荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (PCR)与普通定性 PCR检测血清 HBV DNA结果的差异。方法　同时采用荧光标记 (Ampli Sensor)定量 PCR方法及普通定性 PCR方法对 10 0例乙型肝炎血清样品进行 HBV DNA检测 ,并分析其相关性 ,比较其差异。结果　 10 0例荧光定量 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 74.0 % (74/ 10 0 ) ,定性 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 5 2 .0 % (5 2 / 10 0 ) ,两种方法的 HBV DNA检出率比较具有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　荧光定量 PCR与普通定性 PCR相比具有一定的优势 ,完全可以取代定性 PCR方法 ,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的临床研究

目的 :建立荧光定量PCR检测HBV DNA的方法 ,探讨荧光定量PCR在乙型肝炎病毒检测方面的临床价值。方法 :采用荧光定量PCR技术 ,对不同类型乙型肝炎患者及无症状健康者血清HBV DNA进行定量检测。对30例慢性乙型肝炎拉米夫啶治疗前后血清HBV DNA含量进行定量监测。结果 :(1)血清HBV DNA的检出率与HBeAg阳性率呈正相关 ,无症状健康者仍有 3%的检出率。 (2 )慢性乙型肝炎和乙肝后肝硬化的血清HBV DNA含量明显高于无症状HBV感染者和急性乙型肝炎 (P <0 .0 1)。 (3) 30例慢性乙型肝炎 ,经拉米夫啶治疗 12个月 ,HBV DNA阴转率为 73.3% (2 2 / 30 ) ,明显高于HBeAg阴转率 (46 .2 % ) (P <0 .0 5 )。结论 :荧光定量PCR检测HBV DNA ,能直接反映血清HBV DNA含量 ,在判断体内HBV是否复制、复制的程度 ,HBV是否被清除以及HBV血清标志阴性肝炎的诊断等方面明显优于HBV血清标志物检测。荧光定量PCR检测HBV DNA是抗病毒治疗选择和考核抗病毒疗效的最直接最可靠的指标 ,具有重要的临床价值 ,值得推广应用     

乙型肝炎病毒SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的 建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法 根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR Green I实时荧光定量PCR检出限范围为5×10²copies/ml～5×10⁸copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检出限范围为5×10~2copies/ml~5×10~8copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论 SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

HBV血清标记物不同组合模式与荧光定量结果之间的关系

目的：对HBV血清标记物不同组合模式与HBVDNA定量结果进行对比分析。方法：采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物，荧光定量PCR检测HBV—DNA，比较二者关系。结果：HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组、HB—sAg、HBeAg阳性组及HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAb阳性组HBV—DNA检出率和平均水平含量均较高。结论：荧光定量PCR检测HBV—DNA能准确反映体内HBV真实感染和复制情况，同时进行HBV血清标记物的检测与HBV—DNA荧光定量PCR的检测，更有利于HBV临床感染上的诊断、对治疗方案的选择及疗效评价。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应(PCR)与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清标本中乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA 定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应（PCR）与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测血清标本中乙型肝炎病毒（HBV）DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

荧光定量PCR法检测HBV DNA的临床价值研究

目的:分析荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)的临床价值。方法:将2017年7月-2018年6月我院治疗的124例HBV携带者作为研究对象。应用酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光定量PCR法测定血清标志物、HBV DNA,并观察检测结果。结果:与2组、3组、4组、5组、6组、7组相比,1组HBV DNA阳性率较高,HBV DNA含量较高,差异有统计学意义(P0.05);与3组、4组、5组、6组、7组相比,2组HBV DNA阳性率较高,差异有统计学意义(P0.05);2组与3组、4组、5组、6组、7组HBV DNA含量相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:荧光定量PCR法为HBV DNA检测中有效、准确方法,利于观察HBV复制、感染情况,可为乙型肝炎的诊治提供依据。     

HBV DNA检测阳性病人其血清学模式分析

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染的血清标志物是目前临床诊断乙肝病毒感染和观察治疗效果的重要指标;随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应技术(PCR)被广泛应用,对HBV感染的诊断已从免疫学检测发展到核酸检测水平,患者血清的HBV DNA定量测定对临床诊疗及预后判断均具有重要意义。本研究采用HBV DNA荧光定量PCR和酶联免疫(ELISA)对2943份检测阳性的病人中血清学标志物常见模式分布情况,及HBV DNA拷贝数与血清学模式之间的关系。探讨两种检测方法之间的相关关系、及荧光定量PCR技术检测乙肝病毒DNA的临床意义。…     

荧光定量PCR技术在血液筛查中的应用及可行性分析

目的　了解 ELISA法筛查血液乙型肝炎病毒 ( hepatitis B virus,HBV)的漏检率 ,探讨荧光定量聚合酶链反应 ( Flurescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术用于混合血浆标本病毒核酸检测的可行性。　方法　应用 FQ-PCR技术对常规 ELISA初复检正常献血者 (包括无偿献血者和个体献血者 )的微量血浆汇集池标本 ( 1 0人份× 2 0 μ1 )进行 HBV DNA检测 ,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。用双蒸水和 HBV DNA阴性汇集池中的血浆标本分别对 HBV DNA标准品(浓度为 1 0 3拷贝 /ml)作 1 0～ 5 0倍稀释后行 FQ-PCR测定 ,观察不同的血浆标本混合后是否存在 Taq酶抑制物的叠加作用及对 PCR结果有无影响。对浓度为 1 0拷贝 /ml～ 1 0 4拷贝 /ml的 HBV DNA标准品分别进行 FQ-PCR检测 ,确定试剂盒的敏感度。　结果　 1 2 0 0份无偿献血者标本中有 1 1例 HBV DNA阳性 ( 0 .92 % ) ;4 70份个体献血者标本中有 1 0例 HBVDNA阳性 ( 2 .1 3% )。双蒸水与混合血浆稀释的 HBV DNA标准品的 FQ-PCR检测结果 (定性 )完全一致。试剂盒的检出下限为 1 0 2拷贝 /ml。　结论　 ELISA法筛查血液存在较高的 HBV漏检率 ,FQ-PCR用于混合血浆标本的病毒核酸检测是可行的     

实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

科技新信息介绍

由北京大学肝炎试剂研究中心和北京邦尼尔生物技术有限公司共同研制成功的“p53抗体酶联免疫检测试剂盒（ELISA）”（48人份／盒）；“乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）荧光定量PCR（FQ-PCR）检测试剂盒”（50人份／盒），已开始应用于临床及科研单位。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

科技新信息介绍

[本刊讯]由北京大学肝炎试剂研究中心和北京邦尼尔生物技术有限公司共同研制成功的“p53抗体酶联免疫检测试剂盒（ELISA）”（48人份／盒）；“乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）荧光定量PCR（FQ-PCR）检测试剂盒”（50人份／盒），已开始应用于临床及科研单位。     

乙型肝炎病毒血清DNA定量检测的临床意义

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV DNA)定量检测的临床意义 ,以及与乙型肝炎血清学e系统 (HBe)标志、丙氨酸转氨酶 (ALT)和天冬氨酸转氨酶 (AST)水平的相关性。方法　采用荧光标记探针定量聚合酶链反应 (PCR)技术、酶联免疫吸附测定法及速率法 ,对 14 0例乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒血清DNA含量、血清学标志、ALT和AST进行检测 ;同时动态检测了 2 0例乙肝患者 2 4周拉米夫定治疗期间的血清HBe标记系统和HBV DNA含量变化。结果　e抗原 (HBeAg)阳性组的HBV DNA含量 (M =6 .4 8)显著高于e抗体 (HBeAb)阳性组的HBV DNA含量 (M =4 .2 8) ,差异有统计学意义 (H =2 8.4 8,P <0 .0 0 1) ;不同临床类型乙肝患者的HBV DNA含量检测结果之间的比较 ,差异无统计学意义 (H =2 .181,P >0 .0 5 ) ;在拉米夫定治疗期间 ,血清HBV DNA含量的下降和转阴明显先于血清学标志系统的转换。结论　HBeAg是反映HBV DNA复制的重要指标 ,HBeAg阳性表示乙型肝炎病毒复制活跃 ,但在抗病毒治疗期间 ,血清学标志指标反映HBV复制状态存在局限性 ,HBV DNA定量检测是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标 ;乙型肝炎患者病程的变化、ALT和AST水平与HBV复制是否活跃没有直接相关关系     

核酸检测技术在无锡市献血筛查中的应用分析

目的：评估核酸检测技术（Nucleic Acid Technology ,NAT）应用于献血者血液筛查的必要性和可行性。方法采用美国罗氏诊断公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型＋2型）核酸联合检测试剂盒（PCR‐荧光法）,对2013年4月～7月本血站ELISA检测合格的献血者9418例血液标本进行 HBV DNA、HCV RNA和 HIV RNA1＋2联合检测,先对6人份混样标本进行检测,如为非反应性,则该合并检测池中的标本均为非反应性,如合并检测呈反应性,再进行拆分检测。本试剂盒合并和拆分检测使用相同的复合PCR扩增系统,单管实时荧光 PCR检测3种病原体,通过将探针标记不同的荧光信号分辨HBV、HCV、HIV‐1＋2反应性病原体种类。结果对9418人份ELISA检测 HBsAg、抗‐HCV、抗‐HIV均为阴性的合格血液标本共检测出HBV DNA阳性6例,阳性率为0．06％;HCV RNA阳性1例,阳性率为0．01％,HCV RNA阳性血液病毒定量为4．27×106 IU／mL ;未检测出HIV RNA。结论 NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到HBV、HCV反应性的标本,常规开展NAT能进一步提高血液及输血安全。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA室内质控累积数据的评价

目的对实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA室内质控累积的数据进行评价。方法用Taqman实时荧光定量PCR法检测2010年1～12月两个批号的质控血清HBV DNA,计算每次阳性质控结果的常用对数、标准曲线的斜率、截距和相关系数(r)及相关结果的均值(x)、标准差(s)和变异系数(CV)。结果本室2010年测定的室内质控物结果对数的累计数据x±2s范围为4.470～5.429,在参考范围内,符合要求。结论 本实验室采用Taqman实时荧光定量PCR法检测HBV DNA实验中,选用的质控方法和质控品稳定性良好,能可靠有效地为临床提供准确的结果。     

扩增曲线异常对荧光定量PCR检测乙肝病毒核酸的影响

乙型肝炎病毒(HBV)DNA准确定量对乙型肝炎病人的治疗监测和预后判断有重要的临床指导意义.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)是目前测定HBV DNA较为简便、敏感和特异的方法[1].影响实时荧光PCR准确定量的因素很多,我们在对血清HBV DNA定量检测中发现个别标本的PCR扩增曲线荧光强度增加特别不明显且不规则(以下称"异常扩增曲线"),致检测结果明显偏低,对此我们进行了分析.     

两种HBV DNA荧光定量试剂盒检测结果比较

目的 比较两种乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR检测试剂盒的临床性能.方法 采用两种HBV荧光定量PCR检测试剂盒对526例临床样本进行检测,比较两种试剂的灵敏度、检测结果的一致性及相关性.结果 两种试剂阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,两种试剂具有较好的相关性,相关系数r=0.965.结论 HBV一步法试剂具有操作简便、定量准确、灵敏度较高等优点,是一种较好的临床HBV快速定量检测试剂.     

不同标本对荧光实时定量PCR法测定HBV0-DNA结果的影响

目的　利用沉淀煮沸裂解法提取HBV核酸 ,探讨不同的临床标本和贮存条件对荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒核酸(HBV NDA)结果的影响 ,为临床标本的收集和贮存提供依据。方法　按不同要求收集特定的临床标本 ,用本实验室使用的HBV DNA提取方法提取DNA模板 ,再用荧光实时定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果　经EDTA、中等含量肝素、枸橼酸钠抗凝血浆标本与相应血清标本测定HBV DNA的含量无显著性差别均 (P >0 0 5 ) ,但高浓度肝素 (10 0 0U/ml)抗凝管结果显著降低 (F值为 2 5 96 ;P <0 0 5 ) ;溶血、高血脂标本、标本反复冻融、血浆 (清 )标本在室温下短期贮存 (48h内 )对HBV DNA含量均无明显影响 (P >0 0 5 )。结论　用本实验室使用的HBV DNA提取方法 ,可使抗凝剂及其它PCR反应抑制物质对HBV DNA测定结果影响降到最低 ,从而使临床无污染标本一般均可接受