纹型OLP损害黏膜和正常口腔黏膜各2例,抽提总RNA预扩增后运用Taqman低密度芯片(v2.0)测定人类667种miRNAs的表达谱,随后应用实时定量PCR在68例样本中进一步验证miR-27b的表达水平。采用miRNAs生物信息库预测miR-27b所对应的靶基因,对芯片数据进行统计学分析。结果:筛选获得30个OLP相关的miRNAs。相对于正常口腔黏膜,OLP损害黏膜中有18个miRNAs表达下调,12个上调。扩大样本量至68例验证miR-27b表达水平,结果与芯片实验一致。生物信息学分析得出miR-27b的预测靶基因中有10个与OLP发病有关。结论:筛选得到的OLP损害黏膜中差异表达的miRNAs可能与OLP的发生相关。     

miR-31-5p对牙髓干细胞HIF-1α/BNIP3信号通路及成骨相关因子表达的影响

目的: 探讨微小RNA-31-5p（miR-31-5p）对牙髓干细胞（DPSCs）低氧诱导因子1α（HIF-1α）/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3（BNIP3）信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法: 体外培养人DPSCs,分为对照组（不转染）、mimic NC组（转染negative control-miR-31-5p）、miR-31-5p mimic组（转染hsa-miR-31-5p mimic）、siRNA NC组（转染nonsense siRNA）和miR-31-5p siRNA组（转染miR-31-5p siRNA）。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录子2（Runx2）mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹（WB）法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,ALP染色明显减弱,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与对照组、siRNA NC组相比,miR-31-5p siRNA组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）,ALP染色明显增强,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论: miR-31-5p可以激活HIF-1α/BNIP3信号通路,抑制DPSCs细胞的成骨相关因子表达。     

Identification of potential therapeutic target genes,key miRNAs and mechanisms in oral lichen planus by bioinformatics analysis

The study aimed to identify the potential target genes and key miRNAs as well as to explore the underlying mechanisms in the pathogenesis of oral lichen planus (OLP) by bioinformatics analysis. The microarray data of GSE38617 were downloaded from Gene Expression Omnibus (GEO) database. A total of 7 OLP and 7 normal samples were used to identify the differentially expressed genes (DEGs) and miRNAs. The DEGs were then performed functional enrichment analyses. Furthermore, DEG-miRNA network and miRNA-function network were constructed by Cytoscape software. Total 1758 DEGs (598 up- and 1160 down-regulated genes) and 40 miRNAs (17 up- and 23 down-regulated miRNAs) were selected. The up-regulated genes were related to nuclear factor-Kappa B (NF-κB) signaling pathway, while down-regulated genes were mainly enriched in the function of ribosome. Tumor necrosis factor (TNF), caspase recruitment domain family, member 11 (CARD11) and mitochondrial ribosomal protein (MRP) genes were identified in these functions. In addition, miR-302 was a hub node in DEG-miRNA network and regulated cyclin D1 (CCND1). MiR-548a-2 was the key miRNA in miRNA-function network by regulating multiple functions including ribosomal function. The NF-κB signaling pathway and ribosome function may be the pathogenic mechanisms of OLP. The genes such as TNF, CARD11, MRP genes and CCND1 may be potential therapeutic target genes in OLP. MiR-548a-2 and miR-302 may play important roles in OLP development.     

MiR-335-3p/miR-155-5p Involved in IGFBP7-AS1–Enhanced Odontogenic Differentiation

BackgroundThe differentiation of stem cells from exfoliated deciduous teeth (SHEDs) into odontoblasts determines the regeneration of dentin-pulp complex. Non-coding RNAs (ncRNAs), including microRNA (miRNA) and long non-coding RNA (lncRNA), participate in many multiple biological processes, but the specific miRNAs involved in odontogenesis are incompletely defined. It was confirmed that lncRNA IGFBP7-AS1 could positively regulate odontogenetic differentiation in SHEDs. To investigate the downstream mechanisms of this process, miR-335-3p and miR-155-5p were found to be closely related with SHED odontogenic differentiation through whole-genome sequencing. The aim of the current study was to determine the role of miR-335-3p/miR-155-5p in IGFBP7-AS1–enhanced SHED differentiation and explore the potential mechanism of IGFBP7-AS1–mediated odontogenesis.MethodsPutative miR-335-3p/miR-155-5p binding sites within IGFBP7-AS1 were identified by bioinformatics analysis, and the binding of miR-335-3p/miR-155-5p to these sites was confirmed by dual-luciferase reporter gene assays. The effects of miR-335-3p/miR-155-5p in odontogenesis were detected by tissue nonspecific alkaline phosphatase staining, Alizarin red staining, quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) analyses, and western blot testing. The molecular mechanisms of miR-335-3p/miR-155-5p involved in IGFBP7-AS1–mediated odontogenesis were analysed by qRT-PCR and western blot testing.ResultsDual-luciferase reporter gene assays showed that miR-335-3p/miR-155-5p could directly bind to IGFBP7-AS1. MiR-335-3p and miR-155-5p both could down-regulate dentin sialophosphoprotein expression, and both miRNAs could inhibit IGFBP7-AS1–mediated SHED odontogenetic differentiation via suppression of the extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway.ConclusionsBoth miR-335-3p and miR-155-5p were negative regulators to IGFBP7-AS1-enhanced odontogenic differentiation of SHED through suppression of the ERK pathway.     

Titanium acts on osteoblast translational process

Titanium is a highly biocompatible material and very osteogenic in vivo. However, how titanium regulates osteoblast activity to promote bone formation is incompletely characterized. We, therefore, attempted to get more information by using microRNA (miRNA) microarray techniques to investigate translation regulation in osteoblasts grown on titanium disks. The miRNA oligonucleotide microarray provides a novel method to carry out genome-wide miRNA profiling in human samples. By using miRNA microarrays containing 329 probes designed from the human miRNA sequence, several miRNA were identified in osteoblast-like cell line (MG 63) grown on titanium disks. There were 13 upregulated miRNAs (ie, mir-23a, mir-222, mir-523, mir-22, mir-23b, mir-143, mir-377, mir-24, mir-422b, mir-26a, mir-29a, mir-17-5p, mir-182) and 2 down-regulated miRNAs (ie, mir-187, mir-339). The data reported are, to our knowledge, the first study on translation regulation in osteoblasts exposed to titanium. The data can be relevant to understand better the molecular mechanism of osteoblast activation and as a model for comparing other materials with similar clinical effects.     

MiR-520b调控 Wnt/β-catenin信号通路促进舌鳞状细胞癌侵袭转移

目的研究miR-520b在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达,探讨其在TSCC侵袭转移过程中的作用及分子机制。 方法实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测TSCC组织及细胞系中miR-520b的表达;沉默或过表达TSCC细胞株SCC-9和UM1中miR-520b的表达后,实时荧光定量PCR检测细胞上皮-间质转化（EMT）相关基因表达;Transwell小室验证细胞侵袭转移能力改变;TOP/FO双荧光素酶报告基因系统、实时荧光定量PCR、Western blot等检测miR-520b表达对Wnt/β-catenin信号通路的影响;生物信息学、Western blot及双荧光素酶实验验证miR-520b调控Wnt/β-catenin信号通路的潜在靶基因Dickkopf 1（DKK1）。使用SPSS 21.0软件进行统计学分析,样本均数间比较采用Student′s t检验。 结果与正常相邻组织（2.59±1.43）相比,miR-520b相对表达量在TSCC组织中显著上调（5.28 ± 1.63）,差异有统计学意义（t = 16.04,P = 0.0005）,并且与患者中更具侵袭性的TSCC表型正相关（5.81 ± 0.74 vs. 3.08 ± 0.89,t = 12.11,P = 0.0011）;过表达miR-520b促进TSCC细胞侵袭转移（SCC-9：110.8 ± 17.8 vs. 74.7 ± 9.8,t_SCC-9 = 32.58,P_SCC-9 = 0.0011;UM1：178.8 ± 39.7 vs. 90.3 ± 22.5,t_UM1 = 99.67,P_UM1 = 0.0002）,低表达则相反（SCC-9：74.7 ± 9.8 vs. 30.9 ± 7.8,t_SCC-9 = -31.47,P_SCC-9 = 0.0024;UM1：90.3 ± 22.5 vs. 35.7 ± 10.6,t_UM1 = -37.89,P_UM1 = 0.0019）;此外,过表达miR-520b可靶向抑制DKK1,进而激活Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC细胞上皮-间质转化。 结论MiR-520b在TSCC中高表达,可能通过抑制DKK1增强Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC侵袭转移。     

丹参对大鼠正畸牙牙周组织TGF-β1表达的影响

目的:观察丹参注射液对大鼠正畸牙牙周组织TGF-β₁蛋白的表达变化。方法:选取SD雄性大鼠192只,随机分为丹参+加力组(A)、单纯加力组(B)、丹参对照组(C)和空白对照组(D)。A、B 2组再根据加力时间点建立正畸牙移动模型。A、C 2组与B、D 2组隔天于左侧上颌第一磨牙颊侧黏膜下分别注射丹参注射液及生理盐水。于加力后l、3、5、7、10、14 d分批处死大鼠,收集标本。体式显微镜测量大鼠正畸牙移动距离的改变,H-E染色观察牙周组织变化,免疫组织化学染色检测TGF-β₁蛋白的表达变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:除第1天外,A组TGF-β₁的表达均高于其余组别,3 d时TGF-β₁染色显著增强,5 d达高峰;与B组相比,第3、5、7天时间点TGF-β₁平均吸光度值分别为0.5181±0.0037、0.5857±0.0023和0.4363±0.0021,均具有显著差异（P<0.01）;与C组及D组相比,任何时间点均有显著差异（P<0.05）。结论:丹参注射液可通过改善牙周组织微循环,进而促进TGF-β₁蛋白的表达,可能是加速正畸牙移动的作用机制之一。