茶黄素对变异链球菌浮游细菌和生物膜的体外抑制作用

目的:探讨茶黄素（theaflavin,TF）对变异链球菌浮游细菌和生物膜的抑制作用。方法:分别测定TF溶液、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）溶液、氯己定（CHX）溶液和乙醇对照溶液对变异链球菌UA159的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）和最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）。体外构建变异链球菌UA159的生物膜,测定实验试剂对细菌增殖活性的影响及杀菌作用。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TF对变异链球菌UA159的MIC为500 μg/mL,MBC 为1 mg/mL。TF溶液浓度在2×MIC以上时,变异链球菌生物膜的代谢活性显著降低（P<0.05）,对生物膜也表现出较强的杀菌作用。结论:TF对已形成的变异链球菌UA159的生物膜具有显著的抑制活性以及杀菌作用,为TF的进一步临床应用提供了研究基础。     

乳酸链球菌素联合次氯酸钠对粪肠球菌的体外抗菌作用研究

目的    研究乳酸链球菌素（Nisin）联合次氯酸钠（NaClO）对粪肠球菌的体外抗菌作用。方法    采用微量稀释法测定Nisin和NaClO对悬浮态粪肠球菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;通过微量棋盘法计算分级抑制浓度指数（FICI）以判定两药联合效应;用Time-Kill实验来测定Nisin和NaClO单用或联合使用的杀菌动力学。结果    Nisin的MICNisin单药和MBCNisin单药分别为6、15 μg/mL,NaClO的MICNaClO单药和MBCNaClO单药分别为0.0625%、0.25%。两药联合应用时的FICI为0.504,对粪肠球菌的抗菌作用为相加作用。24 h内的Time-Kill曲线表明,在4 × MIC单药时,Nisin和NaClO分别单独应用12、8 h可完全杀灭粪肠球菌;Nisin与NaClO联合应用时2 × MIC单药即可在12 h后出现杀菌作用,从4 × MIC单药开始,在4 h内达到完全杀灭作用。结论    Nisin对粪肠球菌具有抗菌作用,且呈浓度依赖性。在体外将Nisin与NaClO联合应用时,对粪肠球菌的抗菌作用表现为相加作用,较单独应用时可在更短时间内以更低的浓度显示出杀菌作用。     

茶多酚-葡萄柚提取物对变异链球菌胞外多糖的影响

目的 观察不同浓度的茶多酚-葡萄柚提取物混合液对变异链球菌合成胞外多糖能力的影响,进一步探讨茶多酚-葡萄柚提取物混合液对变异链球菌的抑龋机制,为其临床应用提供更有益的实验依据。方法 使用低于混合液最低抑制浓度 (Minimal Inhibitory Concentration, MIC)值4个浓度 (即1/2、1/4、1/8、1/16 MIC)的茶多酚-葡萄柚提取物混合液与变异链球菌共同培养,收集上清液,上清液采用蒽酮法测定胞外多糖的含量。结果 随着茶多酚-葡萄柚提取物混合液浓度的升高,变异链球菌产水不溶性葡聚糖含量逐渐降低：实验组产水溶性葡聚糖量与空白组对照只有最高浓度组有明显差异(P＜0.05)。结论 茶多酚-葡萄柚提取物混合液可有效抑制变异链球菌产水不溶性葡聚糖,对变异链球菌产水溶性葡聚糖无明显抑制作用。     

姜黄素对变形链球菌UA159生长、粘附的体外实验研究

目的：探索姜黄素对变形链球菌UA159的抗菌能力及姜黄素对变形链球菌UAl59生物膜形成的影响。方法：微量肉汤稀释法检测姜黄素对变形链球菌的最低抑菌浓度（MIC）。分光光度计分析在抑菌浓度范围内姜黄素对变形链球菌生物膜形成的变化。结果：MIC法测得的姜黄素对变形链球菌的抑菌浓度为128wM,而15μM姜黄素即可显示出抑制变形链球菌生物膜形成的特性,且随着姜黄素浓度增加,抑制能力加强。结论：姜黄素具有抑制变形链球菌生物膜形成的特性,且该抑制能力不是建立在抑制变形链球菌生长基础上的。姜黄素可能成为龋病防治的新试剂。     

甘草水煎剂对变异链球菌生长和产酸影响的体外研究

目的研究甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌的抗菌活性。方法取粒径为0.2～3.2 mm的甘草颗粒加去离子水煎煮后过滤,滤液为实验用甘草水煎剂。采用液体稀释法测定甘草水煎剂对变异链球菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。在不同浓度甘草水煎剂中培养变异链球菌,分别于培养0﹑3﹑7﹑12﹑23、40 h时测定细菌悬液光密度值和培养液pH值,绘制变异链球菌的生长曲线和产酸曲线。结果甘草水煎剂对变异链球菌的MIC为50 mg·mL-1,浓度小于等于100 mg·mL-1的甘草水煎剂对变异链球菌无杀菌作用。甘草水煎剂对变异链球菌生长的抑制作用随浓度的增加而增强。甘草水煎剂对变异链球菌的产酸有一定的抑制作用,在培养12 h时抑制作用最强。结论甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌生长和产酸均有抑制作用。     

稻芽粗提物抑制变异链球菌的体外实验研究

目的:观察稻芽粗提物对变异链球菌的抑制作用。方法:采用醇提法制取稻芽的药物粗提物,并测量其在不同药物浓度下对变异链球菌生长、黏附、产酸等作用的抑制效果。结果:稻芽粗提物抑制变异链球菌(变链菌)体外生长的最低抑菌浓度(MIC)值为6.25 mg/mL,当稻芽粗提物浓度≥0.78 mg/mL时有较明显的抑制变链菌黏附的作用,当稻芽粗提物浓度≥0.39 mg/mL即有较明显的抑制变链菌产酸的作用。结论:稻芽粗提物对变异链球菌有一定的抑制作用。     

低聚木糖对变异链球菌生长和产酸影响的体外研究

目的　比较低聚木糖与蔗糖对变异链球菌生长和产酸的影响,为低聚木糖在牙齿保健中的应用提供理论依据。方法　分别采用质量浓度为0、1%、2%、8%、16%和20%的低聚木糖和蔗糖培养基培养变异链球菌24 h,通过Bioscreen C全自动微生物生长曲线分析仪每间隔30 min测定各组培养基的吸光度值（A值）;采用pH计分别于0、5.5、10、24 h测定各组培养基的pH值,运用Origin 2017描绘其变化曲线图。比较变异链球菌培养和发酵前后各组A值及pH值的变化量（ΔA和ΔpH）。结果　（1）低聚木糖组和蔗糖组细菌培养基的ΔA均随着培养时间的延长而增大（F值分别为467.165、3207.610,P < 0.05）;低聚木糖组和蔗糖组不同质量浓度培养基的ΔA比较,差异均有统计学意义（F值分别为11682.528、5483.421,P < 0.05）;且这种差异随着培养时间的延长而增大（F值分别为88.140、41.171,P < 0.05）。（2）变异链球菌培养和发酵24 h后,低质量浓度（1%、2%）低聚木糖在略微或不提高变异链球菌生长水平的同时（P > 0.05）,明显抑制了变异链球菌的产酸能力（P < 0.05）;高质量浓度（16%、20%）低聚木糖在明显抑制变异链球菌生长的同时,变异链球菌的产酸水平略有提升（均P < 0.05）。（3）变异链球菌培养和发酵24 h后,与同质量浓度的蔗糖相比,16%、20%的低聚木糖可明显降低变异链球菌的生长水平（P < 0.05）;1%、2%的低聚木糖细菌培养基的ΔA略高,但差异无统计学意义（P > 0.05）;8%的低聚木糖可提高变异链球菌的生长水平（P < 0.05）;各质量浓度低聚木糖细菌培养基的ΔpH均高于相同质量浓度的蔗糖（均P < 0.05）。（4）与同甜度的蔗糖（质量浓度为8%）比较,低聚木糖（质量浓度为20%）抑制变异链球菌的生长及产酸作用更显著。结论　低质量浓度低聚木糖可抑制变异链球菌产酸,高质量浓度低聚木糖可抑制变异链球菌生长;相较于蔗糖,高质量浓度低聚木糖可降低变异链球菌的生长及产酸水平,提示低聚木糖作为龋病易感人群的食品甜味剂具有良好的应用前景。     

薄荷复方煎液对龋病、牙周病致病菌杀菌作用的研究

目的：研究薄荷复方煎液对龋病、牙周病致病菌的抑制和杀灭作用。方法：致龋菌血链球菌、变形链球菌和牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌分离培养,将薄荷复方煎液配成不同浓度,分别对4种细菌做药敏试验,记录各自的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果：血链球菌MIC1：32,变形链球菌MIC1：4,牙龈卟啉单胞菌MIC1：32;血链球菌MBC1：16,变形链球菌MBC1：1,牙龈卟啉单胞菌MBC1：8。结论：薄荷复方煎液对龋病、牙周病致病菌有抑制和杀灭作用。     

载银氧化石墨烯对变异链球菌生长及生物膜形成的影响

目的探讨载银氧化石墨烯（GO/Ag）纳米复合物对变异链球菌（S.mutans）生长及生物膜形成的抑制作用。 方法应用梯度稀释法检测GO/Ag、氧化石墨烯（GO）、纳米银（AgNPs）对变异链球菌的最小抑菌浓度（MIC）;菌落形成单位计数法比较GO/Ag、GO、AgNPs对变异链球菌的抑制作用;采用结晶紫染色法和XTT法测定变异链球菌24 h生物膜的生成量和活性;激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）观察生物膜形态和计算24 h生物膜的活菌比例。数据以单因素方差分析（One-Way ANOVA）和LSD-t检验进行统计分析。 结果GO/Ag对变异链球菌的MIC为0.16 mg/mL。0.64 mg/mL GO/Ag对变异链球菌的抑菌率为（82.90 ± 4.87）%,与对照组间的差异有统计学意义（t= 30.804,P<0.001）。而GO和AgNPs材料浓度提升至2.56 mg/mL时,肉眼观察细菌仍未见明显减少。在0.16 mg/mL GO/Ag浓度下,变异链球菌生物膜生成量和活性的减少率分别为（25.12 ± 0.01）%和（38.90 ± 3.42）%,活菌比例为（42.76 ± 19.48）%,与空白对照组间的差异均有统计学意义（t_生成量= 7.274,P_生成量<0.001;t_活性= 7.765,P_活性<0.001;t_活菌比例= 10.412,P_活菌比例<0.001）。 结论与AgNPs和GO相比,GO/Ag新型纳米复合物对变异链球菌的生长具有较好的抑制作用,并能抑制其生物膜形成。     

外排子抑制剂对变异链球菌致龋毒力因子的影响

目的研究外排子抑制剂（EPI）对变异链球菌（S.mutans）及其生物学特性的调控作用。 方法通过溴化乙锭（EtBr）吸收和外排实验筛选变异链球菌EPI。检测变异链球菌外排子功能被抑制后,其药物敏感性、耐酸性、菌种间竞争能力和生物膜形成能力等生物学特性的改变。EPI筛选采用方差分析,生物学特性检测采用独立样本t检验进行比较,检验水准α = 0.05。 结果128 μg/ml利血平显著抑制变异链球菌的外排功能且不抑制其生长代谢,可作为变异链球菌的EPI。添加128 μg/ml利血平后,洗必泰对变异链球菌的最小抑菌浓度（MIC）降低75%至0.25 μg/ml;在pH = 3的环境中35 min后无活菌生长,与对照组相比差异有统计学意义;对戈登链球菌的抑菌圈减小[（8.81 ± 0.33）mm VS（14.25 ± 0.51）mm,P<0.0001];代表12和24 h生物膜生物量的A₅₇₅值分别从1.31 ± 0.01降低63.92%至0.47 ± 0.004（t = 227.267,P<0.0001）和1.94 ± 0.02降低73%至0.52 ± 0.003（t = 223.730,P<0.0001）;12 h生物膜总菌量与对照组（73.39 ± 2.56）μm³/μm²相比降低了24.73%,为（55.24 ± 3.20）μm³/μm²（t = 9.896,P<0.0001）。 结论EPI能显著提高变异链球菌对洗必泰的敏感性,降低其耐酸性、菌种间竞争和生物膜形成能力,提示外排子可作为潜在的防治龋病的新靶点,EPI有望成为临床龋病防治的一类新药物。     

壳寡聚糖抑制变形链球菌的致龋能力

目的研究壳寡聚糖(chitooligosaccharide,COS)对变形链球菌生长、产酸及粘附能力的影响。方法选用变形链球菌标准株ATCC 25175,采用对倍稀释法测定COS对变形链球菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);采用菌落计数法,通过时间—杀菌曲线的变化,分析COS对细菌生长速度的影响;将COS及变形链球菌菌悬液各1 m L接种于无菌试管内厌氧培养,使COS的终浓度分别达到1/2 MIC、1/4 MIC、1/8MIC,测定上清液p H变化并绘制p H曲线;采用液体闪烁计数法测定壳寡聚糖对变形链球菌粘附羟磷灰石能力的影响。结果 COS对变形链球菌的MIC和MBC分别为2.00 g/L和4.00 g/L;COS能有效抑制变形链球菌的生长,较高浓度时对细菌还具有杀菌作用。亚抑菌浓度的COS可显著影响变形链球菌的产酸性和粘附能力,并且这种抑制作用呈浓度依赖性。结论 COS对变形链球菌的生长、产酸和粘附能力均有抑制作用。     

Synergistic antibacterial effects of copper and hexetidine against Streptococcus sobrinus and Streptococcus sanguis

The aim of this study was to determine whether a combination of copper and hexetidine had a synergistic antibacterial effect against Streptococcus sobrinus OMZ 176 and S. sanguis 10556. Concentration ranges of the test agents alone and in combination were prepared by serial dilutions in microtiter trays with brain-heart infusion (BHI) broth as the bacterial growth medium. After incubation at 37 degrees C for 24 h, the minimum inhibitory concentration (MIC), corresponding to the lowest concentration showing no visible growth, was determined. Evaluated by the fractional inhibitory concentration index, a strong synergistic effect ranging from 0.39 to 0.40 was observed. A similar effect was also demonstrated by growth curves, which were constructed on the basis of growth in BHI broth with addition of MIC/4 of each agent alone or MIC/8 of each agent in combination. A probable explanation for these findings is that the surface-active hexetidine molecule alters the bacterial cell surfaces and thereby enables an increased amount of copper to be transported into the cell.     

Effect of nicotine on growth and metabolism of Streptococcus mutans

Streptococcus mutans is a key contributor to dental caries. Smokers have a higher number of caries-affected teeth than do nonsmokers, but the association among tobacco, nicotine, caries, and S. mutans growth has not been investigated in detail. Seven S. mutans strains--UA159, UA130, 10449, A32-2, NG8, LM7, and OMZ175--were used in the present study. The minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), minimum biofilm inhibitory concentration (MBIC), planktonic cell growth, biofilm formation, metabolism, and structure (determined using scanning electron microscopy) of the seven strains treated with different concentrations of nicotine (0-32 mg ml(-1)) were investigated. The MIC, MBC, and MBIC were 16 mg ml(-1) (0.1 M), 32 mg ml(-1) (0.2 M), and 16 mg ml(-1) (0.1 M), respectively, for most of the S. mutans strains. Growth of planktonic S. mutans cells was significantly repressed by 2.0-8.0 mg ml(-1) of nicotine. Biofilm formation and metabolic activity of S. mutans was increased in a nicotine-dependent manner up to 16.0 mg ml(-1) of nicotine. Scanning electron microscopy revealed that S. mutans treated with a high concentration of nicotine a had thicker biofilm and more spherical bacterial cells. In summary, nicotine enhances S. mutans biofilm formation and biofilm metabolic activity. These results suggest that smoking can increase the development of caries by fostering increased formation of S. mutans biofilm on tooth surfaces.     

紫地榆防龋活性筛选及其防龋机制初步研究

目的:研究紫地榆各提取物防龋活性和活性成分对口腔致龋菌的增殖抑制以及产酸、产多糖功能的影响.方法:以洗必泰和五倍子作为阳性对照,采用试管二倍稀释法研究紫地榆提取物对2种主要致龋菌生长和代谢的影响,先测定紫地榆5种提取物对变形链球菌(S.mutans)、黏性放线菌(A.viscosus)的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),从中筛选出防龋活性部位;再测定低于MIC的4个浓度的紫地榆防龋活性部位对2种致龋菌产酸、产多糖的影响.结果:紫地榆正丁醇萃取部位对2种致龋菌抑制效果最好,对细菌产酸、产多糖均有一定的抑制作用,但作用弱于洗必泰和五倍子.结论:紫地榆正丁醇萃取部位可抑制致龋菌生长代谢,可能是一种天然防龋药物.     

白屈菜提取物抑制变形链球菌的实验研究

目的:研究白屈菜提取物白屈菜碱和白屈菜红碱对变形链球菌的抑制作用,探讨其防龋机制。方法:用二倍稀释法将白屈菜碱和白屈菜红碱等倍稀释为不同的浓度,用纸片扩散法测定其对变形链球菌的抑制作用,并用液体培养基测定其最低抑菌浓度(MIC),0.16%氯已啶溶液作为阳性对照。采用Spearman相关检验进行两组样本之间的相关分析。结果:白屈菜红碱乙醇溶液出现抑菌圈,而白屈菜碱乙醇溶液的各个浓度则无抑菌圈;100mg/ml的白屈菜红碱抑菌圈(25.8mm)大于对照组氯已啶溶液的抑菌圈(19.4mm);白屈菜红碱溶液浓度与变形链球菌抑菌圈大小之间具有高度相关性(r=0.99,P<0.01)。白屈菜红碱的最低抑菌浓度为0.78mg/ml。结论:白屈菜提取物白屈菜红碱有明显的抗菌作用,提示其可能具有较强的防龋作用。     

黄芩苷对变异链球菌UA159体外的抑制作用

目的探讨黄芩苷对变异链球菌国际标准株UA159的体外抑制作用。方法采用液体倍比稀释法结合酶标仪测OD600值测定黄芩苷对变异链球菌UA159的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。利用酶标仪测定不同浓度的黄芩苷药液中变异链球菌UA159的OD600值,绘制生长曲线;计算黏附率及黏附抑制率;用结晶紫定量法测定黄芩苷对变异链球菌UA159生物膜形成的影响;用扫描电镜观察黄芩苷对变异链球菌UA159细菌总量的影响。结果黄芩苷对变异链球菌UA159最低抑菌浓度为12 mg/mL;随着黄芩苷药液浓度的增加,变异链球菌UA159生长速度缓慢,并且其黏附率下降,黏附抑制率增加(P<0.05)。结晶紫定量法结果显示,与菌液组相比,0、6、12 h时加入黄芩苷药液变异链球菌UA159生物膜形成量显著降低(P<0.001)。扫描电子显微镜下,0、6、12 h时加入黄芩苷后细菌总量均明显下降。结论黄芩苷能够抑制体外变异链球菌UA159的生长繁殖;同时其对变异链球菌UA159的黏附、生物膜形成均有抑制作用。     

In vitro synergism between berberine and miconazole against planktonic and biofilm Candida cultures

Objectives

To investigate the antimycotic activity of the plant alkaloid berberine (BBR), alone and in combination with antifungal azoles, against planktonic and biofilm Candida cultures.

Design

The minimum inhibitory concentrations (MICs) of BBR, miconazole (MCZ), and fluconazole (FLC) towards Candida albicans, Candida glabrata, Candida kefyr, Candida krusei, Candida parapsilosis, and Candida tropicalis were determined by a microdilution method. For C. albicans, the synergistic effects of BBR combined with MCZ or FLC were examined in a paper disc agar diffusion assay and checkerboard microdilution assay. The effect of the BBR/MCZ combination was further investigated in a C. albicans biofilm formation model with a dual-chamber flow cell. The effect on metabolic activity of biofilm cells was established using 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT)/menadione.

Results

Berberine inhibited the growth of various Candida species (MICs 0.98–31.25 mg/L) in the following order of susceptibility: C. krusei > C. kefyr > C. glabrata > C. tropicalis > C. parapsilosis and C. albicans. Synergism between BBR and MCZ or FLC was observed in the disc diffusion assay as well as in suspension showing an FIC index <0.5 (∑FIC = 0.19). Whilst neither BBR (16 mg/L) nor MCZ (0.8 mg/L) alone significantly inhibited biofilm formation of C. albicans, their combination reduced biofilm formation by >91% after 24 h, as established from the reduction in surface area coverage (P < 0.01). The BBR/MCZ combination also exhibited synergy against the metabolic activity of pre-formed C. albicans biofilms in polystyrene microtiter plates (∑FIC = 0.25).

Conclusion

Berberine exhibits synergistic effects with commonly used antimycotic drugs against C. albicans, either in planktonic or in biofilm growth phases.     

人工合成抗菌肽对口腔细菌抗菌性能的初步研究

目的 评价人工合成抗菌肽（十肽）对口腔常见感染性疾病主要致病菌的抑菌活性。方法 采用琼脂扩散法及液体稀释法体外评价十肽对变异链球菌、表兄链球菌、嗜酸乳杆菌、血链球菌、格氏链球菌、黏性放线菌、内氏放线菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普雷沃菌、具核梭杆菌、伴放线嗜血杆菌及白色假丝酵母菌的抑菌性能,并测定十肽对变异链球菌的时间-杀菌曲线。结果 十肽对所选实验菌株均表现出不同的抑菌性能,对主要致龋菌的最小抑菌浓度MIC值为62.5~125 μg·mL^-1,而对主要牙周致病菌的MIC值为250~1 000 μg·mL^-1,其中,十肽对龋病主要致病菌变异链球菌有较强抑菌作用。时间-杀菌曲线结果显示,十肽作用20 min后开始杀菌,30 min之后可完全杀灭细菌,且在24 h之内无细菌生长。结论 新型人工合成抗菌肽十肽对口腔常见感染性疾病主要致病菌具有抑菌性能,其中对致龋变异链球菌的抑菌效果最为明显。     

纳米载银树脂基托的体外抗菌效果

目的研究纳米载银树脂基托在体外对变形链球菌和白色念珠菌的抗菌效果。方法先测定纳米载银抗菌剂对变形链球菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度,并以此为依据在聚甲基丙烯酸甲酯基托树脂粉中添加不同比例的抗菌剂,制成抗菌树脂基托,用贴膜法测定该树脂基托对变形链球菌和白色念珠菌的抗菌率。结果纳米载银抗菌剂对变形链球菌的最小抑菌浓度为0.1mg/ml,对白色念珠菌的最小抑菌浓度为1mg/ml。当添加抗菌剂的浓度分别为1、2、5、10mg/ml时,树脂基托对变形链球菌的抗菌率分别为67.4%、71.3%、99.0%、99.5%;对白色念珠菌的抗菌率分别为25.8%、54.8%、90.3%、93.0%。结论载银抗菌树脂基托在体外表现了一定的抗变形链球菌和抗白色念珠菌的效果,当树脂基托中抗菌剂的浓度达到5mg/ml时,抗菌效果满意。     

葡萄多酚和茶多酚抗变异链球菌活性的比较

目的 比较葡萄多酚和茶多酚抗变异链球菌的活性.方法 采用滤纸片法和试管1/2稀释法,测定葡萄多酚和茶多酚对变异链球菌的抑菌圈和最低抑菌质量浓度(MIC).结果 葡萄多酚和茶多酚均对变异链球菌的生长有抑制作用,抑菌圈直径为0.5～7.2 mm,且随药物的MIC增大而增大.其MIC分别是1和0.5 g·L-1.结论 葡萄多...