大鼠与小鼠脑组织脱水方法的实验研究

近年来，我们在协助其他单位或研究生做动物实验后的组织病理学研究中发现，若按日常人体标本的脱水时间和程序制备大鼠与小鼠的脑组织蜡块，则在切片后进行染色前处理及染色时会出现严重的脱片现象，从而造成后续工作无法进行。即使在载玻片上涂蛋白甘油、多聚赖氨酸等防脱片剂效果不佳，未脱片者的HE染色、特殊染色及免疫组化染色     

牙和骨切片的粘片剂防脱片效果及应用方法探讨

牙和骨切片HE尤其是免疫组织化学染色需多次更换试剂、改变温度、反复水洗,经常造成切片易皱褶、卷曲、与载玻片分离（脱片）。目前尚无理想的防止牙和骨切片染色脱片的方法,亦未见防止牙和骨切片染色脱片的报道。以下是我们探讨牙和骨切片的氨醛酸乙基硅（APES）、多聚-L-赖氨酸（PLLS）两种粘片剂的防脱片效果和应用方法。     

脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法

在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.     

改造烤片架

组织学与病理学教学切片与临床病理切片技术中用的烤片架(亦称染色架)是用来载载玻片的.切片装在架上进行脱蜡、染色、脱水与透明.因其体积较大,所需容器也大,既浪费化学试剂,操作起来也感到不太方便.1将传统用的载载玻片的烤片架改制成能载盖玻片的烤片架.石蜡切片技术中“用载玻片从水中捞取切片”改为用盖玻片捞片.切片放在改制的载盖玻片的烤片架上进行脱蜡、染色、脱水与透明.用改制后的能载盖玻片的烤片架体积减小了很多,所需容器也小.因此在制片过程中所用的化学试剂,如二甲苯、染液、无水乙醇等可以减少十倍左右.由于使用的容器小,占据面积小,操作起来也方便得多.2 本实验室将传统用的26片装的烤片架经过剪裁后再焊接成高仅3.3厘米,宽5.5厘米,长6.8厘米,能载1.8×1.8公分盖玻片的染色架(其载片间距不变,仍为26片装),再配以10片装卧式染缸完成切片的脱蜡、染色、脱     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

输卵管妊娠组织制片的技巧

目的通过此制片法解决了输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,可制作出输卵管妊娠组织的优良切片,便于临床工作和科研及基础医学教学和科研。方法最好选择快速固定液;脱水时也不用常规乙醇脱水,改用丙酮脱水;浸蜡温度应控制在56℃为宜,浸蜡时间控制在1h左右;血块组织切片厚度最好为3μm;苏木精-伊红(HE)染色时,苏木素浸染时间长些,伊红浸染时间短些。结果用此法制作输卵管妊娠组织切片,不是那么脆和硬,也不易碎,能够顺利切出连续蜡带;染色时也不易脱片,染色对比度也好。结论在输卵管妊娠组织制片过程中,只要解决输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,就能制作出优良的切片。     

热处理法在常规HE染色发灰组织切片中的应用

在常规HE染色过程中,经常发现固定前已干涸的组织、过度固定、脱钙及烤片过长的组织易造成切片着色困难,细胞核着色淡、不着色或一片灰染.此时若组织较少或已用完,无法重新再取材,势必给临床病理诊断带来严重影响.经大量实验,我们对原组织切片在染色前进行热处理,使染色质量得到了明显改善.     

乙二胺四乙酸联合正丁醇在大鼠胫骨癌痛标本石蜡切片制作中的应用

目的 探索一种简便有效的制作大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片的方法。方法 取大鼠胫骨癌痛模型组和正常组胫骨标本，使用乙二胺四乙酸（EDTA）加温脱钙联合正丁醇取代传统强酸脱钙、纯酒精脱水和二甲苯透明，制作石蜡切片后HE染色观察。结果 两组大鼠胫骨癌痛标本形态结构均保存完整。与传统方法相比，制片步骤简单，脱水和透明时间较为灵活，蜡块切割性能较好。结论 EDTA与正丁醇的联合应用，是大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片制作适宜和可靠的方法。     

苏木精─伊红整块染色法

组织学切片染色方法众多，采用什么样的方法才能又快又好，是值得探讨的问题。我们过去都是用组织片染法进行染色，也能取得满意的染色效果，但用的时间长，步骤多，费试剂，染色结果不稳定，而且未经染色的组织不易切片。我们经过大量的实践和探索，与组织切片染色进行比较，组织块染色能取得相同的染色结果。此方法稳定可靠，染色效果好，不褪色，操作简便，既节省时间，又节约试剂，染色后的组织块易切，适合制作大量的教学切片。     

正丁醇联合松节油替代二甲苯用于石蜡包埋

目的 寻找一种能够替代二甲苯透明剂的组织石蜡包埋方法。 方法 使用正丁醇和松节油的混合物替代常规石蜡包埋过程中无水乙醇、二甲苯的作用,收取卷茎蓼干预的多发性脑梗模型大鼠的脑、肾、胃、肝、十二指肠组织进行石蜡包埋,最终根据石蜡切片的效果、HE染色以及免疫组织化学结果对这种新型脱水程序做出评价。 结果 正丁醇和松节油的混合物可以替代常规石蜡包埋程序中无水乙醇的脱水、二甲苯的透明作用。经正丁醇、松节油混合物处理后的组织切片流畅,组织无变脆、变硬;HE染色后,新型脱水处理组织的细胞核、细胞质分明,组织的着色度、色泽、透明度与常规脱水程序无差异;通过大鼠不同组织做免疫组织化学染色,经对比结果与常规包埋组织免疫组织化学染色无差异。 结论 正丁醇联合松节油用于组织脱水既能够避免二甲苯对人的毒性作用,还可以减少无水酒精过度脱水对组织的破坏。     

提高脑组织冰冻切片质量的几点体会

目的:探讨减少脑组织冰冻切片脱片和增加脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果准确性的方法,为脑组织冰冻切片的广泛使用进一步奠定实验基础。方法:在保证实验真实性和科学性的前提下,将现有的脑组织冰冻切片技术结合在脑组织冰冻切片过程中所遇到的问题,以明胶硫酸铬钾处理载玻片,预冷的NS和4%多聚甲醛灌注固定组织,液氮速冻脑组织进行冰冻切片。结果:明胶硫酸铬钾处理载玻片的方法减少了冰冻切片脱片,预冷的NS和4%多聚甲醛提高了脑组织灌流固定效果,液氮速冻脑组织减少了冰晶产生。结论:此方法使脑组织冰冻切片脱片情况下降,冰晶产生减少,提高了脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果的准确性,该方法值得在临床和科研实验室中积极推广使用。     

EDTA在HE染色中的应用

正苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理技术中最基本的染色方法,染色理想状态是在镜下见细胞核与细胞质蓝红相映,对比明显;核膜及核染色质颗粒清晰可见。实际工作中因组织干涸、固定脱水不足、脱钙等原因会造成切片染色困难,细胞核染色淡或出现局部灰染,给临床病理诊断带来困扰。经过大量实验,本科室对处理不好的组织切片染色前用EDTA抗原修复液进行高压修复,使染色质量得     

四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景：由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的：选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法：将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论：14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸水溶液> 14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

两种快速脱黑色素的方法

某些含有黑色素的肿瘤，由于肿瘤细胞中含有大量的黑色素，在冷冻切片染色中，大量色素遮盖了肿瘤的组织结构，无法正确做出诊断，必须进行脱色素处理。传统的脱黑色素疗法，耗时长（2～3h），易脱片，不适宜冷冻切片的诊断。我科采用快速脱黑色素法，不仅能够在1—8min内脱掉组织中的黑色素而且能够满足诊断要求，避免了因术中诊断不明确而造成的患者的二次手术，并且该方法适用于石蜡切片、免疫组化切片快速的脱色素。     

针对组织工程多孔生物陶瓷的组织学技术优化探讨

目的 改进硬组织切片技术以适应生物陶瓷材料在骨组织工程中的研究.方法 探索硬组织切片的厚度、漂片温度、裱片方法、烤片温度和时间的最佳组合,针对阳离子防脱载玻片的使用条件进行反复比较,通过改进操作流程中的关键技术和需避免的问题,摸索出阳离子载玻片在硬组织切片裱片中的最佳应用条件,克服了硬组织切片制作技术中标本易破碎、切片易脱落及染色时染料容易吸附的缺点.结果 通过技术探索与改进,生物陶瓷支架材料体内植入后的类骨修复体标本的硬组织切片能保持其杂化后的组织结构与比较完整的材料结构,可进行Masson三色染色、苏木精-伊红(HE)及甲苯胺蓝染色.染色后镜下观察显示支架内杂化生长的组织结构完整、细胞形态清晰、切片质量好、生物陶瓷支架脱片少.荧光显微镜可观察到类骨修复体钙沉积现象完整.结论 改善了传统硬组织切片技术处理生物陶瓷材料时易于破坏组织-材料结构的缺点.改进的硬组织切片技术适应生物陶瓷材料在骨组织工程领域研究.     

微波快速免疫组化双重、多重标记方法的研究

免疫组化的双重和多重标记及原位杂交和免疫组化相结合的双重和多重标记已有文献报道,尤其是癌基因产物的抗体化,使得多重标记方法的应用更为重要,但因其染色流程过长,切片长时间浸泡,易发生脱片、组织结构破坏等问题.本研究应用微波辐射进行免疫组化多重标记及原位杂交(ISH)与免疫组化相结合进行的多重标记,乳腺肿瘤、结肠癌及肺癌(各选10例标本)组织切片上12种癌基因蛋白和3种基因探针组合的多重标记.结果利用微波辐射不仅可缩短多重标记的时间,而且克服组织切片的脱片、组织结构破坏等缺点,避免了可能发生的交叉反应.     

DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用

目的:研究DPX封片胶在牙组织免疫组化染色中的防脱片效果。方法:狗上前牙EDTA脱钙、常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水洗、干燥后,用DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈,37℃烤干DPX封片胶,EnVision技术观察IL-1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-9的表达。结果:DPX封片胶处理后的切片,经微波抗原修复后,切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象。免疫组化染色后,组织形态基本完整,相应分子表达定位准确,染色结果清晰。结论:DPX封片胶在牙齿等含钙组织免疫组化染色中有良好的防脱片作用。     

强氧化剂脱黑色素对免疫组化染色影响的评估

正黑色素瘤是临床上较为常见的皮肤黏膜和色素膜恶性肿瘤,也是发病率增长最快的恶性肿瘤之一~([1])。免疫组化染色是黑色素瘤病理学诊断常用的检查方法。富含黑色素的瘤组织行免疫组化染色时,组织中沉积的大量黑色素与免疫组化阳性所显示的DAB棕黄色颗粒互相干扰,影响结果判读~([2])。因此,这一类组织染色前通常需要进行氧化脱黑色素处理。本实验在实践中发现强氧化剂处理切片不仅会造成组织脱片,还易破坏组织内抗原,造成假阴性结果。本文采用3组不同染色法评估富含黑色素的黑色素瘤组织中常规检测的4种抗原受氧化脱黑色素的影响程度,现报道如下。     

介绍一种陈旧HE染色切片的重染技术

ＨＥ染色切片存放时间久远便会产生组织颜色褪变现象。陈旧ＨＥ染色切片的重染常遇到胞核难着色、染色对比差、组织易脱片的缺点。作者尝试用碱盐溶液处理,对135例陈旧ＨＥ染色示教切片进行重染,效果满意,现介绍如下。1　材料和方法11　材料　选用1975～1985年颜色褪变的ＨＥ染色示教切片135张。12　试剂配制121　碱盐溶液　取氯化钠饱和的80%乙醇液540ｍｌ,加入1%氢氧化钠水溶液60ｍｌ。临用时配制。122　高锰酸钾溶液　15ｇ高锰酸钾溶于600ｍｌ蒸馏水。123　草酸溶液　3ｇ草酸溶于600ｍｌ蒸馏水。13　方法131　切片入二甲苯浸泡至盖玻片自…     

制作脂肪组织冷冻切片的体会

正高质量的冷冻切片对于病理诊断的可靠性、准确性尤为重要,而富含脂肪组织的冷冻切片的制作比较困难,用常规温度的切片方法难以切出理想的切片,且易脱片。陈洁等~([1,2])介绍防脱片明胶的办法,但效果不甚满意。翟金萍等~([3])报道利用厚切片挤压拉片的方法,虽然切片效果不错,但比较耗时,不容易操作。本文利用改良厚切片的方法做出了满意的结果,且对组织结构无损害。1材料与方法1.1材料选取江苏大学附属医院外科手术中新鲜脂肪组