关于RAPD技术中几个条件的探讨

本文通过对RAPD技术反应中模板抽提，模板浓度，Mg^2 和dNTP浓度，样本选择取大小的分析，探讨了RAPD的反应条件，高纯度的模板DNA是反应进行的基础，模板的用量一般在25－100ng为佳；对每一引物，模板都应反复摸索，以获得最佳Mg^2 与dNTP浓度；群体扩增产物出现的多样性比个体的更为丰富明显；取样大小对结果的统计分析影响不大。只有在充分优化RAPD反应条件的基础上，才能够得到准确的结果。     

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA法基因分型及应用

目的：对铜绿假单胞菌（PA）进行随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型。方法：以优化的反应体系和扩增条件对临床分离的274株PA进行用RAPD法的分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制全部基因分型图谱,同时对8例个体感染PA的连续性或跳跃性进行观察与分析。结果：274株PA共得RAPD型133种;8例个体感染PA的RAPD指纹图有7例完全一致而1例出现跳跃性。结论：RAPD法可将PA分型133种;个体可能存在感染两株基因型不同的PA。     

应用随机扩增多态性DNA技术分型产气肠杆菌

目的：建立产气肠杆菌(EA)随机扩增多态性DNA(RAPD)技术基因分型谱。方法：以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱。结果：108株临床分离EA共得72种RAPD型。结论：RAPD技术可将临床分离的EA分为72型。     

不同居群白芍的DNA随机扩增多态性研究

目的分析6个不同居群白芍的遗传多样性,为白芍的种质鉴定及遗传多样性分析提供依据。方法运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,对浙江磐安、四川中江、安徽亳州、上海崇明、江苏宿迁和山东荷泽居群白芍的基因组DNA进行随机扩增,利用NTsys2.10e软件计算遗传相似性,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图。结果共筛选了70个随机引物,从中挑选出8条多态性强、重复性好的引物,共检测出215个位点,多态性位点137个,多态位点比率为63.7%,UPGMA聚类可以将不同来源的白芍很好地区分开。结论不同产地间的白芍存在丰富的遗传多样性,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的白芍。     

正交设计微卫星PCR扩增条件的探讨

综述了影响微卫星PCR扩增的因素及正交设计原理,并以Taq DNA聚合酶、模板DNA、引物、Mg^2 等4种因素3种水平为例,利用正交素L9（3^4）的对扩增体系的优化进行探讨。     

俄罗斯"和平"号空间站搭载的番茄随机扩增多态性DNA分析

目的从分子水平证实长时间航天搭载的番茄种子后代的遗传物质发生变异。方法利用俄罗斯“和平”号空间站搭载6年的番茄种子地面种植,进行随机扩增多态性DNA(random amolified polymorphic DNA,RAPD)检测。结果空间搭载的番茄和地面对照经RAPD分析,40个随机引物中,31个引物扩增的DNA带型一致,9个引物扩增的DNA带型表现多态性。共扩增出269条带,多态性带29条,多态性百分率为10．8％。空间搭载的番茄和对照相比扩增带型均出现差异,且空间搭载的番茄之间的带型也不同。和地面对照相比,空间搭载的番茄中5号植株的DNA变异程度最大,3号植株变异程度最小。结论长时间航天飞行可引起番茄遗传物质DNA水平上的变异。     

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析中反应条件优化方案的探讨

目的：筛选出反应体系的最佳优化方案及最佳扩增条件,用于铜绿假单胸菌随机扩增多态性DNA分析（RAPD）。方法：应用单因素设计和反应曲面设计进行RAPD反应体系的优化,同时比较不同的退火温度、延伸温度及热循环仪类型对RAPD指纹图的影响。结果：单因素设计明显受到多因素间交互作用的影响,从而使优化的反应体系具有多样性,反应曲面设计得出相对稳定的优化反应体系（关键成分浓度）为：Mg^2 2.0mmol/L、引物0．5μmol/L和模板0．5ng/ μl。退火温度以38－43℃、延伸温度以62－72℃为最佳。结论：反应曲面设计是优化RAPD反应体系的最佳方案。扩增条件中退火和延温度分别以38－43℃和62－72℃为最佳。     

致病性小肠结肠炎耶氏菌DNA多态性

探讨致病性小肠结肠炎耶氏菌（简称：耶氏菌）DNA分子遗传特征。用聚合酶链反应（PCR）、DNA序列分析、随机扩增多态性DNA（RAPD）检测致病及非致病性耶氏菌10株。耶氏菌0：3、0：9、0：5，27血清型均含有致病基因粘附侵袭位点（ail),DNA指纹图谱也极其相似，与非致病型耶氏菌完全不同。然而，非致病性耶氏菌0：22血清型也含有ail基因，DNA指纹图谱在分子构像上部分与致病血清型相似。致病性耶氏菌具有相似的分子遗传特征，并表现为多态性。O：22血清型与致病性耶氏菌存在较近缘的种系进化关系。可能存在潜在致病性。     

鼠疫耶尔森菌重组酶聚合酶核酸扩增荧光检测方法的建立

目的 建立一种简单,快速的重组酶聚合酶核酸扩增技术检测鼠疫耶尔森氏菌的方法.方法 基于耶尔森氏菌的特异性序列设计引物及探针;通过对不同温度的检测来优化反应温度;通过对不同菌株的DNA模板进行检测评价该方法的特异性;通过对不同稀释浓度的样本DNA模板进行检测来确定灵敏性;通过模拟样品进行应用评价.结果 基于鼠疫耶尔森菌的...     

随机扩增多态性DNA最佳模板提取方法的探讨

目的　获得最佳模板提取方法用于随机扩增多态性DNA(RAPD)。方法　对 4种方法 (挑丝法、沉淀法、水清法和裂清法 )提取的模板DNA进行琼脂糖电泳、紫外线扫描及随机扩增多态性DNA ,比较其片段大小、纯度及RAPD指纹图差异。结果　挑丝法和沉淀法均可提取出大于 2 3kb且纯度较高的模板DNA ,二者指纹图完全一致且均有 2～ 4kb的较大片段。水清法和裂清法提取的模板有弥散、碎裂的DNA并纯度较差 ,指纹图上仅有 6 0 0～ 2 0 0 0bp的较小片段。 结论　用挑丝法或沉淀法提取的模板DNA最适于进行RAPD。     

感染性腹泻病的流行病学监测与病原学检测的初步研究

本文报道了1992年6月～1993年8月期间与第一军医大学“八五”攻关课题成都片区协作研究结果。按照统一方法对驻川某部进行了定点人群流行病学监测与病原学检测,其发病率为26.28％,人均腹泻为0.27次/(人·年)。为确保监测结果可靠配合采用10d、15d法进行补充调查,其发病率为32.64％。监测点各单位发病分布相差不显著(P≥0.05);干部战士发病率分别为12.27％和29.54％,战士高于干部(P≤0.05)。此间对154例腹泻病进行粪便检测,检出致病菌株12株,阳性率为7.92％,其中志贺氏菌群11株,致病性大肠菌1株,其它病原菌尚未检出。经施予干预性措施,创建卫生营院,加强卫生宣传教育,养成良好卫生习惯,有效地降低了腹泻病的发病率。     

西藏地区沙门氏菌属的PCR检测及病原体耐药性研究

本文报告了以鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛素基因(flic)序列的一对各21mer为引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测西藏高原地区(平均海拔3600m以上)采集的626例急性腹泻患者粪便标本。结果检出沙门氏菌阳性11株。经生化和血清学分型鉴定,确定其中3株为B群鼠伤寒沙门氏菌(S.typhi—murium);8株为C群中沙门氏菌(S.boris—morbificans)。11株沙门氏菌与29种常用药物药敏实验结果显示;16种药物敏感;13种药物均有不同程度耐药。耐药率高达63.6—100％,11株沙门氏菌呈现4—10种多重耐药性。     

细菌随机扩增多态性DNA分析中模板提取方法的优化

目的：筛选出最佳模板最方法用于随机扩增多态性DNA（RAPD）,方法：对4种方法（挑丝法,沉淀法,加热裂解和裂解剂裂解法）提取的模板DNA进行琼脂糖凝胶电泳,紫外线扫描及随机扩增多态性DNA,比较其片段大小,纯度及RAPD指纹图差异,结果：挑丝法和沉淀法均可提取出大于23kb且纯度较高的模板NDA,二者指纹图完全一致且均有2－4kb的较大片段,加热裂解法和裂解法提取的模板有弥散,碎裂的DNA并纯度较差,指纹图上仅有600－2000bp的较小片段,结论：用挑丝示或沉淀法提取的模板NDA最适于进行PAPD。     

轮状病毒的形态及形态发生的电镜观察

对临床诊断为病毒性腹泻的粪便标本52份进行电镜检查的基础上,将轮状病毒标准毒株(Wa,SA_(11)及NCDV)适应于LLC-MK_2细胞。结果表明,各株轮状病毒在形态上是一致的,并经历了相类似的形态发生过程。     

RAPD & FINS (mitochondrial 16s rRNA gene sequence) in analysis of food contamination: detection of food poisoning by Lizard

In poisoning, detection of the nature of causative agent is important for management of trauma and forensic investigation. Most of the methods in clinical toxicology are developed for detection of toxins and poisons. A random amplified polymorphic DNA (RAPD)-based method has been described for detection of species of animal from its morphologically unrecognizable fragments, recovered from food substances, consumption of which caused even death. Pre-mixed RAPD reaction beads and six RAPD primers were used in polymerase chain reaction analysis. Among six RAPD primers used, any one of them was sufficient in resolving this practical forensic situation. To enhance the probability values for matching in the present study of fixing identity of an animal, six set of market available RAPD primers were used. This is the first report of a forensic application of RAPD DNA typing in identification of charred skeleton remnants of Lizard species in food material. Furthermore unique amplicons were generated for different reptilian species, which can be used as species specific markers for species identification in forensic situation, however, no variations among individuals of same species were observed.     

IS605在中国人感染幽门螺杆菌中的检出特征

为探讨一新的座子插入元件IS605在中国人群感染幽门杆蓖(Hp)现的相关性,作者采用PCR方法,在107例临床分离培养的Hp菌株中,扩增IS6 05中的1167bp片段。发现：IS605在中国人群感染Hp中的阳性检出率为43.9%,在十二指肠溃疡中的检出率13.6%,明显低于慢性胃炎（52.2%)等其它Hp相关疾病组中的检出率（P＜0.05)。说明：作为转卒子插入元件的IS605,在中国人慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等不同疾病来源的Hp中均有分布,其中十二指肠溃疡中的检出率明显低于慢性胃炎等其它Hp相关疾病中的检出率。提示IS605的出现,与Hp致十二指肠溃疡的毒力改变有关。