北京汉族支气管哮喘患者白三烯C4合成酶A-444C基因多态性研究

白三烯C4合成酶（LTC4S）是生成硫肽白三烯（CysLT）的关键酶。目前国外部分研究发现LTC4SA-444C基因多态性与支气管哮喘（简称哮喘）患者肺功能下降，病情严重程度及应用白三烯受体拮抗剂的临床反应相关。我们的研究初步探讨了在北京无亲缘关系汉族哮喘患者中，LTC4S A-444C基因多态性与哮喘的关系。     

ALOX5启动子区变异位点基因型变异与白三烯拮抗剂抗哮喘疗效的关系

目的研究中国正常人群和哮喘人群5-脂氧化酶（ALOX5）基因启动子区变异位点基因型变异频率及其与白三烯拮抗剂治疗效果的关系。方法按随机抽样原则选择白三烯拮抗剂治疗有效（A组）与无效（B组）病例各50例及正常人100例,测定入选者治疗前后第1秒用力呼气容积/肺活量（FEV1/FVC）;抽取10ml全血,检测Sp1-Egr1等位基因型基因序列。结果A组FEV1/FVC治疗前后比较有统计学差异（P〈0.05）;治疗后A组与B组FEV1/FVC比较有统计学差异（P〈0.05）;A组与B组比较ALOX5启动子处的Sp1-Egr1基因多态性有显著统计学差异（P〈0.01）。结论中国人群ALOX5基因启动子变异与白三烯拮抗剂治疗哮喘患者的疗效相关,ALOX5基因启动子基因序列检测可以指导哮喘患者的临床用药。     

支气管哮喘患者抗白三烯治疗的药物遗传学研究进展

近年来,通过对支气管哮喘（哮喘）患者抗白三烯治疗反应的差异进行研究,发现对抗白三烯（LT）治疗反应的差异与个体间的基因变异与基因多态性有关。在哮喘患者中存在5-LO基因启动子区SP1结合部位（-GGGCGG-）多态性、LTC4S基因启动子区A-444C多态性、FLAP启动子区21A重复片段多态性以及CysLT1受体基因的变异。具有上述多态性的基因组的个体对抗LT治疗的反应有很大的差异,本文就上述研究作一综述。     

参与白三烯合成的酶基因多态性与支气管哮喘

支气管哮喘 (简称哮喘 )是由多种细胞和细胞组份参与的气道慢性炎症性疾患。近年来 ,关于白三烯 (LTs)在哮喘发病过程中的重要地位有了越来越多的认识 ,白三烯调节剂在临床上得到广泛应用。国内、外大量研究证实 ,在过敏性哮喘、运动性哮喘、阿司匹林哮喘等各种哮喘患者中应用5 脂氧化酶 (5 LO)抑制剂或LTs受体拮抗剂等LTs调节剂可明显缓解哮喘症状 ,提高患者肺功能水平 ,改善其生活质量[1 3 ] 。深入研究参与LTs合成的酶基因时 ,人们发现其多态性与LTs调节剂疗效的个体差异密切相关[4] 。我们就参与LTs合成的酶基因多态性与哮喘的…     

变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性.方法 以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶 (β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/Xho I之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR,酶切及测序鉴定;经Sca I酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性.结果 成功扩增出大小为269 bp的ldh基因候选启动子;经PCR,酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍.结论 成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础.     

包含YMDD基因序列的乙型肝炎病毒P区基因变异的研究

目的研究包含YMDD基因序列的乙型肝炎病毒(HBV)P区基因的一级结构及其变异特点。方法从4例末经任何抗病毒治疗的HBV感染患者外周血血清中扩增HBV P基因区序列(长度为1057bp)，双酶切后克隆入pUC19载体中，每份标本随机取20个经限制性片段长度多态性分析(RFLP)法鉴定为阳性的克隆，采取错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测YMDD基序变异，最后取其中两个标本共10个阳性克隆进行双向测序。结果标本1和2克隆间核苷酸变异率分别为0．3％～1．1％，0．4％～1．7％。80个阳性克隆中，有2个克隆YMDD基序变异为YMGD。结论包含YMDD基序的HBVP区存在准种分布特征，在未经抗病毒治疗的患者血清中，存在一种新的YMDD变异形式，即YMGD变异。     

胰腺癌患者P^16基因第二外显子缺失与突变的研究

用银染聚合物酶链反应（ＰＣＲ）及单链构象多态（ＳＳＣＰ）技术检测了３０例胰腺癌患者的Ｐ＾１６基因。结果８例存在Ｐ＾１６基因纯合性缺失，２例突变，变异频率为３０％，Ｐ＾１３基因变异与胰腺癌组织学分级无关，与病理分期密切相关，提示Ｐ＾１６基因变异是胰腺癌发生发展中的频发事件，可用以评估胰腺癌预后。     

肝移植后乙型肝炎病毒再感染患者的病毒S区与P区重叠基因变异

目的 探讨乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)和拉米夫定对肝移植术后HBV再感染患者的HBV S基因与P基因重叠区变异的影响.方法 对2002年6月-2003年12月320例因乙型肝炎相关性终末期肝病行原位肝移植手术患者随访1.5～3.0年,选择资料完整的HBV再感染者14例为研究对象.直接基因测序法分析术前、术后HBV S基因及重叠P基因的序列改变情况;荧光定量PCR检测HBV DNA含量;微粒子捕捉酶免疫法检测血清HBIG浓度. 结果 14例患者术前、术后S区与P区氨基酸变异数量无明显改变,变异位点略有改变.基因型检测结果显示12例为C型,2例为B型,无其他基因型.S区"a-决定簇"基因变异发生在I126S、T131N、S143T和G145R位点,"a-决定簇"的上游和下游变异的有L110F、I113S和T160K位点.S区核苷酸突变时S区氨基酸存在同义与错义变异,可引起相应的P区氨基酸错义变异,其中包括已知的拉米夫定耐药位点变异及其以外的多位点氨基酸变异,且变异位点差异较大,大部分变异位点移植前已存在变异.术前有4例血清HBV DNA低于检测限,术后均阳性.HBIG浓度为0U/L者7例,≤100 U/L 5例,＞100U/L2例.结论 肝移植术后免疫抑制剂治疗对氨基酸变异位点的数目影响不大,对变异位点的位置有一定的影响;除了"a-决定簇"的基因变异点以外,"a-决定簇"的上游或下游基因位点也存在变异,可能是引起HBV再感染的另一原因;S区核苷酸位点的突变可引起S区氨基酸的同义和错义变异,并可同时引起重叠P区相应位点的错义变异,其临床意义有待进一步探讨.     

支气管哮喘患者白三烯基因多态性与抗白三烯治疗的相关性研究

目的 检测温州地区汉族人支气管哮喘(简称哮喘)患者白三烯酶基因多态性的分布频率,探讨酶基因多态性与孟鲁司特治疗的相关性.方法 采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法,对60例温州汉族哮喘患者(哮喘组)及61名健康者(对照组)的6个白三烯酶基因多态性位点进行检测.依据基因检测结果选取基因白三烯C4合成酶LTC4S(rs730012)CC+AC型11例与从型11例,观察孟鲁司特治疗4周后的肺功能和尿白三烯E4的变化.结果 (1)6个基因位点[5脂氧酶ALOX5(rs2115819、rs4986832、rs4987105)、白三烯A4水解酶LTA4H(rs2660845)、5脂氧酶结合蛋白ALOX5AP(rs10507391)和LTC4S(rs730012)]的变异频率均＜50%,单体型组间分布差异均无统计学意义(均P＞0.05).(2)基因ALOX5(rs2115819、rs4986832、rs4987105)和LTA4H(rs2660845)等位点变异等位基因频率组间比较差异均无统计学意义(OR值分别为1.1 12、0.964、0.964、0.673,均P＞0.05),变异等位基因OR值95%可信区间(95%CI)均包括无效值(OR=1.0).上述位点基因型组间比较差异均无统计学意义(χ2值分别为0.792、2.684、2.683、2.524,均P＞0.05).(3)基因ALOX5AP(rs10507391)位点在两组间存在差异,哮喘组变异等位基因A频率为23.3%(OR=2.016,95%CI为1.027～3.959,P＜0.05).基因LTC4S(rs730012)位点在两组间存在差异,哮喘组变异等位基因C频率为25.0%(OR=1.926,95%CI为1.007～3.685,P＜0.05).(4)孟鲁司特治疗4周后,基因LTC4S(rs730012)CC+AC型者的FEVl提高(t=6.185,P＜0.01),晨尿LTE4下降(t=2.925,P＜0.05).AA型者治疗前后的FEV,和LTE4无明显变化.结论 温州地区汉族人群中基因ALOX5AP(rs10507391)、LTC4S(rs730012)位点的变异与哮喘相关,而另外4个位点的变异与哮喘无关.携带LTC4S(rs730012)变异等位基因C型可影响孟鲁司特的治疗效应.

Abstract：

Objective To investigate the frequencies of leukotriene gene single nucleotide polymorphisms(SNPs)in the asthmatic subiects of Han population in Wenzhou district,and the association between SNPs and response to montelukast treatment. Methods Sequenom matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight(MALDI-TOF)was used to genotype six polymorphisms in 60 asthmatic patients and 61 controls.According to the SNPs results,11 cases with the LTC4S(rs730012)CC+AC genotype and 11subjects with the AA genotype were given montelukast treatment,and evaluated by the response of pulmonary function and urinary leukotriene E4.Results The frequencies of mutant SNPs in ALOX5(rs2115819,rs4986832,r94987105),LTA4H(rs2660845),ALOX5AP(rsl0507391)and LTC4S (rs730012)were less than 50%.There were no statistical differences of the haplotype distribution (P values were 0.914,0.609.0.609,0.315.0.752 and 0.636 respectively).No statistical difireFences of the mutant allele frequencies were observed in the genes ALOX5(rs2115819,rs4986832,rs4987105)and LTA4H(rs2660845)(OR values were 1.112,0.964,0.964 and 0.673 respectively,all P＞0.05).The invalid value(OR=1.0)was included in the 95%CI of odds ratios.There were no differences of genotype distribution in the above loci(χ2 values were 0.792,2.684,2.683 and 2.524 respectively,all P＞0.05).There was a statistical difierence in the ALOX5 AP(rs10507391)mutant allele between the 2 groups,and the frequency of mutant alllele A in the asthma group was 23.3%(OR=2.016,95%CI=1.027-3.959,P<0.05).There was a statistical difference in the LTC4S(rs730012)mutant allele between the 2 groups, and the frequency of the mutant allele C in the asthma group was 25.0%(OR=1.926.95%CI=1.007-3.685,P＜0.05).Compared with the AA genotype,the LTC4S(rs730012)CC+AC genotype showed a significant improvement of FEV1(t=6.185,P＜0.01)and urinary LTE4 level(t=2.925,P<0.05)after receiving montelukast treatment. Conclusions These results suggest that the SNPs of ALOX5 AP (rs10507391)and LTC4S(rs730012)are associated with asthma in our patients.The LTC4S(rs730012)locus genetic polymorphism contributes to improvement in montelukast response.     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒P区基因的动态变化

目的研究拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒P基因区的变异情况。方法从5例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前和治疗12个月的血清标本中，扩增目的片段，阳性结果双酶切后克隆至JM105感受态细胞。每份标本随机挑取20个阳性克隆，以错配聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法检测YMDD基因序列，出现变异者进行双向测序。结果5例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗12个月后，其中2例HBVDNA为阴性，2例HBVDNA转阴后又转阳，测序结果提示出现M5521变异；1例HBVDNA始终阳性，和治疗前一样存在D553G的变异。结论D553G变异可能是慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗无效的原因之一，拉米夫定治疗后出现的乙型肝炎病毒基因组P区YMDD变异是抗病毒药物诱导的结果。     

单碱基延伸法检测乙型肝炎病毒YMDD基序变异

目的 建立一种简便、快速检测乙型肝炎病毒(HBV)P基因区色氨酰-蛋氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰(YMDD)基序变异混合株组成的检测方法.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增含有YMDD基序的聚合酶(P)基因区片段,将PCR产物捕获至链亲合素包被的微孔板,以探针与PCR产物杂交,该探针3'末端位于待检测变异点上游一位碱基;在4个独立的微孔中分别加入4种荧光素标记的双脱氧核苷酸(Fluorescien-12-ddNTP)及Klenow酶进行单碱基延伸反应;酶标抗荧光素抗体结合Fluorescien-12-ddNTP,加底物显色,测定各孔吸光度,根据公式计算野生株及变异株在混合毒株中所占百分比.结果 以野生株和变异株单克隆质粒不同比例混合的标准品,验证本方法可检测混合株中含量少至10%的毒株,模板的适宜浓度范围为100 fg/ml～1 ng/ml.结论 单碱基延伸法是一种简便、快速、灵敏度和特异性较高的点突变检测方法,且可以检测混合株中各成分所占百分比.     

拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶基因G743C和G743A点突变的检测及分析

目的 探讨拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶(HBVP)基因点突变。方法 聚合酶链反应(PCR)扩增拉米夫定耐药患者的HBVP基因，产物经直接测序检测其YMDD变异；同时，用PCR-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)分析测序后的17例YIDD变异样本，先用3对引物扩增HBVP基因，再分别用3个限制性内切酶FokⅠ、SspⅠ、Alw441酶切扩增产物，酶切产物用8．0％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果 拉米夫定耐药患者HBVP基因PCR产物序列分析结果与GenBank的HBV标准株相比，发现16例存在HBVP基因G743C点突变和1例存在G743A点突变。其核苷酸序列由ATG变为ATC和ATA，YMDD基因序列发生变异，即由YMDD变异为YIDD；但是，PCRRFLP不能确定这17例样本存在YIDD变异。结论拉米夫定耐药患者存在HBVP基因G743C和G743A的点突变，同样引起YIDD变异；而PCR—RFLP法不能准确地检测出G743C和G743A的点突变；该发现对HBVP基因YMDD变异检测和临床均有指导意义。     

脂蛋白脂酶Ser447Ter基因变异与冠心病

在人群中筛选冠心病易感性基因对高危人群的识别和冠心病的防治具有重要意义。脂蛋白脂酶(LPL)是脂蛋白代谢的关键酶之一，对动脉粥样硬化具有重要作用。LPL基因Ser447Ter变异与冠心病的关系国外报道不一。基因变异的频度及其与疾病的关系可能因种族而异，目前国内没有这方面的资料，本研究以冠心病患者与性别年龄匹配的对照人群为研究对象。首次观察LPL Ser447T基因变异在人群中的分布，并探讨这一基因多态性与冠心病的关系。     

载脂蛋白B基因结构变异与冠心病和血浆脂质关联程度的研究

目的 研究97例冠心病患者及90例正常人载脂蛋白B基因2个位点的限制酶切片段长度多态性(RFLP)分布情况。方法 应用聚合酶链反应扩增DNA,扩增产物采用限制性内切酶xbal及EcoR1消化。结果 在冠心病组中,xbal和EcoR1酶切位点以X~-和E~+等位基因占绝大多数,其频率为0.959和0.897,而X~+和E~-等位基因较少,其频率为0.103和0.041。冠心病组与对照组比较,TC和TG水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论ApoB基因Xbal变异可能与冠心病发病及血浆脂质水平有一定关联,ApoB基因的X~-X~-基因型变异成X~+X~-可能对冠心病临床表现有一定影响,等位基因X~+和单体型X~+E~+可以成为冠心病遗传标记。     

中国大陆钉螺种群遗传学研究 Ⅳ.钉螺等位基因酶谱

本研究采用水平淀粉凝胶电泳,对中国大陆7个地区钉螺的12个等位基因酶酶谱进行了分析。结果:在17个等位基因位点中10个为无变异的单态位点:Aldh、Ao、G6pd、Gpdh、Hbdh、Ldh、Sdh、Est-2、Est-3和Est-6;7个为变异的多态位点:Est-4、Est-5、Xdh、Mdh、Idh、Got和Ap。在检测的13个酶中,检得6个多态位点酶:EST、XDH、MDH、IDH、GOT和AP,占所测酶数的46.15％,结果提示:7地钉螺间存在着一定的亲缘关系,但其基因水平发生了变异,7个呈多态性的等位基因位点可能为影响中国大陆钉螺遗传变异较为重要的等位基因位点。     

前列环素合酶基因多态性与动脉血栓性疾病

前列环素(PGI2)具有抗血小板聚集、抑制平滑肌细胞增殖和扩张血管的作用,在预防动脉血栓性疾病的发生中具有重要的地位。而前列环素合酶(PGIS)是PGI2合成的限速酶,其基因发生突变可影响其功能,从而进一步影响PGI2的合成而对动脉血栓性疾病的发生具有促进作用,因此PGIS基因被认为是心血管疾病的候选基因。现结合近年文献对PGIS基因变异与动脉血栓性疾病的关系作一综述。     

人胃粘膜幽门螺杆菌的flaA基因的变异

我们对52例胃粘膜活捡标本和18株Hp临床分离株进行Hp特异的16rRNA基因和鞭毛素A基因PCR扩增和PCR-RFLP及PCR-RFLP-SSCP分析，以检测Hp鞭毛索A基因的变异性，进而研究其与Hp致病性的关系。结果对43例Hp( )的flaA基因PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3％)，而PCR-RFLP-SSCP可分37个型(变异检出率为86．0％)，两有非常显性差异。本研究表明，flaA基因变异性极大，PCR-RFLP-SSCP是检测其变异的有效方法。     

5脂氧合酶途径和动脉粥样硬化的研究进展

白三烯是一类重要的炎症介质,由花生四烯酸经过一系列的酶促反应生成,其中5脂氧合酶是关键酶,因此该反应途径称为5脂氧合酶代谢途径。近年来发现5脂氧合酶代谢途径在动脉粥样硬化的炎症反应中起着重要的调节作用。阻断5脂氧合酶代谢途径可以抑制动脉粥样硬化发生和发展。5脂氧合酶代谢途径的基因多态性也与心肌梗死和卒中的发病率密切相关。本文就5脂氧合酶途径和动脉粥样硬化关系的研究进展做一综述。     

中国布鲁杆菌OMP28基因PCR-SSCP多态性分析

目的对布鲁杆菌OMP28基因进行多态性分析,评价其作为基因标识的价值。方法根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术原理,对中国120株布鲁杆菌的OMP28基因进行PCR扩增、酶切、电泳分析和筛选,取不同带型菌株的目的基因进行测序,将结果与Genbank中的布鲁杆菌OMP28序列进行比较。结果 120株布鲁杆菌呈现4种不同图谱(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),仅有3个碱基变异,即Ⅳ型与其他3个型第 304碱基A-G,Ⅱ型与另外3个型第405碱基C-T,Ⅰ与其他3个型第498碱基C-T变异,而且均未改变氨基酸序列。结论布鲁杆菌OMP28基因高度保守,具稳定的抗原特征。     

与糖尿病神经病变相关基因的研究进展

糖尿病神经病变（DN）与多种危险基因有关，已发现DN与醛糖还原酶、对氧磷脂酶基因多态性；一氧化氮合酶（NOS）、有丝分裂原活性蛋白激酶基因表达增加；NOS基因的第7个外显子突变为Asp(894→T）及Na^ /K^ -ATP酶ATP1A1基因的变异。感觉神经元的细胞骨架蛋白质mRNA表达降低等有关，而DN时抗氧化酶的基因表达没有减少，增加神经营养因子的表达可以治疗DN。