珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的观察珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制。方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用电镜观察作用后肝癌细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化。结果与对照组比较,电镜下珠子参组SMMC-7721细胞染色质浓缩,分解成大小不一有膜包绕团块,内含有新月形DNA物质及细胞器,形成凋亡小体;周期分析可见G0/G1期细胞阻滞,阻止了细胞向S期的转换,并引起细胞凋亡,凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P<0.05),增高抑癌基因p53和p21表达(P<0.05)。结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0/G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关。     

唐山地区胃癌患者EB病毒感染与p53基因表达的关系

 目的 探讨胃癌患者癌组织中EB病毒感染与p53表达的关系。方法 原位杂交法检测胃癌患者石蜡标本中EB病毒编码的小RNA（EBER1）； 免疫组化法检测EB病毒阳性胃癌及EB病毒阴性胃癌患者标本中抑癌基因p53的表达状况。结果 217例胃癌患者癌组织标本中检测到23例呈EBER1阳性； EB病毒阳性胃癌中P53蛋白表达的平均面积、平均吸光度、积分吸光度值均显著高于EB病毒阴性胃癌（P＜0.05）。结论 EB病毒感染与癌组织中抑癌基因p53的异常表达密切相关。     

肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系

目的:探讨肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系。方法:利用SP免疫组织化学技术检测55例肝细胞癌(hepatocellulancarcinoma,HCC)及其癌旁肝组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的表达。结果:HCC组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的阳性率和阳性信号强度显著高于癌旁肝组织(P<0.01);在HCC和癌旁肝组织中p42/44MAPK和c-fos蛋白表达强度呈正相关;p-Stat3与c-jun蛋白亦呈正相关;但p42/44MAPK和p-Stat3信号强度之间均无明显相关性。结论:本资料提示Ras/Raf/MAPK和JAKs/Stat3信号级联异常可能在细胞恶性转化中均起重要作用;癌旁组织中呈p42/44MAPK和p-Stat3阳性的肝细胞可能是具有恶性潜能的癌前细胞群,推测MAPK和Stat3激活可能是HCC发生的早期事件。     

TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽粘膜上皮细胞增殖与p16 c-jun基因表达的关系

目的:研究TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖与p16、c-jun基因表达的关系.方法:TgN(p53mt-LMPI)/HT小鼠和野生型C57BL/6J小鼠分别分为诱癌组和对照组,即TgN(p53mt-LMP1)/HT诱癌组(TI)、TgN(p53mt-LMP1)/HT对照组(TC)、C57BL/6J诱癌组(CI)和C57BL/06J对照组(CC)4组,H-E染色法观察各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖特征,比较癌前病变率;免疫组织化学染色法检测各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织中p16、c-jun基因的表达水平.结果:TI组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮细胞非典型性增生明显,TI、TC、CI和CC组小鼠鼻腔和/或鼻咽黏膜上皮癌前病变卒分别为90%、10%、0和0.与TC、CI和CC组相比,TI组鼻腔和鼻咽上皮细胞p16基因表达水平显著降低(P＜0.01)和c-jun基因表达水平显著增高(P8＜0.01);与CC组相比,TC组两基因的表达也具有同样的变化趋势(P＜0.01).结论:TgN(p53mt-LMPI)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖活性增加,二亚硝基哌嗪可提高TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞的增殖活性,而细胞增殖活性增加与p16基因表达水平下调和c-jun基因表达水平上调密切相关.     

p53突变蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与iNOS的关系

目的测定肺癌组织中p53抑癌基因突变蛋白的表达,诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及分布.了解肺癌组织中 p53抑癌基因突变蛋白与iNOS的关系.方法按自身配对原则收集人肺癌癌灶组织,癌灶周围组织及远癌组织各40份,分 别进行免疫组化法测定p53抑癌基因突变蛋白的表达,原位杂交法测定iNOSmRNA的表达及分布.结果1、肺癌组织中 p53抑癌基因突变蛋白的表达阳性.与肺癌的临床分期、组织分型、淋巴结转移未见相关,(均为P＞0.05).2、iNOSmRNA 在肺腺癌中的表达高于鳞癌,(均为P＜0.05).3、肺腺癌组织中iNOS在p53抑癌基因突变蛋白表达阳性组高于p53阴性 组,(P＜0.01).结论肺腺癌中p53抑癌基因突变蛋白阳性组iNOS表达高于p53阴性组的表达,提示NO/iNOS途径可诱 使p53抑癌基因突变.     

p73基因蛋白表达与肺癌临床病理学特征及预后关系的探讨

癌基因的激活和抑癌基因的失活导致了肿瘤的发生和发展,其中p53基因是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,作为第一个被发现的p53基因家族的成员一p73基因,与p53基因共同组成了一个抑癌基因的家族.自1997年被发现以来,倍受研究者的关注.本研究采用免疫组织化学染色方法检测了65例肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中p73基因蛋白的表达,以探讨p73基因与肺癌发生、发展的关系.     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

肝、胆（071425～071461）

071425 抗肝癌重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作有；071426 肝细胞癌中潜伏膜蛋白-1的表达及意义；071427 微囊藻毒素LR促肝癌过程p53、P16基因mRNA的表达；071428 TTV感染及复制与原发性肝癌家庭聚集性关系的研究；071429 肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究……[第一段]     

抑癌基因与胃癌早期诊断

目的:研究71例正常胃粘膜,胃粘膜炎症伴中、重度不典型增生、早期胃癌和进展期胃癌标本,了解肿瘤抑癌基因与胃癌的关系.方法:用免疫组化方法观察p21、p53和p16蛋白表达.结果:p21与p53的上调性阳性表达与不典型增生的程度有关,而P16呈下调性表达改变.结论:p21、p53及p16的表达异常与胃癌发生有关.检测这些指标可作为胃癌癌前病变的显著性标志.     

红毛五加多糖对胃癌细胞的诱导凋亡作用

目的：研究红毛五加多糖对胃癌的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比及基因和细胞因子蛋白含量。结果：该多糖使癌基因bcl-2蛋白表达降低,而使抑癌基因p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1蛋白表达增高。结论：该多糖通过降低原癌基因蛋白表达,增高抑癌基因和细胞因子蛋白表达,从而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

恶性黑色素瘤中C-erbB-2、P53、P16蛋白的表达

目的:探讨恶性黑色素瘤中C蛳erbB蛳2、p53、p16蛋白的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化S蛳P法对14例恶性黑色素瘤和39例色素痣组织中C蛳erbB蛳2、p53、p16蛋白表达进行检测。结果:14例恶性黑色素瘤中C蛳erbB蛳2、p53和p16蛋白的阳性率分别为50 %(7/14)、64 %(9/14)、43 %(6/14)。39例色素痣中C蛳erbB蛳2、p53和p16蛋白的阳性率分别为18 %(7/39)、36 %(14/39)、77 %(30/39)。C蛳erbB蛳2、p53、p16蛋白阳性率与恶性黑色素瘤的发生有密切的关系(P < 0.05)。结论:肿瘤多基因分析比单基因分析有价值。癌基因C蛳erbB蛳2和抑癌基因p53、p16蛋白的表达异常及协同作用在恶性黑色素瘤的发生发展中起重要作用。     

细胞凋亡过程中c-fos、p53和c-myc基因的表达

本文主要研究细胞凋亡过程中c－fos、p53和c－myc等基因的表达。方法：经8－Br－cAMP诱导人食管癌Eca－109细胞调亡，应用原位来交技术对c－fos、p53和c－myc基因的表达进行检测。结果：经过诱导的试验组和不经诱导的对照组c－fos、p53和c－myc基因的表达差异有显著性（P＜0．001）。结论：提示这些基因在细胞凋亡的发生发展过程中起着重要的作用。     

胰腺癌中p21ras、p53蛋白及PCNA的检测和临床意义

 目的　探讨p21ras、p53蛋白和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在胰腺癌发生、发展中的作用和临床意义。方法　应用免疫组化法对30例胰腺癌,3例正常胰腺组织中的ras基因产物p21、p53蛋白和PCNA进行检测,并结合临床资料分析。结果　胰腺癌中p21、p53蛋白表达正相关,阳性表达率分别为75%、53.33%;PCNA阳性表达率为43.39%±17.99%,并随胰腺癌恶性度的增加而增加,与预后、p53表达相关(P<0.05),与淋巴结转移、神经侵润及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论　胰腺癌的发生发展过程是多种癌基因协同作用的结果;PCNA可作为判定胰腺癌恶性程度及预后的一项指标。     

p53和p16及c-erbB-2在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的　研究p5 3、p16、c -erbB -2癌基因表达变化与非小细胞肺癌术后长期生存、短期死亡者的临床病理学特征及预后关系。方法　采用SABC免疫组织化学染色法 ,检测了非小细胞肺癌术后 5年以上生存者及 1年内死亡者的 161例蜡块标本的 p5 3、p16、c -erbB -2基因表达情况。 结果　 3项癌基因在 2组中的表达均有有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;p16和c -erbB -2呈阳性表达多为腺癌组织 ;p16呈阴性表达及 p5 3和c -erbB -2呈阳性表达者 ,肿瘤分化差、临床分期晚、多伴有淋巴结转移 (P <0 .0 5 )。单项 p5 3阳性或c -erbB -2阳性或p16阴性表达者的预后优于其中 2项癌基因联合表达者 ;单项c -erbB -2阳性表达者的预后较p5 3阳性或 p16阴性表达者差 ;3项癌基因共同表达的 19例患者均在 1年内死亡。 结论　p5 3、p16、c -erbB -2癌基因联合检测 ,可有效地判定非小细胞肺癌临床病理学特征及预后 ,明显优于单个癌基因蛋白的检测     

Structure and expression of nuclear oncogenes in multi-stage thyroid tumorigenesis

We have investigated the possibility that structural alterations of the 'nuclear' oncogene family (c-myc, N-myc, L-myc, fos, myb and p53) leading to aberrant expression might, as in several other tumour types, play a role in the multi-stage development of tumorigenesis in the human thyroid follicular cell. Direct analysis of expression by slot and Northern blot RNA hybridisation showed that normal thyroid expresses surprisingly high levels of fos, and to a lesser extent c-myc, c-myc expression was markedly increased in all tumours, both benign and malignant, but no increase was seen in any other nuclear oncogene. fos expression was reduced specifically in one type of malignant tumour-follicular carcinoma-in inverse correlation with differentiation. Southern blot analysis showed no evidence of rearrangement or amplification of c-myc, or of any other 'nuclear' oncogene in any thyroid tumour. We conclude that there is no evidence that a primary abnormality of these genes plays a role in thyroid follicular cell tumorigenesis and suggest that the observed changes in expression can be adequately explained as secondary consequences of the tumour phenotype.     

Charge configurations in oncogene products and transforming proteins

Statistically significant charge clusters are of infrequent occurrence in all kinds of proteins. In the six standard classes of proto-oncogene products, all of the nuclear class contain a significant charge cluster and several, but not all, of the transmembrane class do, whereas significant charge clusters or patterns are not found in protooncogenes of primarily cytoplasmic location, nor in membrane-bound (src-like) proto-oncogenes, nor in those of the ras family. Among nuclear oncogene families, such as myc, jun, fos, myb, or ets-related, and among homologous proteins across species, the significant charge clusters are part of the most conserved region. These gene families generally have similar charge distributions embodying a significant charge cluster, not of an invariant sign, preceded by a substantial uncharged stretch of predominantly polar residues. The nuclear transforming proteins p53 and p68 also contain significant charge clusters together with long uncharged segments, suggestive of a modular structure of these proteins. The transmembrane oncogene c-mas contains a mixed charge cluster and c-fms displays an unusual (0, +)7 pattern, in both cases positioned within their intracellular activating domain. Distinctive charge configurations for excreted proto-oncogenes are of a mixed character. Possible functions, mechanisms, and associated experimental procedures for studying proteins with anomalous charge distributions are discussed.     

Cooperation between Ha-ras and fos or transforming growth factor alpha overcomes a paradoxic tumor-inhibitory effect of p53 loss in transgenic mouse epidermis

To investigate the role of loss of the p53 tumor suppressor gene in skin carcinogenesis, p53 knockout (p53(-/-)) mice were mated with transgenic mice coexpressing v-Ha-ras, v-fos, or human transforming growth factor alpha (TGFalpha) exclusively in the epidermis by using human keratin 1 (HK1)-based vectors (HK1.ras/fos, HK1.ras/alpha, and HK1.fos/alpha). HK1.ras/fos and HK1.ras/alpha mice displayed epidermal hyperplasia and autonomous benign papillomas to an identical degree between p53(+/+) and p53(+/-) genotypes. However, HK1.ras/fos mice with the p53(-/-) genotype were born with papillomatous skin and died soon after birth. HK1.ras/alpha-p53(-/-) mice also exhibited an increased epidermal hyperplasia, and, similar to HK1.ras/alpha mice with p53(+/+) and p53(+/-) genotypes, these mice rapidly developed spontaneous and 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-induced papillomas. These results are in contrast to our previous observation that, HK1.ras, HK1.fos, and HK1.TGFalpha transgenic mice with the p53(-/-) genotype display an unexpected delay in both spontaneous and TPA-promoted papilloma formation compared with mice with p53(+/+) and p53(+/-) genotypes. Taken collectively, our mating experiments between HK1 oncogenic transgenic mice and p53 knockout mice may identify a backup system that effectively compensates for p53 loss. Activation of multiple oncogenes not only partly overcomes such compensation but also synergizes with p53 loss. However, HK1.fos/alpha-p53(-/-) mice failed to exhibit either an increased newborn epidermal hyperplasia or an accelerated spontaneous or TPA-induced papillomas, suggesting that certain combinations of oncogenes, such as with activated Ha-ras, are required for this process. Because neither spontaneous nor TPA-elicited papillomas in p53(-/-) mice progressed to malignancy, additional genetic insults appear to be required for malignant progression.