国际主要微生物保藏机构保藏能力分析

新冠病毒感染疫情凸显了SARS-CoV-2病毒等病原微生物保藏及共享的重要性。我国微生物资源较为丰富, 然而由于保藏工作起步较晚, 病原微生物保藏体系建设与国际上主要保藏机构相比, 还存在一定差距。本文采用文献调研法, 结合官方网站公布的数据, 对比分析了美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, ATCC)、日本国家技术与评估研究所生物资源中心(NITE biological resource center, NBRC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, DSMZ)在运行管理、组织机构及共享能力方面的异同, 总结其成熟管理经验, 为我国病原微生物保藏机构的体系建设、运行管理和共享服务提出工作建议。     

基础医学细胞中心正式开始运作

在国家科技部的关心支持下 ,中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心已于近期正式成立并已开始运作。其宗旨是建成一个与国际接轨 ,集科研、服务、培训等多功能为一体的细胞资源库 ,为提高我国生命科学、重大疾病的研究水平和培养高水平的人才 ,提供高质量的服务。当前 ,细胞中心的主要任务包括 :1.收集、整理并保藏包括人体各主要系统及有关疾病的细胞系 (株 ) ,不断扩大库容。2 .建立资料信息库。广泛收集有关细胞培养和传代及永生细胞系的有关资料 ,以备研究人员选择参考。3.建立和完善细胞培养及保藏的操作规范和质量控制体系 ,…     

细胞培养实验中细胞系鉴定及质量控制重要性探讨

目的 以脑胶质瘤细胞系(U87)为例,探讨对在细胞培养实验中所使用的细胞系进行鉴定和质量控制的重要性.方法 对三株不同来源的U87细胞系进行STR分型检测,并结合显微镜下形态学特征,判断所测细胞系是否为真正的U87细胞系及是否发生交叉污染.结果 通过细胞STR分型结果与ATCC、DSMZ中STR数据库对比,得出U87-1细胞分型与ATCC中U-87 MG Glioblastoma-Astrocytoma Humanl00％匹配;U87-2细胞分型与DSMZ数据库中U-87MG100％匹配;U87-3未得到扩增产物,不能进行分型,原因是该细胞株为非人源细胞.结论 细胞培养实验中所使用细胞系的鉴定对于后续研究具有重要意义,可使用STR分型检测技术在细胞系培养过程中进行质量控制,对其进行准确鉴定,并排查是否存在细胞交叉污染.     

过氧化氢介导的淀粉样β蛋白的细胞毒性

淀粉样β蛋白(amyloid β protein,Aβ)是由40～43个氨基酸组成的多肽,与Alzheimer病人脑中的斑块形成有关,对培养的神经元具有细胞毒性。采用原代的中枢神经系统培养物及克隆的细胞系,都     

体外快速筛选和鉴别Coxsackievirus B3有毒株和无毒株方法

由于缺乏有效的体外鉴别柯萨奇病毒Ｂ3 (ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ3 ,ＣＶＢ3 )致病性的方法 ,长期以来接种乳鼠体内观察心肌病变。本研究所用的ＨｅＬａ细胞和人脐静脉内皮细胞均从中国典型物培养保藏中心 (武汉 )购买。标准病毒株ＣＶＢ3 /0 (非致病株 )由Ｂｅｃｋ教授 (ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｏｒｔｈ ｅｒｎＣｏｌｏｒａｄｏ,ＵＳＡ)惠赠 ,ＣＶＢ3ｍ(致病株 )由钟学宽教授 (哈尔滨医科大学 )惠赠 ,ＣＶＢ2 、ＣＶＢ6,脊髓灰质炎病毒由同济医科大学病毒室提供。阳性质粒 :Ｐｓｖｃｖｂ3 5 9(携带ＣＶＢ3 致病株全基因组 )和Ｐ…     

MDCK细胞悬浮培养制备流感疫苗

每年的流感流行引起许多人患病 ,作为高危人群的老人和儿童被建议使用流感疫苗。迄今为止 ,流感疫苗由鸡胚制造。该作者报道了制备流感疫苗的新技术 :MDCK细胞悬浮培养增殖法 ,并对现行培养该细胞系的其它技术加以评估。细胞培养需要一个复杂的介质支持 ,其中的牛血清或血清成分 (牛或人蛋白 )被用来保护细胞免受胰酶影响 (胰酶是用于细胞传代时分散细胞并在活化病毒及宿主细胞时起作用 ) ,这些动物源性物质有潜在感染性 ,为了避免这些危险 ,作者创建了MDCK细胞悬浮培养法制备流感疫苗。在建立 MDCK悬浮细胞系 (330 16 )过程中 ,作者首…     

淋巴结及淋巴瘤内干细胞初探

目的 探讨淋巴瘤中存在肿瘤干细胞的可能性。方法 收集2例新鲜反应性增生淋巴结和1例外周T细胞淋巴瘤标本进行原代培养，对培养1d、12d、19d的细胞进行S-P法免疫组化染色。同时用Raji细胞系接种3只SCID鼠，在光镜、电镜下观察成瘤组织结构变化。并观察Raji细胞系、成瘤组织及再培养1周成瘤组织细胞免疫表型的变化。结果 淋巴结细胞原代培养12d、19d后剩余极少量细胞表达CD8、CD3、CD20、TDT；在细胞系及接种成瘤组织中，免疫组化查见少量CD5、TDT阳性细胞；Raji细胞系接种前后电镜观察见不同比例中心细胞及中心母细胞。结论 反应性增生淋巴结中存在淋巴结干细胞(或者长期记忆细胞)。细胞系及接种成瘤组织中CD5、TDT阳性细胞可能是肿瘤干细胞，进一步提示肿瘤干细胞存在的可能性。     

人胚胎干细胞系NS1的建立

目的:探讨利用长期冷冻的废弃胚胎建立人胚胎干(hES)细胞系.方法:将临床体外受精(IVF)及精子卵浆内注射(ICSI)周期中剩余冷冻5年以上的废弃胚胎复苏后继续培养至扩张囊胚,链霉蛋白酶去除透明带后采用全囊胚培养法获取原代类胚胎干细胞,再用机械法传代分离纯化hES细胞,命名为NS1.取不同代次的培养细胞,进行碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化实验对NS1进行全能性鉴定.结果:12枚废弃胚胎在体外继续培养后,有4枚发育为囊胚,最终得到1个干细胞系,经鉴定,这些细胞都具有hES细胞的生物学特性.结论:长期冷冻的废弃胚胎可用来建立hES细胞系.     

全国血液学和体液学检验专家委员会会议纪要

全国临床血液学和体液学检验专家委员会于 2 0 0 2年 1月 2 8日至 3 0日在广州召开。会议共有 17名委员参加 (委员会顾问顾可梁教授、陈宏基教授和王清涛副主任因故未能出席 )。国家药品监督管理局医疗器械质量检验中心及技术中心两位领导列席了本次会议。会议的主要内容包括 :确定“尿沉渣检查标准化”方案及具体实施、推广计划 ;商讨“血液分析仪校准规范化”方案。此次会议由中华医学会检验分会主任委员丛玉隆教授主持 ,丛教授总体介绍了 8个相关检验专家委员会的情况和组成原则 ,成立专家委员会的目的是为了进一步适应医疗市场的需求 ,…     

肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系的建立与保存

目的 建立肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系,为肺动脉瘘发病及遗传机制的研究提供永久的研究材料.方法 用EB病毒(Epstein-Barr virus)转染肺动脉瘘患者外周血B淋巴细胞,在37℃ 5%CO_2培养箱内培养(培养液成分:20%FBS、RPM11640、环胞霉素A和PHA),当细胞增长到汇合状态时传代及冻存.结果 所有建立的细胞系冻存后复苏的成功率为100%,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞系的方法稳定.结论 成功地对肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系中6个个体建立了永生细胞系.其中2个为肺动脉瘘患者,4个为患者家属正常对照.     

影响树突状细胞分化成熟因素的研究进展

树突状细胞(DC)是目前已知的体内功能最强的“专职性”抗原提呈细胞，多项研究已经显示DC在肿瘤免疫、抗感染免疫、免疫排斥等方面发挥着重要作用。在各种不同体外培养条件下，发现很多因素如细胞因子、微生物都会影响DC的分化、成熟，尤其肠道微生物如何调控DC对研究免疫反应的启动及免疫耐受的建立有着重要意义。本文拟就有关内容作一综述。     

影响树突状细胞分化成熟因素的研究进展

树突状细胞 (DC)是目前已知的体内功能最强的“专职性”抗原提呈细胞 ,多项研究已经显示DC在肿瘤免疫、抗感染免疫、免疫排斥等方面发挥着重要作用。在各种不同体外培养条件下 ,发现很多因素如细胞因子、微生物都会影响DC的分化、成熟 ,尤其肠道微生物如何调控DC对研究免疫反应的启动及免疫耐受的建立有着重要意义。本文拟就有关内容作一综述。     

微小RNA-146b-5p在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤中的作用与机制

目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制.方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型.将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中,然后再分别进行OGD/...     

人支气管上皮细胞的体外培养

背景：人支气管上皮细胞培养在呼吸系统疾病研究中应用越来越广泛。 目的：探索美国典型培养物保藏中心人支气管上皮细胞体外培养方法的可行性。 方法：对人支气管上皮细胞培养条件进行反复摸索,最终确定应用含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养。 结果与结论：实验培养的人支气管上皮细胞扁平,呈多边形,长满后呈“铺路石”样分布,经免疫组化检测发现培养的细胞表达上皮细胞标志物细胞角蛋白。在支气管扩张症患者痰液上清刺激下,细胞表达的核因子κB、肿瘤坏死因子α和白细胞介素8明显增强,证实培养的人支气管上皮细胞获得成功。提示不必拘泥于美国典型培养物保藏中心推荐的培养条件,改进的培养方法简便易行,有应用价值。     

细胞培养中细菌类微生物污染的快速检测

目的 检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法 用细胞培养中常见的培养物人为污染He-La细胞，设计细菌类微生物16S rRNA基因序列通用引物，PCR扩增16SrRNA基因序列片断，建立PCR检测培养细胞污染的方法，并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果 人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M.fernentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段，与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论 本实验建立了：16SrRNA基因序列通用引物PCR法，可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。     

《中国健康心理学杂志》编委工作会议纪要

<正>《中国健康心理学杂志》编委会于2017年7月31日—8月3日在吉林省延吉市召开,上午会议开幕式由郭敏处长(副主编)主持,中国心理卫生协会理事长、本刊名誉主编马辛教授做了重要讲话,肯定了杂志社工作,指出了下一步工作思路;《中国健康心理学杂志》主编李建明教授介绍了2016年中国科协主编培训班有关内容;华北理工大学心理统计学副教授杨绍清(编委)讲述了科技论文统计学中常见问题。下午会议由     

小鼠囊胚内细胞团的生长行为

胚胎干细胞(ES细胞)是由着床前内细胞团(ICM)或原始生殖细胞经体外分化抑制培养而建立的克隆细胞系。能够广泛的分化成各种组织细胞．具有潜在的科研及应用价值。来自ICM的E细胞分离中．ICM集落生长状态和最佳传代时间是一个关键环节。本研究通过观察鼠囊胚内细胞团的体外生长行为,为ES建系积累经验。     

《单克隆抗体荟萃》征稿启事

由著名微生物学家和免疫学家汪美先教授、金伯泉教授主编的《单克隆抗体手册》一书，自２０世纪９０年代初出版以来，得到了国内同行的大力支持和有关公司好评。该书的出版对于免疫学及生命科学中单克隆抗体的深入研究，对于交流信息、加强协作和促进开发应用起到了较好的甚至不可替代的作用。 鉴于单克隆抗体及其基因工程抗体的研究仍在蓬勃发展，其基础和临床的应用更加深入和广泛，并根据不少研究单位、公司及同道们的要求，现由《细胞与分子免疫学杂志》编辑部继续收集国内有重要价值的单克隆抗体杂交瘤细胞系和基因工程抗体有关内容，…     

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC；通过体外长期传代培养后建立1株细胞系，应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。结果 HSC细胞系已传了78代，保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为36．5h；细胞的染色体众数42条，为正常大鼠体细胞的染色体表型；双层软琼脂培养未见细咆克隆形成；免疫细胞化学检测表明，细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α；RT-PCR检测表明，该细胞系表达TGF-β、ICAM-1；聚硅酮膜培养法显示，HSC细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准，是1株新建立的大鼠肝星状细胞系，命名为rHSC-99，可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。     

稳定表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1基因的鼻咽癌细胞系的建立

目的:建立稳定表达鼻咽癌(NPC)来源潜伏膜蛋白1(LMP1)的鼻咽癌细胞系。方法:利用基因重组技术构建NPC来源LMP1的一般性真核表达载体及上皮特异性表达载体,并将其转染鼻咽癌细胞系CNE-2,用PCR、RT-PCR及蛋白印迹等检测N-LMP1在CNE-2中的整合和表达。结果:①成功构建了N-LMP1的一般性和上皮特异性表达载体。②N-LMP1基因在CNE-2细胞中获得了正确表达。结论:成功建立了稳定表达NPC来源LMP1的鼻咽癌细胞系,为进一步研究LMP1在鼻咽癌细胞中的作用机制奠定基础。