基于Box-Behnken法筛选与优化虎杖疏松愈伤组织培养条件

目的:研究虎杖疏松愈伤组织诱导的最佳条件.方法:本试验以MS为基本培养基,比较了不同外植体和激素配比对虎杖愈伤组织诱导的影响,采用单因素试验法研究了光培养和暗培养对愈伤组织诱导的影响,应用Box-Behnken 法考察不同激素浓度对虎杖愈伤组织增殖的影响.结果:虎杖愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2,4-D 4.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg· L-1,最佳的培养方式为暗培养,愈伤组织继代培养培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+KT 0.4 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1.结论:实验研究过程中优化了虎杖疏松愈伤组织培养的条件,为建立虎杖悬浮细胞培养体系提供了基础依据.     

凹叶厚朴愈伤组织的诱导及其有效成分含量的比较

目的:研究凹叶厚朴愈伤组织的诱导、生长情况并比较愈伤组织内有效成分的含量。方法:采用单因素比较、正交设计试验,研究影响凹叶厚朴愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用高效液相色谱法测定不同来源愈伤组织内有效成分的含量。结果:外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以顶芽及茎段最好,雌蕊次之;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+NAA0.1mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1,而B5+NAA0.5mg.L-1+6-BA4.0mg.L-1对愈伤组织生长促进作用明显。以WPM为基本培养基诱导愈伤组织,继代后厚朴酚与和厚朴酚含量的总和可达0.1679%~0.2344%,但愈伤组织诱导率低,为33.08%~48.65%;培养条件为MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1时,愈伤组织诱导率为62.12%,继代后2酚总量为0.1686%。结论:本试验结果对凹叶厚朴愈伤组织的诱导及高产细胞系的筛选具有一定的参考价值。     

刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态调控

目的获得适宜悬浮培养的刺五加愈伤组织。方法利用植物组织和细胞培养技术,考察3种诱导培养基及9种继代培养基对刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态的影响。结果以α-萘乙酸(α-Naphthaleneacetic acid)2.0 mg.L-1+6-苄氨基嘌呤[N-(phenylmethyl)-1H-purin-6-amine,6-BA]2.0 mg.L-1诱导出的愈伤组织适于悬浮培养,叶和叶柄的诱导率分别为93.3%和100%;筛选出最佳固体继代培养的外源激素配比为NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1,在此激素配比下,愈伤组织生长代谢迅速,性状稳定,呈易分散的颗粒状,易于分散,适合下一步的悬浮培养。结论以刺五加嫩叶为外植体,NAA2.0 mg.L-1+6-BA2.0 mg.L-1为诱导培养基,NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1为继代培养基可以获得适宜悬浮培养的愈伤组织。     

杜仲带腋芽茎段组织培养的研究

目的研究不同培养条件下杜仲带腋芽茎段愈伤组织的诱导和生长情况,以及腋芽的生长情况。方法以带腋芽的杜仲茎段为外植体,设计9种不同的培养基配方,为了防止褐化,在23.4℃下培养箱中暗培养,30 d后调查出愈率及腋芽的生长情况。结果 NAA浓度从0.05~0.5 mg.L-1,随着浓度增加,腋芽生长受抑制;6-BA浓度从0.3~1.0 mg.L-1,随着浓度增加,愈伤组织块增大,达到1.0 mg.L-1时愈伤组织的生长受到抑制;本实验中最佳的杜仲愈伤组织诱导和生长培养基配方为6号培养基:B5+0.5 mg.L-1NAA+0.3 mg.L-16-BA。腋芽生长最佳培养基配方为4号培养基:B5+0.05 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-16-BA。结论本试验的结果对杜仲的生物技术利用有一定的参考价值。     

高山红景天的组织培养与快速繁殖

分别以高山红景天的幼茎和幼叶作为外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比对高山红景天愈伤组织的诱导、继代、生根的影响,以建立其快速繁殖体系.结果表明,幼茎是最佳的外植体,愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,诱导率达83.3％;不定芽诱导和增殖的最佳培养基为MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,诱导率和增殖率较高,达72％,且产生的不定芽数量较多,为3～4个;生根培养基以MS+IAA 0.5mg/L为最好,生根率100％,而且幼苗长势旺盛,能够满足高山红景天工厂化快速繁殖的要求.     

荆半夏组织培养及快速繁殖的研究

目的建立荆半夏快速繁殖体系,为抢救性开发荆半夏野生资源提供有力手段。方法用MS+6BA2.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1培养基诱导及分化培养;用MS+6BA0.2mg·L-1+IBA1.0mg·L-1培养基作生根培养。结果诱导培养2周后形成大量愈伤组织,继代培养3周后分化出大量丛生芽。生根培养2周后形成完整植株。结论通过组培快繁荆半夏的繁殖系数由自然栽培时的每年1~2倍提高到每月15倍左右。     

以叶片为外植体快速繁殖绿萝

本实验以绿萝的叶片为外植体在添加不同激素种类和浓度配比的培养基上诱导愈伤组织的形成,并进一步诱导不定芽的分化,建立绿萝的组织培养快繁体系。结果显示:在诱导培养基MS+TDZ 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L的上愈伤组织形成率最高,且褐化率较低;上述诱导获得的愈伤组织和不定芽进一步继代培养于MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L和MS+TDZ 0.2mg/L两种培养基上,分别采用黑暗和光照处理,发现光照可以显著促进愈伤组织和不定芽的转绿、增殖和分化。     

蒙古黄芪不定根的诱导

以蒙古黄芪无菌芽的下胚轴、无菌苗的根、茎、叶为外植体,分别接种在不同激素组合的Murashige和Skoog(MS)培养基中,在(25±1)℃条件下暗培养,蔗糖浓度为3.0%,pH值为5.8,琼脂的浓度为0.8%.对蒙古黄芪(Astragalus membranaceus Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao)进行愈伤组织诱导.结果表明最适合蒙古黄芪下胚轴愈伤组织诱导的激素组合为MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0 ml/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.5 ml/L和MS+α-奈乙酸(NAA)3.0 mg/L+6-BA 0.5 ml/L;最适合作为蒙古黄芪愈伤组织诱导的外植体为叶,最佳培养基为MS+NAA 3.0 mg/L.综合考虑愈伤组织质地以及后期试验目的,最终确定蒙古黄芪愈伤组织诱导和增殖培养基为MS+NAA 3.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L.黄芪愈伤组织生长曲线呈现S型,在d9进入快速增长期,最佳继代时间是在24 d左右.     

莫邪菊的离体培养研究初报

目的 为建立莫邪菊的离体培养体系.方法 以成熟果实中的种子为外植体,探讨不同生长调节剂对离体培养中愈伤组织诱导、不定芽的分化和试管苗生根的影响.结果 培养基配方为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA0.2 mg/L时,种子破壳萌发率为70%,胚轴处愈伤组织诱导率为100%;MS+6-BA 2.0 mg/L为合适的丛生芽诱导和增殖培养基配方;培养基为MS0时生根率为95%,生根效果好且配方简单,移栽的试管苗成活率可达95%.结论 该试验建立的离体培养体系可用于莫邪菊的离体培养.     

山葵愈伤组织培养及其风味物质的研究

通过山葵愈伤组织的诱导培养,测定培养物中的风味物质,为通过组织培养的手段来生产药用成分提供依据.选择山葵幼叶和叶柄作为外植体,以MS为基本培养基,配以不同浓度的激素进行愈伤组织的诱导.选择继代几次以后的愈伤组织进行风味物质的测定.确定MS-4-6-BA 1.0+NAA 3.0为愈伤组织诱导的最佳条件,致密型的愈伤组织经...     

白及幼根组织培养技术研究

目的：为白及组培快繁寻求最佳部位及最佳培养基配比。方法：研究不同激素浓度和配比对白及不同外植体诱导分化、增殖及生根的影响。结果：幼根最容易诱导出丛生芽,其最佳培养基为1/2MS＋1.0 mg·L-16-BA＋2.0 mg·L-1 NAA;丛生芽增殖最佳培养基为MS＋1.0 mg·L-16-BA＋0.05 mg·L-1 NAA;生根培养基以1/2MS＋0.5 mg·L-1 NAA为最佳。结论：建立了白及组培快繁体系。     

海南广藿香试管内芽分化与愈伤组织诱导研究

目的选择海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基。方法利用海南广藿香的叶柄、茎尖和带节茎段进行组织培养芽分化试验,并对上述材料进行愈伤组织诱导培养基选择试验。结果在芽分化培养基中,MS＋3-吲哚丁酸（IBA）1．0mg／L＋6-苄基腺嘌呤（6-BA）0．6mg／L培养基能够较好地诱导茎尖和带节茎端长出新芽,诱导率分别为94．3％和94．6％;在愈伤组织诱导培养基中,MS＋萘乙酸（NAA）0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L培养基能较好地诱导海南广藿香叶柄和带节茎段产生愈伤组织,诱导率分别为80．0％和100％。结论海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基分别为Ms＋IBA1．0mg／L＋6-BA0．6mg／L和Ms＋NAA0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L。     

Tropane alkaloid production and shoot regeneration in hairy and adventitious root cultures of Duboisia myoporoides-D. leichhardtii hybrid

Co-culture conditions for Duboisia myoporoides-D. leichhardtii hybrid hairy root induction were investigated using leaf explants and Agrobacterium rhizogenes ATCC 15834. The bacteria density and duration of co-culture greatly affected the induction rate; the highest rate of 50% was obtained when the leaf explants were co-cultured for 2 d with 10(6) bacteria. One hairy root clone that showed the fastest root growth was selected and used for comparison study with adventitious roots cultured with 0.5 mg/l indole-3-acetic acid (IAA). The hairy roots cultured in Murashige and Skoog (MS) liquid medium grew well and yielded much more tropane alkaloids (35 mg/l scopolamine and 17 mg/l hyoscyamine) than adventitious roots cultured in 0.5 mg/l IAA after 6 weeks of culture at 25 degrees C in the dark. The hairy and adventitious roots (2.5 cm) grown in liquid media were divided into 5 parts (each 0.5 cm) along the root axis. Distribution of scopolamine and IAA was then determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Inverse relationship between contents of scopolamine and IAA was observed in the hairy roots; increase of scopolamine and decrease of IAA were proportional to the distance from the root meristem. In contrast, the contents of scopolamine and IAA were relatively constant in the adventitious roots. In shoot regeneration experiments, the hairy and adventitious root segments (1 cm) were placed onto 1/2 MS solid medium containing various concentrations of IAA and BA cultured at 25 degrees C under 16 h light. In adventitious roots, the shoots regenerated on media containing 6-benzyladenine (BA) (0.5 to 5 mg/l), and 100% regeneration was observed in medium with 0.1 mg/l IAA and 2 mg/l BA. On the other hand, shoot regeneration was only observed in 33% of hairy roots cultured on medium containing 5 mg/l BA.     

荷花玉兰组织培养的研究

采用正交设计法考察了４种植物激素对诱导荷花玉兰愈伤组织产生的影响,筛选出最佳的植物激素配比为：ＭＳ培养基＋２,４－Ｄ（２,４－二氯苯氧乙酸,４ｍｇ／Ｌ）＋６－ＢＡ（６－苄基氨基嘌呤,１ｍｇ／Ｌ）＋ＮＡＡ（ａ－萘乙酸,４ｍｇ／Ｌ）;找到最适外植体为花托和叶芽,对比了不同外植体形成愈伤组织的时间、形态和质地的差异。     

杭白菊同源四倍体的诱导和鉴定

采用正交试验设计方法，进行了杭白菊试管苗快速繁殖技术的优化，同时进行了组织培养条件下杭白菊同源四倍体诱导与鉴定技术的研究。结果表明，诱导愈伤组织的最优外植体为叶片，最适培养基为MS＋KT（激动素）2．0mg／L＋NAA（萘乙酸）0．2mg／L；确定了杭白菊最佳繁殖培养基为MS＋BA（6-苄基嘌呤）0．2mg／L＋IAA（吲哚乙酸）0．05mg／L＋NAA0．2mg／L；最佳生根培养基为1／2MS＋IAA0．2n堰／L＋ABT（生根粉）0．3mg／L。在诱导四倍体的试验中，秋水仙碱浓度对存活率有显著影响，诱导杭白菊同源四倍体的最佳条件是在2％二甲基亚砜和浓度为0．2％的秋水仙碱中浸泡36h，诱导率高达13．33％。通过根尖细胞染色体鉴定，共获得11个同源四倍体株系。     

细辛组织培养技术研究

目的研究细辛组织培养技术,优化细辛组织培养体系。方法以野生细辛越冬芽为外植体,在不同激素浓度配比的培养基上进行初代培养、不定芽增殖及生根培养,并进行生根苗的移栽。结果细辛组织培养过程中适宜的培养基为：（1）初代培养基,MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1rag／L;（2）不定芽增殖培养基．MS＋6-BA1．5rag／L＋NAA0．2mg／L;（3）生根培养基,1／2MS＋IBA1．0mg／L。结论优化的培养体系适宜细辛的组织培养,可在短期内获得大量优质种苗。     

林荫银莲花不定芽增殖培养基的优化

为提高林荫银莲花(Anemone flaccida Fr.Schmidt)不定芽繁殖系数,对其组培快繁体系进行优化。以林荫银莲花无菌苗为外植体,研究了培养基中激素、碳源、添加物和矿质元素钙等组分对其不定芽增殖和生长状况的影响,得出最佳的不定芽增殖培养基配方。以1/2 Ca浓度MS为固体培养基,激素为1.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA,蔗糖或食用白糖30 g/L,水解酪蛋白为添加物,浓度为750 mg/L,培养30 d后繁殖系数可达4.01,大幅提高了不定芽的增殖速度和质量,为工厂化生产林荫银莲花种苗奠定了基础。     

蒙古黄芪组织培养及同源四倍体的诱导与鉴定

通过蒙古黄芪组织培养技术的正交试验，确定了蒙古黄芪最佳繁殖培养基：MS＋BA0．6mg／L＋IAA0．2mg／L＋PP3330．2mg／L；叶作为诱导愈伤组织的外植体优于茎，最适培养基：MS＋BA2．0mg／L＋KT1．0mg／L＋NAA0．5mg／L；最佳生根培养基：1／2MS＋IAA0．5mg／L＋IBA2．0mg／L＋ABT2．0mg／L。建立了蒙古黄芪快速繁殖体系；在无菌条件下利用秋水仙碱诱导蒙古黄芪，获得62个染色体加倍遗传稳定的变异试管苗株系，通过试管苗根尖染色体鉴定，对诱导获得的蒙古黄芪染色体加倍株系进行初步筛选，为进一步获得蒙古黄芪优良品系奠定基础。