中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响及致色素作用

目的 探讨中药对皮肤酪氨酸酶基因表达、色素生成和黑素细胞增殖的影响。方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用的旱莲草等7种中药,以棕色豚鼠为动物模型,采用mRNA原位杂交观察中药外涂对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响,并用Schmorl法染色和多巴-氧化酶染色观察中药促色素生成及黑素细胞增殖的作用。结果 原位杂交显示中药处理组的酪氨酸酶阳性细胞数和杂交信号明显高于对照组(P<0.01),尤其以旱莲草、夏枯草、刺蒺藜等显著。Schmorl法和多巴-氧化酶染色示7种中药能使豚鼠表皮基底层内含有黑素颗粒的细胞数和多巴阳性细胞的数量增多(P<0.05),但7种中药的两种作用并不完全平行(P>0.1)。结论 旱莲草等7种中药均具有上调豚鼠皮肤酪氨酸酶的基因表达、促进黑素生成和黑素细胞增殖的作用,提示中药的作用不仅限于转录水平,有可能影响黑素细胞的增殖和黑素颗粒的生成。     

七白膏方剂中药提取物对离体人黑素细胞的作用

目的:评价七白膏方剂中的药物对离体培养人黑素细胞的作用.方法:建立体外人表皮黑素细胞模型.醇提法提取各种中药活性成分.以熊果苷为实验对照,检测各种中药提取液对于离体培养人黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的干预作用.结果:低浓度白芷对黑素细胞增殖呈抑制作用(P＜0.05),但高浓度时略呈激活作用.其它中药对黑素细胞增殖和酪氨酸酶活性有抑制作用.不同中药提取液对于黑素合成抑制作用不同.结论:各种中药提取液可影响黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成,从而干预体外人黑素细胞的代谢.     

墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。     

四种中药复方乙醇提取物对酪氨酸酶抑制作用的研究

目的将13味对酪氨酸酶具有不同抑制作用的中药根据中医理法组成4种方剂,观察中药复方对酪氨酸酶的影响,以探讨中医理法和实验药效的关系及其可能的作用机制,为临床优化组方提供实验依据.方法Ⅰ方,活血化瘀,柔肝疏肝,针对肝郁型;Ⅱ方,补气行气,健脾祛湿,针对脾虚型;Ⅲ方,补肾阴、补肾阳,针对肾虚型;Ⅳ方,补益气血,调和阴阳.通过离体实验测定中药复方对酪氨酸酶抑制率.结果实验结果显示,Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ方显著抑制酪氨酸酶活性,按作用强弱依依次为Ⅳ、Ⅱ、Ⅰ方(P＜0.05).结论在临床治疗黄褐斑时,要选择具有实验药效的药物,但不可忽视中医理论的指导.     

七组中药醇提物通过HaCaT细胞对黑素细胞株B10BR增殖和黑素合成的影响

目的 研究黑胡椒等中药醇提物通过角质形成细胞对黑素细胞增殖及黑素合成的间接作用,探讨其外用治疗白癜风的可能机理.方法 选取七组中药的醇提物,其中Ⅰ号:透骨草、浮萍各等份;Ⅱ号:白芷、蛇床子各等份;Ⅲ号:补骨脂;Ⅳ号:黑胡椒;Ⅴ号:黑胡椒、补骨脂各等份;Ⅵ号:女贞子;Ⅶ号:复方卡力孜然酊,加入到HaCaT细胞培养基中,采用ELISA法测定上述中药干预后HaCaT细胞上清液中内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量;MTT法测定经中药干预后HaCaT细胞上清液对水生化黑素细胞株B10BR增殖的影响,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氧氧化钠裂解法测定黑素含量.结果 Ⅱ号和Ⅴ号中药能明显刺激HaCaT细胞分泌内皮素-1(P<0.01及P<0.05).Ⅲ号、Ⅳ号和Ⅶ号可促进HaCaT细胞分泌bFGF(P<0.01,P<0.05及P<0.05).经各组中药处理后的HaCaT细胞培养上清液,Ⅲ号、Ⅵ号能显著促进B10BR的增殖(P<0.01),Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号能明显提高B10BR酪氨酸酶活性(P<0.01);Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅵ号、Ⅶ号能明显促进B10BR黑素的合成(P<0.01或<0.05).结论 部分中药醇提物治疗白癜风有效可能与中药促进了角质形成细胞分泌细胞因子、改变表皮的微环境有关.     

复方中药对小鼠B－16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的激活作用

目的 研究复方中药对小鼠 B－ 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响,及其对细胞内酪氨酸酶的激活作用。方法 四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定中药对细胞增殖的影响;酶学方法研究中药对酪氨酸酶活性的作用; 470 nm比色标准曲线法测定黑素含量。结果 研究发现复方 3号（补肝肾为主）促进黑素细胞增殖和色素合成的能力高于复方 1号（光敏感性药物）或复方 2号（活血化瘀）,而酶激活能力复方 1号较为稳定。结论 在白癜风治疗中补肝肾类中药不可忽视。同时也说明影响黑素合成的因素是多方面的,可能不仅仅与酪氨酸酶活性有关。     

中药含药血清对体外培养黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨中药补肾化瘀胶囊含药血清对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法体外培养人黑素细胞株,制备大鼠中药含药血清,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)和蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性。结果中药含药血清均能促进黑素细胞增殖,与空白对照组差异有显著性(P<0.05);三组含药血清间两两比较差异无显著性(P>0.05)。补肾化瘀胶囊组较六味地黄丸组、逍遥丸组、空白对照组有显著抑制酪氨酸酶活性的作用,差异有显著性(P<0.01);六味地黄丸组、逍遥丸组、空白对照组三组两两比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论补肾化瘀胶囊含药血清对黑素细胞增殖具有促进作用,对酪氨酸酶活性具有明显抑制作用,在促进黑素细胞增殖上各组中药含药血清作用相当,在抑制酪氨酸酶活性上补肾化瘀胶囊组优于六味地黄丸组和逍遥丸组。     

过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞的生物学作用.方法:分别以0.05、0.1、0.5、1 mmo1/L的H2O2作用于体外培养的黑素细胞24 h,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素合成;比色法测定丙二醛(MDA)含量.结果:正常人表皮黑素细胞经H202处理后,酪氨酸酶活性降低,黑素合成量减少,丙二醛含量增多,其中以0.5、1 mmol/L的H2O2作用明显,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:H2O2在-定浓度时可抑制正常人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性,减少黑素合成,并可致细胞过氧化损伤.提示H2O2在白癜风发病中可能起到一定作用.     

七组中药醇提物通过HaCaT细胞对黑素细胞株BIOBR增殖和黑素合成的影响

目的研究黑胡椒等中药醇提物通过角质形成细胞对黑素细胞增殖及黑素合成的间接作用．探讨其外用治疗白癜风的可能机理。方法选取七组中药的醇提物，其中Ⅰ号：透骨草、浮萍各等份；Ⅱ号：白芷、蛇床子各等份；Ⅲ号：补骨脂；Ⅳ号：黑胡椒；Ⅴ号：黑胡椒、补骨脂各等份；Ⅵ号：女贞子；Ⅶ号：复方卡力孜然酊．加入到HaCaT细胞培养基中，采用ELISA法测定上述中药干预后HaCaT细胞上清液中内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量；MTT法测定经中药干预后HaCaT细胞上清液对永生化黑素细胞株B10BR增殖的影响，多巴氧化法检测酪氨酸酶活性，氢氧化钠裂解法测定黑素含量。结果Ⅱ号和Ⅴ号中药能明显刺激HaCaT细胞分泌内皮素-1（P〈0．01及P〈0．05）．Ⅲ号、Ⅳ号和Ⅶ号可促进HaCaT细胞分泌bFGF（P〈0．01，P〈0．05及P〈0．05）。经各组中药处理后的HaCaT细胞培养上清液，Ⅲ号、Ⅵ号能显著促进B10BR的增殖（P〈0．01），Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号能明显提高B10BR酪氨酸酶活性（P〈0．01）；Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅵ号、Ⅶ号能明显促进B10BR黑素的合成（P〈0．01或〈0．05）。结论部分中药醇提物治疗白癜风有效可能与中药促进了角质形成细胞分泌细胞因子、改变表皮的微环境有关。     

中药槲皮素对皮肤增色作用的动物实验研究

目的研究槲皮素对豚鼠表皮中黑素细胞的影响,观察外用槲皮素对实验动物的安全性和疗效,为白癜风等色素减退性皮肤病的中药治疗提供实验依据。方法用槲皮素乙醇提取液外涂豚鼠背部皮肤并予红外线照射,5周后对涂药皮肤和对照皮肤进行活检。用不同的染色方法分别制备病理切片,观察黑素细胞形态学改变,统计给药后表皮病理切片中黑素细胞数目和黑素含量。结果豚鼠表皮外用槲皮素后黑素细胞数目明显增加,槲皮素实验组多巴阳性黑素细胞数及含黑素颗粒细胞数均较空白对照组显著增多,与阳性对照组8-甲氧补骨脂素(8-MOP)差异无显著性。结论槲皮素对棕黄色豚鼠背部皮肤有增色作用,具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。     

复方中药白癜冲剂对B16黑素瘤细胞生物学特性影响的实验研究

目的：观察复方中药白癜冲剂对体外培养的B16黑素瘤细胞生物学特性的影响。方法：体外培养B16黑素瘤细胞,测定不同浓度白癜冲剂对B16黑素瘤细胞增殖、对酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。结果：低浓度剂量组白癜冲剂对B16黑素瘤细胞较对照组有明显促增殖作用,黑素合成增多,酪氨酸酶活力增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：复方中药白癜冲剂能促进B16黑素瘤细胞的黑素合成,提高酪氨酸酶活力。     

威灵仙等4种中药抑制黑素生成作用的机制研究

目的：研究威灵仙等4种中药对melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶（Tyr）活性、Tyr及酪氨酸酶相关蛋白（TRP）基因转录与蛋白表达的影响,对4种中药抑制黑素生成的作用机制进行初步探讨.方法：用中药提取物处理melan-a小鼠黑素细胞后进行黑素含量测定,左旋多巴染色、实时荧光定量反转录（RT）-PCR和Western blot分别测Tyr及TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平.以熊果苷作为阳性对照.结果：4种中药在20 μg/mL浓度时具有明确的抑制黑素生成的作用,并且都不同程度地抑制Tyr的氧化活性.威灵仙、五倍子可以同时降低Tyr及TRP-1、TRP-2的基因转录和蛋白表达量.而麦冬、白苏叶可以降低Tyr及TRP-1、TRP-2的合成,但是对基因表达无影响.结论：威灵仙及五倍子提取物可以通过抑制Tyr、TRP-1、TRP-2的基因表达及蛋白合成和Tyr的多巴氧化活性这三方面实现其抑制黑素产生的作用;麦冬、白苏叶在基因转录后的酶蛋白水平发挥抑制黑素生成的作用.     

14种中药提取成分对酪氨酸酶活性的抑制作用

目的 寻找更合理的试管内分析方法研究药物对体外酪氨酸酶活性的调节,筛选对酪氨酸酶活性抑制作用显著的中药有效成分。方法 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,观察14种中药有效成分在试管内对酪氨酸酶系统的调节作用。结果 10种中药提取的成分在不同浓度对酪氨酸酶活性、黑素生成量上显示了剂量依赖性抑制。其中丁香酚、姜黄油、没食子酸、丁香酚和姜黄素复合物(1:1)以及前两者与蜕皮激素(ecdysone)的复合物(1:1:1)对酪氨酸酶抑制活性与单体化合物熊果甙比较差异有显著性(P<0.05);丁香酚、姜黄油对酪氨酸酶呈竞争性抑制,没食子酸呈反竞争性抑制。结论 丁香酚、姜黄素、没食子酸和其他中药有效成分对酪氨酸酶具有体外抑制作用。     

血清药理学方法研究复方中药对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的运用血清药理学方法研究复方中药白斑一号对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响.方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,运用血清药理学、细胞学的方法,测定药物对B16黑素瘤细胞增殖情况,对酪氨酸酶活性调节作用及黑素含量的影响.结果复方中药白斑一号能促进黑素合成和激活酪氨酸酶,从而阐明了该方在白癜风治疗中的机制.     

89味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的上调作用

知治疗白殿风７４首方剂进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８９味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酷氨酸酶和无细胞以素自动化生成黑素量的影响。结果显示有１９味中药以物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性、黑素生成量呈剂量依赖性激活和上调,其中赤芍、川芎、黄芩、女贞子、乌梅和降香对酪氨酸酶活性激活率和单体化合物８－甲氧补骨脂素无统计学差异。进一步研究这些中药治疗白癜风的确切机制,评估其临床应用价值是必要的。     

桃红四物汤对酪氨酸酶活性与黑素生成的影响

目的：观察桃红四物汤对酪氨酸酶活性与黑素生成的影响。方法：采用直接添加法和血清药理学方法，观察待测物对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响；蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定酪氨酸酶活性，氢氧化钠溶解法检测黑素生成量。结果：桃红四物汤加减水煎剂和药物血清均有明显激活酪氨酸酶活性的作用，并呈剂量依赖性。水煎剂呈现明显的促黑素生成活性。结论：桃红四物汤加减在体内外均具有激活酪氨酸酶作用，且体外有促黑素生成活性。     

18味中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

目的研究中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法以MTT法测定培养的B16黑素瘤细胞的增殖活性:NaOH法测定黑素生成量;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与空白对照组相比,18种中药乙醇提取物中,有9种提取物对1种以上指标有显著性作用(P<0.05或P<0.01)。沙苑子、甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黄芩、黑芝麻、墨旱莲可明显促进B16黑素瘤细胞增殖,甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、何首乌、黑芝麻、墨旱莲明显增加黑素含量,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻、墨旱莲明显增加酪氨酸酶活性,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻和墨旱莲的提取物对3种指标均有显著性作用(P<0.05或P<0.01)。结论山慈姑等6种中药的乙醇提取物具有促进黑素细胞增殖和合成黑素的作用。     

中药滋补肝肾方对人黑素细胞株黑素合成的影响

目的通过中药滋补肝肾方对人黑素细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量影响的研究,探讨本方治疗白癜风的作用机制.方法采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定本方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定中药对黑素含量的影响.结果滋补肝肾方对体外培养的人黑素细胞具有促进细胞增殖、提高黑素含量和酪氨酸酶活性作用.结论本方能促进黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗白癜风的作用机理之一.