水体中GⅡ型诺如病毒荧光定量RT-PCR检测

目的建立水体中诺如病毒的富集和荧光定量RT-PCR检测方法。方法梯度稀释诺如病毒阳性便样标本,模拟水体通过含有阳离子混合醋酸纤维膜的微生物抽滤系统,加入浓度20%的PEG6000,高速离心2次浓缩水体获取病毒粒子,以构建标准质粒作对照,荧光定量RT-PCR检测水体中GII型诺如病毒。结果重组质粒T-NVS定量荧光PCR扩增良好,线性相关系数98%,最低检测灵敏度为100 copies/μL;10-1~10-4倍稀释的模拟水样经富集浓缩后,病毒回收率为5.75~19.74%。结论初步建立了水体中诺如病毒的富集与检测方法。     

基于阳离子膜滤芯的环境水体病毒浓缩方法效果评价

摘要:目的　本研究评价和优化基于阳离子膜滤芯的环境水体病毒浓缩方法,为监测环境水体中的病毒提供方法依据。方法　采用基于阳离子膜滤芯 NanoCeram 的膜吸附洗脱法作为初级浓缩手段,结合有机絮凝和超滤法,从大体积初始水量中浓缩目标病毒。预实验评价不同有机絮凝条件对病毒基因拷贝数回收和病毒滴度的影响。结果　随着有机絮凝牛肉浸膏洗脱液 pH 值的上升,回收病毒的基因拷贝数存在下降趋势（β＝41.59,P＜0.01）。采用2种浓缩流程回收4种水体中的目标病毒,成组 t 检验显示两者差异有统计学意义（t＝2.261,P＜0.05）。当调节有机絮凝洗脱液 pH 值为 2.0 时,水源水中脊髓灰质炎病毒的回收率最高达到7.87%。结论　本研究建立的方法可作为今后环境水体常规监测的有效手段。     

利用聚乙二醇的脱水作用对饮用水和地面水中的病毒进行第二步浓缩

当前对于大量水样中病毒的浓缩,主要采用吸附-洗脱方法,然而洗脱液的用量较大,在接种于细胞培养之前又需进一步浓缩。以前曾报道过一些关于第二步浓缩洗脱液的方法,它包括两相分离、小直径膜滤器、聚乙二醇脱水、有机物的絮凝和氢氧化铝絮凝而后脱水等步骤。本文报告的是用聚乙二醇作第二步浓缩洗脱液的方法。实验水样为渥太华河的净化水和未处理的河水。将水样通过滑石-硅藻土层,再用100ml 10%的小牛血清盐水(pH9.0)洗脱,收集洗脱液,并将已知量的病毒加入洗脱液中。然     

水中诺如病毒浓缩与应急检测研究

目的探索适合于基层实验室开展的水中诺如病毒浓缩与应急检测的方法,评估钙离子法对水体中诺如病毒的富集效果及检测灵敏度,为水源性诺如病毒突发疫情的病原检测提供可靠的检测数据。方法将不同浓度的指示病毒(GⅡ型诺如病毒)加入到不同水样中,用钙离子法进行富集,用荧光定量PCR检测,根据富集前后的病毒浓度,评估方法的回收率;根据不同梯度的检测值,评估方法的灵敏度。同时制备不同的模拟水样进行荧光定量PCR检测。结果钙离子法的平均回收率为81.6%,检测灵敏度为模拟样本中病毒浓度为10 copy/μl。而10份不同模拟水样荧光定量PCR检测阳性9份。结论钙离子法浓缩水样中的诺如病毒,回收率与灵敏度均较高,操作简单;同时,荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点,适用于基层实验室开展水体中诺如病毒的应急检测。     

纯净水中病毒富集和浓缩方法优化及筛选

目的 使用膜吸附（混合纤维素酯膜,MCE）–超滤法对纯净水中的病毒进行富集浓缩,通过优化其富集试验条件,研究不同试验条件下纯净水中病毒的富集和浓缩效率,筛选最优试验条件。方法 以噬菌体MS2为目标病毒,首先对膜吸附过程中4个影响因素进行多水平的排列组合试验,再使用筛选出的最优条件与超滤过程中2个影响因素进行组合筛选,使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-q PCR）技术检测、计算噬菌体MS2的回收率,最后对试验数据进行统计学分析。结果 MCE-超滤法的最优富集条件为：阳离子浓度（0.025 mol/L）、MCE膜的孔径（0.22μm）、洗脱液（1%TGBE）、洗脱方式（震荡洗脱）、超滤管截留分子量（30 k D）、离心力（3 000 g）。优化后的MCE-超滤法对纯净水中的噬菌体MS2病毒回收率可达到81.20%(95%CI=71.86%～90.54%)。结论 经优化后的MCE-超滤法对纯净水中的噬菌体MS2病毒有较高的回收率,可用于纯净水中病毒的富集浓缩。     

水中大肠埃希菌f2噬菌体反冲超滤装置浓缩效果评价

水环境中存在100多种威胁人类健康的血清型病毒,因饮用水污染病毒引起传染病的暴发流行屡见不鲜[1],受到广泛关注.自然水体特别是饮用水中,病毒含量极低,病毒的浓缩成为检测水病毒的关键.大肠杆菌噬菌体f2噬菌体属无包膜单链RNA病毒,直径为22 ～ 26 nm[2],其物理、化学性质及对外界环境耐力与脊髓灰质炎病毒等相似,检测方法简便,对人不致病.已有人建议将f2噬菌体作为肠道病毒的指示物[3-4].浓缩水体病毒方法多样,其中超滤法可用于污水处理、制备纯水和实验室病毒浓缩[5],但鲜见于大体积地表水的病毒浓缩.本实验采用直径10 nm的超滤膜,建立反冲式闭路浓缩系统,进行f2噬菌体回收实验并评价浓缩效果,旨在建立一种适用于地表水、饮用水的病毒浓缩方法.     

果蔬生产用水中甲肝病毒检测方法和质控体系的研究

目的建立果蔬生产用水中甲型肝炎病毒(HAV)的检测方法和质量控制标准体系。方法在水样中添加2.5×10~9pfu/m L的质控物质大肠杆菌噬菌体MS2100μL,采用正电荷滤膜法捕获病毒,并根据大肠杆菌噬菌体MS2的标准曲线计算出病毒回收效率,实时荧光RT-PCR检测水样中甲肝病毒,并建立质量控制标准体系。结果对6个水质样品同时加入HAV和大肠杆菌噬菌体MS2并进行病毒回收率的比较,HAV回收率为1.24%~32.68%,MS2回收率为1.64%~14.24%,达到了ISO/TS 15216-2-2013对病毒回收率>1%的要求。同时对30个实际水质样品进行HAV检测,1个样品检出HAV,质控物质大肠杆菌噬菌体MS2提取回收率为1.24%~24.19%,标准偏差为0.0612。结论所建立的水样中病毒检测质量控制体系保证了检测结果质量。     

水样中病毒浓缩和回收

近年来,由于水污染的加剧,病毒污染引起的水源性疾病正在增多,已经引起人民的广泛关注。即使很少量的病毒颗粒亦可致病。目前各种水样微生物学质量控制主要是通过常规监测粪大肠菌群和大肠埃希菌这样的细菌指示物来实现的,然而大多数观点表明环境水样中细菌和病毒污染水平并不相关,因而建立饮用水中病毒学监测指标十分必要。由于水样中只有少量病毒颗粒存在,进行水样检测前必须浓缩水样中的病毒。水中病毒的检测除了要有准确、灵敏的检测方法外,水中病毒的浓缩与回收的效率亦是决定病毒检测成败的关键。目前水样中病毒浓缩的方法很多,本文对常用的浓缩回收方法作一综述,并对各个浓缩回收方法的优缺点作一评价。     

水源水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的滤膜溶解-免疫磁分离-荧光染色检测方法

目的建立水源水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的滤膜溶解-免疫磁分离-荧光染色检测方法。方法水样经混合乙酸纤维膜过滤后,溶解于丙酮,离心浓缩,用免疫磁珠分选浓缩产物中的贾第鞭毛虫和隐孢子虫,并用免疫荧光染色剂染色计数。结果贾第鞭毛虫的平均加标回收率为36.58%,分步加标回收率试验中"富集浓缩"这一步加标回收率最低,为57.04%;隐孢子虫的平均加标回收率为19.58%,分步加标回收率试验中"富集浓缩"这一步的加标回收率最低,为26.55%;二者的平均加标回收率均符合我国GB/T 5750—2006《生活饮用水标准检验方法》中回收率高于10%的要求。结论该方法成本低,操作相对简便,适用于普通实验室对水源水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测,其中,"富集浓缩"步骤为影响回收率的关键步骤。     

水体中致病菌富集和核酸提取方法及优化

目的 建立一种灵敏、可靠、快速对水体中致病菌富集和核酸提取的前处理方法，用于水体致病菌荧光定量PCR检测。方法 通过加标准菌株脓肿分枝杆菌、原菌液梯度稀释，采用离心柱法和磁珠法核酸提取试剂盒结合不同滤膜洗脱方式进行核酸提取；采用不同材质、尺寸、数量的击打物质及均质仪循环次数等对核酸提取条件进行优化；所得核酸进行荧光定量PCR检测，比较各方法的提取效率；采用最优提取条件，对加标水样进行荧光定量PCR检测，考察全流程回收率和检出限。结果 采用0.20μm滤膜过滤+7颗大锆珠均质仪循环6次+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit方法回收率最高（81.03%±19.23%），检出限达到6.20 CFU/100 mL。结论 均质仪+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit法更适用于水体中致病菌的富集和核酸提取。     

水中肠道病毒三种富集方法的效果比较

目的 探讨一种效果较好的水中病毒富集方法,为水中病毒的检测提供依据.方法 向高压灭菌处理的水样中接种已知滴度的脊髓灰质炎Ⅰ型病毒,采用载阳电荷滤料法、膜吸附-洗脱法Ⅰ、膜吸附-洗脱法Ⅱ对水样分别进行病毒富集后,利用荧光定量RT-PCR技术检测并计算回收率.结果 当水中病毒载量为7×102 ～7×105 pfu/L时,载阳电荷滤料法的病毒回收率为92％～94％；2种膜吸附-洗脱法的回收率为72％ ～ 77％.结论 载阳电荷滤料法富集水中病毒的效果好于2种膜吸附-洗脱法.     

固相萃取-气相色谱-质谱联用测定水体中拟除虫菊酯残留

建立了水中多种拟除虫菊酯类农药残留的固相萃取-气相色谱-质谱(GC／MS)联用检测方法。水样用C18固相萃取碟富集吸附水样中待测组分，以石油醚 乙酸乙酯(95 5)洗脱；DB-5MS毛细管柱分离，全扫描scan定性确认，选择离子监测SIM模式进行定量，结果表明，该方法能同时分离测定水体中6种拟除虫菊酯类农药。6种农残组分的基体加标平均回收率为79．37％～103．4％，方法的相对标准偏差为5．66％～13．2％，水样浓缩2500倍的最低检测限为0．0016～0．0065μg/L．该方法与《生活饮用水卫生规范》2001年版执行的国标法相比，有机溶剂用量少，样品萃取容量大，极大地提高了方法的灵敏度和准确性，能满足我国乃至欧盟制订的水体中拟除虫菊酯类农药残留允许限量标准。     

两种方法浓缩污水水样及HBV-DNA基因探针检测

采用滑石粉-硅藻土浓缩法和Al_2(SO_4)_3·18H_2O浓缩法,浓缩某医院经处理的污水水样,并用基因探针检测该污水水样中的乙型肝炎病毒。将污水水样浓缩液点在硝酸纤维素膜上,再用HBV-DNA基因探针进行杂交。经放射自显影,结果表明,用Al_2(S0_4)_3·18H_2O浓缩法浓缩的经处理污水水样中发现有乙型肝炎病毒存在,其阳性率为50％;而用滑石粉-硅藻土浓缩法浓缩的经处理污水水样中未发现有乙型肝炎病毒。     

二级处理出水中伤寒沙门菌的定量PCR检测

目的 建立城市污水二级处理出水中伤寒沙门菌的定量PCR检测方法.方法 以构建的伤寒沙门菌重组质粒作为标准品,采用whatman2号(孔径为8μm)定性滤纸对水样预过滤,硝酸纤维素膜浓缩水样,选用伤寒沙门菌特异性引物ST3和ST4进行实时荧光定量PCR(quantitative PCR,QPCR)检测.结果 在2.8x1...     

污水处理传统工艺与新工艺出水中有机提取物的雌激素样作用比较

目的评价污水处理厂传统处理工艺和新技术处理工艺出水中有机提取物的雌激素样活性,比较两种处理工艺对微量有机污染物的去除效果。方法采用树脂吸附固相萃取富集水样中的微量有机污染物,利用重组基因酵母试验和小鼠子宫增重实验检测水样中有机提取物的雌激素样活性大小。结果重组基因酵母检测中,在原水样中微量有机污染物浓缩1000倍条件下,新技术出水有机提取物处理的酵母表现出β-半乳糖苷酶活性,而三级出水、二级出水和进水都为500倍,相同条件下的β-半乳糖苷酶活性,新技术出水组三级出水组二级出水组进水组。小鼠子宫增重实验中,仅进水有机提取物油溶液原液组和阴性对照组之间具有显著性差异(P0.05),其他各水样组之间皆无显著性差异。结论郑州市城市污水经处理后雌激素样活性显著下降,但仍对环境具有潜在危害;新技术对污水中微量有机污染物的去除效果明显好于传统技术。     

熔融法处理垃圾焚烧飞灰过程中可溶盐富集规律研究

针对传统技术将垃圾焚烧飞灰进行资源化处置时,飞灰中可溶盐组分钠、钾、氯、硫含量过高会引起设备腐蚀、堵塞以及影响产品性能的问题,本研究利用高温熔融法处理飞灰,使飞灰中钠、钾、氯、硫等可溶盐物质向浓缩灰中富集,避免上述问题产生的同时,为后续可溶盐资源回收提供条件。结果表明:飞灰原料中可溶盐组分挥发率依次为氯(59.19%~70.21%)钾(37.71%~62.09%)钠(25.52%~55.89%)硫(21.93%~42.79%),表明可溶盐组分在烟气中大量富集。对预除尘系统、急冷降温系统及布袋除尘分别收集的3种浓缩灰进行分析发现,上述可溶盐最主要富集在布袋除尘收集的浓缩灰中。相对于原料,上述3种浓缩灰中各成分的含量倍数分别为:钠1.08~2.46、1.90~2.86、4.00~5.03倍;钾1.27~2.59、2.79~3.37、4.73~6.72倍;氯1.56~3.28、2.66~3.69、3.30~4.91倍;硫1.17~3.00、1.73~3.16、3.78~5.96倍。     

水中54种挥发性有机物的顶空-气相色谱法研究

目的:利用HS-GC技术,建立水中54种挥发性有机物的测定方法。方法:通过顶空技术对水样中挥发性有机物提取、浓缩水样,建立了水样中54种挥发性有机物的HS-GC-FID分析方法。结果:建立的方法回收率在81%～121%之间,测定精密度RSD在0.79%～14.2%之间,检出限在0.03 mg/L～0.19 mg/L之间(SIM模式)。结论:建立的方法简便、快速、灵敏、可靠性强。     

水体中微囊藻毒素和节球藻毒素的UPLC-MS~n分析方法研究

[目的]针对水体中3种代表性的微囊藻毒素（microcystin-RR,MC-RR;microcystin-YR,MC-YR;microcystin-LR,MC-LR）和节球藻毒素（nodularin,NOD）,建立一种快速、准确、可靠的痕量分析方法。[方法]样品经C18固相萃取柱净化富集后,采用超高效液相色谱-电喷雾串联三重四级杆质谱法（ultra performance liquid chromatography/tande mmass spectrometry,UPLC-MS/MS）,在多反应监测（Multi reaction monitoring,MRM）模式下进行检测,采用基质匹配标准曲线法消除基质效应。[结果]该方法加标回收率为95.7%~115.0%,精密度（RSD）范围为2.43%~6.04%,检测限可达0.05~0.20ng/L。将该方法应用于实际水样分析,水体中3种微囊藻毒素和节球藻毒素含量低于检测限。[结论]建立了水体中3种痕量微囊藻毒素和节球藻毒素的UPLC-MS/MS分析方法,该方法可用于实际水样的检测。     

固相萃取-气质联用法测定水中三氯杀螨醇及百菌清

目的:建立了水中多种拟除虫菊酯类农药残留的固相萃取-气相色谱-质谱(GC/MS)联用检测方法。方法:采用C18固相萃取碟富集吸附水样中目标组分,以二氯甲烷洗脱浓缩; DB-5MS毛细管柱分离,采用选择离子监测SIM的质谱扫描模式进行定性定量分析。结果:在50~400μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数均>0 .995,三氯杀螨醇、百菌清加标平均回收率为90 .0% ~101 .1%,方法的相对标准偏差为4. 2% ~8. 3%,水样浓缩2 .500倍的最低检测限分别为0 .0012、0. 0024μg/L。结论:本法具有非常高的选择性、灵敏度和准确度,完全能满足水中痕量三氯杀螨醇及百菌清的分析。