迷迭香酸类似物-11通过抑制ERK/MAPK通路诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的对迷迭香酸类似物-11(rosmarinic acid analogue-11,RAA-11)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制进行初步探究。方法 MTT法和克隆形成法观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色法观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;流式细胞术检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡率的影响;Western blot观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax及通路蛋白ERK、p-ERK表达的影响。结果 MTT结果提示RAA-11可以抑制人胃癌MGC-803细胞增殖(P<0.01),且呈时间浓度依赖性;克隆形成实验结果提示,RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的集落形成能力;Hoechst 33258染色结果提示,RAA-11干预人胃癌MGC-803细胞48 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术结果提示,RAA-11对人胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用; Western blot结果显示,RAA-11上调人胃癌MGC-803细胞促凋亡相关蛋白caspase-3、Bax(P<0.01),下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平,并降低了通路蛋白ERK、p-ERK的表达水平(P<0.01)。结论 RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,并能够诱导凋亡,其机制可能与抑制ERK/MAPK通路有关。     

锰超氧化物歧化酶模拟化合物对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Mn SOD模拟化合物(Mn SODm)对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,MTT法观察Mn SODm对MGC-803细胞增殖的影响;用Hoechst33258染色观察MGC-803细胞形态学的变化;Annexin V-FITC/PI检测MGC-803细胞凋亡;Western blot法检测p53、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 MTT法检测结果显示1~20μg·m L~(-1)Mn SODm对MGC-803细胞有显著的抑制作用,24、48、72 h的IC50分别为10.18、6.93和5.05μg·m L~(-1);20μg·m L~(-1)Mn SODm作用细胞48 h后,细胞凋亡率为(69.33±4.07)%(P<0.01);Western blot结果显示,用5、10、20μg·m L~(-1) Mn SODm处理细胞48 h后,Bcl-2表达显著降低,同时p53、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 Mn SODm对人胃癌MGC-803细胞有明显的抑制作用,可能是通过下调Bcl-2表达,增加p53、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax表达来诱导MGC-803细胞凋亡。     

金雀异黄酮对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及EGFR/PI3K/Akt通路的影响

目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金雀异黄酮干预MDAMB-231细胞36 h后,EGFR mRNA表达水平的变化;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3,EGFR、Akt、p-Akt蛋白的变化;Akt激活剂胰岛素(insulin)、金雀异黄酮单独及联合胰岛素干预乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;Hoechst 33258染色结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDAMB-231细胞36 h后细胞核呈现典型凋亡形态学改变;qRTPCR结果显示,经金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,EGFR的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组对比,Bcl-2、EGFR、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Akt激活剂胰岛素可以明显激活p-Akt(P<0.01),金雀异黄酮可以明显下调被激活的p-Akt(P<0.01)。结论金雀异黄酮能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。     

迷迭香酸类似物-11通过EGFR-JNK通路抑制人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移

目的基于EGFR-JNK通路,探讨RAA-11对人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的抑制作用。方法 MTT法检测RAA-11对人胃黏膜上皮GES-1细胞和人胃癌MGC-803细胞活力的影响;划痕实验检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞EGFR mRNA表达的影响;Western blot检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax及通路蛋白EGFR、JNK、p-JNK表达的影响。结果 MTT结果表明,与人胃黏膜上皮GES-1细胞相比,RAA-11明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖(P<0.01),提示RAA-11对MGC-803细胞有选择作用;划痕实验结果提示,RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的迁移能力;实时荧光定量PCR结果提示,RAA-11降低了人胃癌MGC-803细胞EGFR mRNA的表达;Western blot结果提示,RAA-11上调人胃癌MGC-803细胞促凋亡相关蛋白caspase-3、Bax,并促进通路蛋白JNK、p-JNK的表达(P<0.01),下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并降低了通路蛋白EGFR的表达水平(P<0.01)。结论 RAA-11通过作用于EGFR-JNK通路,抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移,并能够诱导其凋亡。     

SRT1720对高糖诱导的小鼠系膜细胞凋亡的影响

目的观察Sirt1激活剂SRT1720对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用。方法体外培养小鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SRT1720组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧簇(ROS)产生;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙酰化p53及细胞色素C的表达;实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果与正常糖对照组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙酰化p53表达增高、Bax/Bcl-2比率明显升高、Sirt1表达下降以及细胞色素C易位。SRT1720干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生;下调cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表达;上调Sirt1的表达;减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论SRT1720能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,可能是通过减少ROS产生、保护线粒体功能、抑制p53乙酰化以及p38MAPK信号通路激活而实现的。     

抗氧化肽SS-31对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达。结果与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleavedcaspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位。SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的。     

N-乙酰半胱氨酸影响p38有丝分裂原活化蛋白激酶对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney in-jury,AKI)后组织细胞凋亡的影响和与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的关系。方法静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型。大鼠随机分为正常对照组、AKI模型对照组、NAC低剂量组(50 mg.kg-1)、NAC中剂量组(100 mg.kg-1)、NAC高剂量组(200 mg.kg-1)、特异性p38MAPK抑制剂SB203580组(10mg.kg-1)。大鼠预先连续给药3 d,给予CDDP,再继续给药5 d。TUNEL法进行细胞凋亡检查。试剂盒测定肾脏组织caspase-3。Western blot测定caspase-3、Bax、Bcl-2、磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达。结果与正常对照组相比,CDDP诱导AKI模型组肾组织凋亡细胞增加,caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01)。与AKI模型组相比,NAC与SB203580减少凋亡细胞、降低肾脏组织caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达和增加Bcl-2表达(P<0.01)。结论 NAC可有效防治CD-DP诱导大鼠AKI,并与p38MAPK相关。     

蛇床子素通过PI3K/Akt通路诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨蛇床子素(osthole或osthol)能否通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。方法体外培养外阴鳞癌SW962细胞,加入不同浓度蛇床子素,MTT法检测细胞存活情况,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测SW962细胞凋亡情况; Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、PI3K和p-Akt蛋白表达,及蛇床子素和IGF-1共作用下PI3K/Akt通路蛋白的变化。结果 MTT结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性地抑制SW962细胞增殖;DAPI染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,下调PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达。IGF-1诱导PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,蛇床子素逆转IGF-1作用,3种蛋白表达下调。结论蛇床子素通过抑制PI3K/Akt通路,诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

糖尿病大鼠肾小管Bcl-2蛋白家族的动态变化

目的动态观察糖尿病(DM)病程中肾小管p38MAPK和Bcl-2蛋白家族表达的变化及相互关系。方法 SD大鼠随机分为对照组和糖尿病组,注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病,分别于DM2、4、8、16和24周处死动物。生化方法测血糖和尿蛋白;免疫组织化学检测Bcl-2和Bax蛋白;Western blot检测p38MAPK和p-p38MAPK蛋白水平。结果与对照组相比,DM大鼠出现明显高血糖并且持续于高水平;DM2周24h尿蛋白量开始增多并随病情进展而加重。免疫组织化学结果显示,DM2周大鼠肾小管Bcl-2和Bax蛋白均明显高于对照组,然而DM8周Bcl-2蛋白表达开始减少,Bax蛋白则随DM进展而增多,Bax/Bcl-2比值增高。Western Blot结果显示,对照组和DM2周肾皮质有少量p38MAPK蛋白表达,DM4周开始p38MAPK和p-p38MAPK蛋白明显增加。p-p38MAPK水平与Bax/Bcl-2比值呈显著正相关。结论糖尿病病程中,p38MAPK蛋白活性增高可能介导了肾小管Bax/Bcl-2比值上调。     

葛根素保护双氧水诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的探讨葛根素对双氧水(H_2O_2)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立体外神经元损伤模型,MTT法观察细胞存活率;Hoechst 33342染色观察细胞核改变;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位的改变;酶活性检测线粒体caspase-3和caspase-9的变化;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、p-Akt、Akt蛋白的表达。结果与H_2O_2模型组相比,葛根素预处理能明显改善H_2O_2诱导的SHSY5Y细胞存活率下降(P<0.05),缓解H_2O_2引起的线粒体膜电位的下降(P<0.01),抑制caspase-3和caspase-9的酶活性(P<0.01),减少H_2O_2诱导的细胞凋亡。此外,葛根素还促进细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,而这种作用能被PI3K/Akt的抑制剂LY294002所抑制。结论葛根素可保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,这种保护作用可能是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

Advanced glycation end-products/peptides: a preliminary investigation by LC and LC/MS

An investigation on AGE-peptides, originating by proteolysis of in vitro glycated proteins, was carried out by LC methods with different detection applied to the mixture produced by proteinase K digestion of in vitro glycated human serum albumin (HSA). Classical approaches, like spectroscopic (UV, fluorescence) and mass spectrometric methods (MALDI, LC/ESI/MS), show that the digestion mixture is highly complex. However, there are clearcut differences between the digestion mixtures of glycated and unglycated HSA, in the former case allowing identification of possible glycated peptides belonging to the AGE-peptide class. MS/ MS experiments on selected species seem to be promising as regards structural information.     

老年粘连性肠梗阻诊治分析

目的探讨老年人粘连性肠梗阻的诊治。方法分析223例老年人粘连性肠梗阻患者的诊断和治疗情况。结果腹部X线平片检查后确诊,不完全性肠梗阻98例,完全性肠梗阻125例;手术治疗136例。结论老年人肠梗阻更为复杂,几乎都有腹部手术史,合并症多。往往缺乏典型的临床表现。需腹部X线摄片诊断,治疗方法取决于肠梗阻的性质。难点是发现早期绞窄并及时手术。需进行严密不间断的前后对比观察,一旦肠袢坏死,手术并发症与病死率将明显增高。同时治疗过程中应重视围手术期处理。     

脑囊虫病合并脑积水的影像学诊断与外科手术治疗

目的：探讨脑积水型脑囊虫病的诊断与外科手术治疗效果。方法：对诊断明确的73例脑积水型脑囊虫病患者实施了脑室或脑池囊虫摘除术,术后进行抗脑囊虫病治疗。结果：其中13例脑积水症状改善效果不佳,二次行脑室-腹腔分流术,60例手术均获成功。术后均未出现新的神经损害症状,脑室恢复正常。结论：影像检查是对脑积水型脑囊虫病做出正确诊断的重要依据,积极手术切除脑囊虫,解除梗阻性脑积水术后再进行抗囊虫治疗,必要时再行脑室腹腔分流手术,临床效果明确安全。     

术前放化疗对中晚期直肠癌保肛手术的临床作用价值

目的探讨术前放化疗对中晚期进展期直肠癌保肛手术的临床价值。方法选取郑州人民医院72例直肠癌患者,随机将患者平均分成两组,观察组患者给予术前新辅助放、化疗,对照组患者同期直接手术。随访分析两组患者保肛率及3a生存率。结果近期疗效上,观察组总有效率明显优于对照组（P〈0.05）;远期疗效上,两组3a生存率及术中淋巴结阳性率之间差别均有统计学意义（P〈0.05）;两组保肛率差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论术前加用放化疗在提高直肠癌患者保肛率的同时,可以提高患者3a生存率和降低淋巴结转移率,减少手术并发症和局部复发率。但其最终结果和远期疗效有待进一步观察和分析。     

LC/MS/MS与GC/MS法分析鉴定小鼠尿中沙美特罗的代谢产物

目的:鉴定沙美特罗在小鼠尿中的主要代谢产物.方法:ig给药后,收集小鼠尿液,经固相提取,葡萄糖醛酸酶水解,进行LC/MS/MS分析和硅烷化后进行GC/MS分析同时分离鉴定沙美特罗代谢产物.结果和结论:在给药后尿样中发现沙美特罗原型和4种代谢产物M1～M4,其结构推测为19-羟基沙美特罗(M1)、2-羰基沙美特罗(M2)、19-羰基沙美特罗(M3)和19-羟基-8-甲氧基沙美特罗(M4).     

子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床对比分析

目的：探讨子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床特点及B超、实验室检测的价值,提高对子宫腺肌病术前的诊断率。方法：选择52例子宫腺肌病患者和62例子宫肌瘤患者为研究对象,并对其临床症状、妇科检查、B超结果及血清CA125水平进行比较。结果：两组患者发病年龄和临床症状相近,但子宫腺肌病的痛经症状明显（P〈0.01）;妇科检查子宫腺肌病的子宫常均匀性增大,且一般增大〈12孕周,而宫体压痛明显高于子宫肌瘤（P〈0.01）;两组B超诊断符合率分别为61.5%和93.5%,有统计学差异（P〈0.01）;子宫腺肌病组血清CA125阳性率80.8%,子宫肌瘤组血清CA125阳性率4.8%,有统计学差异（P〈0.01）。结论：综合分析子宫腺肌病与子宫肌瘤的临床表现、妇科检查、B超所见和血清CA125水平有助于提高子宫腺肌病的术前诊断。     

The role of microsphere fabrication methods on the stability and release kinetics of ovalbumin encapsulated in polyanhydride microspheres

The effect of microsphere fabrication methods on the stability and release kinetics of ovalbumin encapsulated in polyanhydride microspheres was investigated. The polyanhydrides used were poly(sebacic anhydride) (poly(SA)) and a 20:80 random copolymer of poly[1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane] (poly(CPH)) and poly(SA). Microspheres were fabricated using three double emulsion methods (water/oil/water, water/oil/oil and solid/oil/oil) and cryogenic atomization. The encapsulation efficiency was highest for cryogenic atomization and lowest when the w/o/w technique was used. Microspheres fabricated by the s/o/o method had the largest initial burst of released protein. All the methods resulted in zero-order release of the protein after the burst. The release of ovalbumin from poly(SA) and 20:80 (CPH:SA) microspheres lasted ～3 and ～6 weeks, respectively. For all fabrication methods the primary structure of released ovalbumin was conserved as determined by gel electrophoresis. The secondary structure of ovalbumin encapsulated in 20:80 (CPH:SA) w/o/w microspheres was not conserved.     

A Comparison of Abstinence-Oriented and Indefinite Methadone Maintenance Treatment

Advantage was taken of a natural experiment to compare the outcome of abstinence-oriented and indefinite methadone maintenance. Subjects assigned to an abstinence-oriented program were significantly more likely than those assigned to indefinite maintenance to use heroin (OR 1.3) and amphetamines (OR 2.8) during the first 2 years of methadone treatment but less likely to use benzodiazepines (OR 0.7). Subjects discharged from the abstinence-oriented program were significantly more likely to relapse and return to maintenance treatment (RR, first 6 months, 4.2). The abstinence-oriented program was also less able to attract heroin addicts into maintenance treatment.     

Early Versus Late Onset of Alcoholism in the Elderly

The age of onset of alcohol-related problems is a typology that is gaining prominence among clinicians. Findings from epidemiological studies suggest that there are a significant number of older alcoholics who first begin to drink alcohol “abusively” in their later years. While few demographic differences appear between late onset and early onset alcoholics, a number of studies have reported clinical differences be tween these groups that may affect the natural course and treatment outcome of the illness.     

LC/MS/MS法测定辛伐他汀血浆浓度及其在健康人体内的药物动力学研究

目的:建立人体血浆中辛伐他汀的LC/MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在男性健康志愿者体内的药物动力学行为,评价其生物利用度和生物等效性。方法:采用两制剂双周期自身对照试验设计。18名男性健康志愿者随机交叉服用单剂量辛伐他汀试验片剂和参比片剂20mg,采用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)分析方法测定血浆辛伐他汀的浓度。采用DAS2.0程序计算药物动力学参数和相对生物利用度,并进行等效性评价。结果:测定单剂量口服20mg辛伐他汀参比片剂和试验片剂的AUC_((0→24))分别为(14.90±5.86)和(14.37±4.94)ng·h·ml~(-1),AUC_((0→∞))分别为(15.62±6.29)和(14.78±5.02 )ng·h·ml~(-1);C_(max)分别为(4.54±2.11)和(4.00±1.34)ng·ml~(-1);T_(max)分别为(1.75±0.79)和(1.39±0.65)h。以AUC_((0→24))与AUC_((0→∞))计算相对生物利用度分别为(108.0±52.7)%和(106.4±52.5)%。结论:该法准确灵敏,测得的数据可靠,统计分析表明两种制剂生物等效。