肌酸激酶B在前列腺细胞中的表达及临床意义

目的：探讨肌酸激酶B（脑型肌酸磷酸激酶,CKB）在前列腺良性及恶性细胞中的表达差异及临床意义。方法：采用实时定量PCR方法检测CKB在BPH1与LNCaP细胞中的表达差异,采用电泳仪法进行血标本CKB检验,最后采用半定量PCR方法研究CKB与雄激素的相关性。结果：CKB在LNCaP的表达量是BPH1细胞中的12．3倍,血检验发现,CKB在未经内分泌治疗前列腺癌组阳性率（5／10）显著高于前列腺增生组（0／10）,差异有统计学意义（P〈0．05）,内分泌治疗前列腺癌组CKB阳性率（4／37）与前列腺增生组阳性率（0／10）相比差异无统计学意义（P〉0．05）。CKB在比卡鲁胺（bicalutamide,Casodex）阻断组LNCaP细胞中的表达明显低于无比卡鲁胺阻断LNCaP细胞。结论：CKB在恶性细胞中高表达,对未经内分泌治疗前列腺癌患者有一定诊断价值,并且其表达受雄激素的调节,可能在前列腺癌的发生发展中起重要作用。     

荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β_1和β_2肾上腺素能受体基因mRNA表达

目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体(AR)基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ~Ⅱ级老年患者30例,分离外周静脉血淋巴细胞,采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达,并与半定量PCR检测结果进行比较。结果30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-AR mRNA表达,不同性别组同一基因表达量无显著差异(P>0.05);荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1-AR mRNA(P<0.001),而半定量PCR随着循环次数增加,β1和β2-AR mRNA表达差异减小。结论所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达,有较高的灵敏性及特异性;半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断。     

代谢综合征相关新基因MSRG实时荧光PCR检测方法的建立

目的 建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础.方法 根据MSRG cDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性.荧光PCR检测不同浓度葡萄糖[5 6mmol/L(G5.6)、22mmol/L(G22)、33.3mmol/L(G33.3)]刺激人肝癌细胞株HepG2细胞MSRG的表达并与半定量RT-PCR方法进行比较.结果 建立了MSRG mRNA表达的实时荧光PCR检测方法.荧光PCR检测显示G33.3、G22和G5.6组HepG2细胞MSRG表达均有显著差异,半定量RT-PCR方法检测G33.3组MSRG表达显著增加,但不能检测出G22和G5.6组间有差异.结论 本实验建立的MSRG mRNA表达实时荧光PCR检测方法灵敏性、特异性和重复性较好,为MSRG功能的研究提供了一种重要手段.     

白藜芦醇抑制膀胱癌细胞生长增殖及影响miR-34a表达的研究

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人膀胱癌细胞T24生长增殖的影响,初步探讨miR-34a在Res影响T24细胞中的作用。方法不同浓度Res分别作用T24细胞24 h,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测p53蛋白水平,实时定量PCR(Real-time PCR)检测T24细胞miR-34a的基因表达。结果 Res剂量依赖性地抑制T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显增加p53的蛋白表达。此外,Res处理后T24细胞中miR-34a的基因表达亦显著升高。结论 Res能够有效抑制膀胱癌细胞生长增殖,可能与诱导细胞凋亡、上调miR-34a及p53表达有关。     

运用荧光定量PCR检测低氧训练大鼠肝脏ChREBP基因表达

目的:建立碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:32只SD大鼠随机分为常氧安静组、常氧运动组、低氧安静组和低氧运动组,运动组每天运动1小时,每周运动5天;低氧组每天在低氧下生活10小时.实验6周后取肝组织,应用实时定量PCR方法检测肝组织ChREBP mRNA的表达.结果:实时定量PCR方法可对肝组织ChREBP mRNA表达进行定量检测.ChREBP基因拷贝数与检测阈值呈线性关系,相关系数r＞0.99.结论:实时定量PCR方法检测ChREBPmRNA结果准确、可靠.     

RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究

目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细...     

肾细胞癌组织中CDK4、CyclinD1的表达及其意义

目的 探讨肾细胞癌组织中CDK4、CyclinD1的表达水平及意义。方法 应用实时荧光定量PCR法检测30例人肾细胞癌组织及癌旁肾组织中CDK4、CyclinD1的表达水平。结果 CDK4和CyclinD1在肾癌细胞中的表达水平均明显高于癌旁肾组织，但CyclinD1的表达升高水平和比例高于CDK4表达的升高。CyclinD1／CDK4的比值，在肾癌组织中高于癌旁肾组织。结论 CDK4和CyelinD1的过度表达可能引起细胞异常增殖、分化失控。CDK4和CyclinD1基因在肾细胞的发生、发展中可能起重要作用。     

125I标记雄激素受体TFO抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨反基因放射治疗对雄激素受体（AR）表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法用Iodogen法对AR三螺旋形成寡核苷酸（TFO）进行直接^125I标记，经脂质体介导转染LNCaP前列腺癌细胞株，于转染后24和48h分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法测定癌细胞增殖活性，RT-PCR方法检测ARmRNA表达，免疫组织化学方法检测AR蛋白表达。结果^125I-TFO的标记率为63．7％，放化纯为95．6％，比活度为80．1kBq／μg。相同TFO浓度下，^125I-TFO组LNCaP细胞的AR表达水平显著低于TFO组（P〈0．01），^125I-TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于TFO（P〈0．01）。结论反基因放射治疗对AR表达和前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于单纯的反基因治疗。     

雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的　探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法　针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果　2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论　该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖,可用于反基因放射治疗的研究     

心肌细胞特异性Let-7b转基因小鼠的建立

目的建立心肌细胞中特异性过表达Let-7b的转基因小鼠。方法构建心肌细胞特异性过表达Let-7b的转基因载体,显微注射导入小鼠受精卵中,通过胚胎移植,获得转基因首建者小鼠。利用PCR检测子代小鼠Let-7b基因整合情况。通过实时定量PCR检测Let-7b过表达的效率。结果 PCR检测发现,1只小鼠在其基因组上整合有Let-7b基因。实时定量PCR结果显示,该转基因小鼠在心脏组织中特异性地过表达Let-7b基因。结论成功获得了在小鼠心肌细胞中特异性过表达Let-7b的转基因小鼠。