外源性PTEN增强乏氧诱导胰腺癌细胞系ASPC-1的凋亡

目的 研究外源性PTEN对乏氧胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、血管内皮生长因子（VEGF）和表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达及细胞增殖能力的影响。方法将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞,获得ASPC-1-pEAK8（A-pE）细胞和ASPC-1-pEAK8-FFEN（A-pE-P）细胞,给予乏氧（1％O2）处理,并应用RT-PCR、Western印迹杂交、流式细胞术、成克隆分析及观察裸鼠移植瘤生长等方法进行检测。结果A-pE-P细胞PTEN mRNA及其蛋白表达明显高于ASPC-1细胞和A-pE细胞。与ASPC-1细胞相比,常氧时,A-pE-P细胞VEGF蛋白表达量下降了23．4％,EGFR蛋白表达量无明显变化,细胞克隆形成率降低了28．0％（F=4．283,P〈0．05）,荷瘤裸鼠5周时,A-pE-P细胞组和ASPc-1细胞组瘤结节体积比较,差异有统计学意义（t=4．834,P〈0．01）,A-pE-P细胞组的抑瘤率为42．4％。乏氧时,A-pE-P细胞VEGF蛋白表达量下降了31．4％,EGFR蛋白表达量降低了25．0％,细胞克隆形成率降低了33．2％（F=9．152,P〈0．01）。A-pE-P细胞较ASPC-1细胞G2／M期阻滞明显,乏氧培养8h时可引起细胞大量凋亡。结论外源性PTEN使ASPC-1细胞阻滞在G2／M期,增强乏氧诱导细胞的凋亡,抑制乏氧诱导VEGF、EGFR表达的增加,抑制肿瘤细胞的增殖。     

LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901 细胞的影响

目的:观察应用PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、侵袭及凋亡等方面的影响.方法:应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901,通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素(CyclinD1)的表达情况.噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、侵袭、凋亡等变化.结果:与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达.LY294002组自第2天起生存率明显下降(P<0.05).Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组(81.0±2.65)、DMSO组(81.3±1.52)、LY294002组(44.6±2.52),3组相比较差异具有统计学意义(F=255.1,P=0.000).LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期减少(P<0.05),早期凋亡的细胞数明显增多(F=149.66,P=0.000).结论:LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂,靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达,在体外显著抑制细胞的增殖、侵袭,并促进细胞的凋亡,因此为临床肿瘤防治提供了新思路,针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径.     

肝癌细胞中PI3K信号通路对VEGF表达的影响

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达调控中的作用.方法: 体外培养高转移性人肝癌细胞株HCCLM3,分为对照组、PI3K特异性抑制剂LY294002浓度5μmol/L组,LY294002浓度10μmol/L及20μmol/L组,处理6小时后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测VEGF mRNA表达的变化.结果: LY294002可使肝癌细胞HCCLM3的VEGF mRNA的表达下降,且这种抑制作用随着LY294002浓度增大而增大(P<0.01),呈现剂量移赖性关系.结论: LY294002可以抑制肝癌细胞株HCCLM3中VEGF的表达,肝癌细胞VEGF的表达调控受PI3K信号通路调控.     

miR-182激活PI3K/AKT信号通路促进肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨miR-182通过PI3K/AKT信号通路对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:将体外培养的HepG2细胞分为对照组(未转染)、阴性组(转染阴性对照)、模拟物组(转染miR-182模拟物)和模拟物+抑制剂组(转染miR-182模拟物后,加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-182的表达水平,Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达,采用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果:与对照组相比,模拟物组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数均明显升高,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显上升(P<0.05);而阴性组和对照组细胞相比无显著性差异(P>0.05)。与模拟物组相比,模拟物+抑制剂组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数明显降低,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显下降(P<0.05)。结论:miR-182可通过激活PI3K/AKT信号通路上调MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

LPA经PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡

 目的 研究PI3K/AKT信号转导通路对LPA保护顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用的影响。 方法 MTT法检测LPA和LY294002对DDP作用后的SKOV3细胞增殖活性的影响;Hoechst33258荧光染色 观察凋亡细胞;FCM分析细胞凋 亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带;Western blot检测LPA、LY294002对磷酸 化Akt蛋白表达的影响。 结果 LPA+LY294002+DDP组对SKOV3细胞增殖的抑制作用、凋亡小体的产生及细胞凋亡率高于 LPA+DDP组(P<0.05),而与 LY294002+DDP组差异无统计学意义, DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段, LPA和LY294002同时作用可出现DNA断裂梯形条带。Western blot结果示LPA作用后磷酸化Akt 蛋白表达升高,而LY294002作用后,磷酸化Akt蛋白表达明显下降。 结论 LPA通过激活PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

放射对乏氧胃癌细胞PTEN基因和VEGF等蛋白表达的影响

越来越多的证据表明乏氧可以诱导血管内皮细胞生长因子（VEGF）、表皮生长因子受体（EGFR）的表达，VEGF、EGFR与肿瘤的放射敏感性关系密切。笔者拟通过观察胃癌细胞系MGC803乏氧不同时间后细胞周期、抑癌基因PTEN mRNA及VEGF、EGFR蛋白表达的变化及乏氧与乏氧照射后细胞存活情况，探讨乏氧时间对细胞放射后存活的影响。     

HER2/neu过表达通过PI3K/Akt通路对乳腺癌细胞MCF7中p53基因表达及细胞生长和放疗敏感性的影响

目的 研究HER2／neu基因过表达通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路对乳腺癌细胞MCF7野生型p53基因表达、细胞增殖及对γ射线照射敏感性的影响。方法 以脂质体介导的HER2／neu基因转染MCF7细胞,用G418筛选阳性克隆。通过Western blot鉴定HER2／neu蛋白的表达,并检测p53、信号转导分子Akt和p-Akt蛋白含量的变化及PI3K通路抑制剂LY294002对上述蛋白表达水平的影响。以MTT法检测细胞增殖以及细胞对γ射线照射的敏感性。结果 共获得18个稳定转染HER2／neu基因的阳性克隆,其中1个克隆有HER2／neu基因过表达。过表达HER2／neu的MCF7细胞p-Akt蛋白含量升高,p53蛋白含量低于对照组细胞,LY294002能够抑制p-Akt蛋白和p53蛋白的变化。同时,过表达HER2／neu基因的MCF7细胞生长速度高于对照组细胞,对γ射线照射治疗的敏感性降低,而LY294002能够抑制细胞生长并增强放射治疗的敏感性。结论 MCF7细胞中HER2／neu基因的过表达,能够通过激活PI3K通路导致野生型p53蛋白含量减少、细胞增殖加快及放疗的敏感性降低,这可能是某些p53蛋白为野生型的肿瘤患者对治疗产生抗性的原因。     

LY294002对LK2和H460肺肿瘤细胞系细胞增殖及SKP2和p27表达的影响

目的:探讨PI3K抑制剂LY294002对肺肿瘤细胞增殖影响及其分子机制。方法:培养肺癌细胞系LK2和H460,LY294002阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;FCM分析细胞周期变化;实时RT-PCR、蛋白印迹法分别观察PI3K信号下游蛋白SKP2、p27mRNA及蛋白表达变化。结果:与对照组相比,处理组细胞生长速率受抑制,细胞周期阻滞于G1期。实时RT-PCR及蛋白印迹结果显示,LY294002处理后SKP2mRNA、蛋白表达水平均降低,2种细胞中基因降低量分别为42%和41%,蛋白降低量为65%和55%,p27mRNA表达水平增加了49%和36%,但蛋白表达水平不变。结论:肺肿瘤细胞LK2和H460中PI3K通路通过SKP2,但并不经由p27调节细胞周期,调控细胞增殖。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中HIF-1α表达和细胞生长的影响

目的:探讨低氧环境下磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositide3kinase,PI3K)抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中PI3K/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)信号通路下游缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和蛋白的表达以及细胞生长、细胞凋亡、细胞黏附和侵袭能力的影响。方法:应用LY294002作用于低氧环境中的人胶质瘤U251细胞(低氧+LY294002组),以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组)。CCK-8试剂盒检测U251细胞生长,FCM检测细胞凋亡百分比,黏附实验检测细胞黏附能力,侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测p-Akt蛋白的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法检测HIF-1αmRNA及蛋白的表达。结果:LY294002能明显抑制p-Akt蛋白以及HIF-1αmRNA和蛋白的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。LY294002能抑制低氧环境中U251细胞的增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显(P<0.05)。低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P<0.01),而细胞黏附和侵袭能力明显低于低氧组(P<0.01)。结论:LY294002能抑制低氧环境中PI3K/Akt信号通路下游HIF-1αmRNA及蛋白的表达,抑制人胶质瘤U251细胞的生长,促进细胞凋亡,并抑制细胞黏附和侵袭能力。     

介入动脉化疗加适形放射治疗胰腺癌21例临床分析

对 2 1例胰腺癌先行介入动脉化疗 ,2周后行适形放射治疗 ,每次 5～ 6Gy ,7～ 8次。获有效率 (CR PR)为71 4% ( 15 /2 1) ,1、2年生存率为 78 6% ( 11/14 )和 3 0 % ( 3 /10 )。初步研究结果提示 ,介入动脉化疗加适形放射治疗是一种对胰腺癌行之有效的方法 ,有必要对其作进一步研究。     

经动脉灌注吉西他滨和5-氟尿嘧啶联合热疗治疗中晚期胰腺癌的临床分析

目的：探讨经动脉灌注吉西他滨（Gemcitabine，商品名健择）和5-氟尿嘧啶（5-FU）联合内生场热疗治疗中晚期胰腺癌的临床疗效。方法：18例中晚期胰腺癌患者，采用改良Seldinger技术，动脉插管后选择性置管于胰腺癌的供血动脉，灌注吉西他滨1000mg／m^2；之后行内生场热疗，热疗同时经动脉留置导管灌注卡铂400mg／m^2；热疗后，用输液泵经动脉留置管灌注5-FU 1g，连用2d。随访观察客观疗效、临床受益反应、患者的生存期及不良反应等。结果：18例患者的客观缓解率为22．20％，临床受益反应为44．40％，Kaplan-Meier法计算6、9和12个月的累积生存率分别为83．33％、66．67％和33．33％，频数分布法计算中位生存期为11个月。结论：经动脉灌注吉西他滨和5-FU联合内生场热疗治疗中晚期胰腺癌可获得较好的临床疗效，患者耐受良好，值得进一步研究。     

健择联合顺铂方案治疗晚期胰腺癌的疗效观察

目的 :观察GP (健择 DDP)方案治疗晚期胰腺癌的近期疗效与不良反应。方法 :将 2 0例晚期胰腺癌给予GP方案化疗 2个周期 ,按WHO标准评定疗效和不良反应。结果 :有效率 (CR PR)为35 % ,不良反应主要为骨髓抑制和胃肠道反应。结论 :健择加顺铂是治疗晚期胰腺癌的一种安全有效的化疗方案。     

吉西他滨固定剂量率输注治疗胰腺癌的研究进展

目的：总结国内外吉西他滨固定剂量率（FDR）输注治疗胰腺癌的研究进展,探讨其临床应用前景。方法：检索数据库PubMed、CNKI、万方及中国生物医学文献数据库2000—01—2011—12文献,以“吉西他滨、固定剂量率、胰腺癌”等为关键词,不限定发表时间和语言;纳入研究FDR吉西他滨的基础研究、临床试验、综述和meta分析,共检索到文献253篇。符合纳入标准的文献26篇。纳入标准：1）：比较吉西他滨FDR输注与标准输注的临床研究和Meta分析;2）：吉西他滨FDR输注药理学的研究。结果：药理学研究已证明FDR吉西他滨可使细胞内有活性的吉西他滨三磷酸盐达到最佳的蓄积速度。随机对照试验发现,相较于标准输注,FDR可以改善胰腺癌患者的生存结果,但血液系统毒性反应发生率较高。近年来的一些I搭床试验中,FDR吉西他滨单药或者联合其他化疗药物均有较好的生存结果,而且使用较小剂量时血液系统毒性也相应减少。结论：FDR吉西他滨可以提高胰腺癌患者的生存期,同时血液系统毒性反应发生率较高。     

中药加化疗治疗局部晚期胰腺癌的疗效分析

观察中医药加由健择和顺铂组成的化疗方案时局部晚期胰腺癌的疗效。遵照患者意愿,有选择地将37例局部晚期胰腺癌患者分为治疗组(中西医结合组)和对照组(单纯化疗组)。治疗组化疗期间和化疗后继续服中药巩固疗效。结果两组近期疗效差异无统计学意义,临床获益率和远期疗效治疗组明显优于对照组,P<0．01。初步研究结果提示,中医药配合化疗可提高局部晚期胰腺癌的临床获益率,延长生存期。     

人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及耐药特性的检测

目的为揭示吉西他滨在胰腺癌中引起耐药的机制,建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系并对其细胞生物学特性进行了研究。方法逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,在人胰腺癌细胞系SW1990中建立了对吉西他滨耐药的细胞系SW1990-GEM。采用四氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算SW1990和SW1990-GEM的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较SW1990和SW1990-GEM的生长曲线并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测SW1990-GEM对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果SW1990和SW1990-GEM的IC50分别为(0.428±0.069)μmol/L和(230.53±13.12)μmol/L,RI为537.45(P<0.001)。根据生长曲线计算出SW1990和SW1990-GEM的倍增时间为22.8小时和35.8小时。交叉耐药实验表明,SW1990-GEM对5-FU、表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇、泰素帝、长春新碱和依托泊苷产生交叉耐药,对顺铂、阿糖胞苷无交叉耐药。结论成功建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系SW1990-GEM,耐药性能明显、稳定。SW1990-GEM对5-FU、表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇、泰素帝、长春新碱和依托泊苷产生交叉耐药,对顺铂、阿糖胞苷无交叉耐药。     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌的临床观察

为观察吉西他滨（GEM）联合奥沙利铂（OXA）治疗晚期胰腺癌的有效性和安全性。对30例晚期胰腺癌患者,应用GEM1000mg/m2,静脉滴入30min,d1、d8;OXA100mg/m2,静脉滴入2h,d1,21d重复。至少接受2个周期的化疗。结果30例均可评价疗效,客观有效率20.00%,临床受益疗效分别为疼痛缓解率53.33%（16/30）,行为状态改善率45.33%（13/30）,体质量状态改善率36.33%（10/30）。主要不良反应为骨髓抑制、外周神经毒性及胃肠道反应,无治疗相关性死亡。初步研究结果显示,GEM联合OXA组成的GEMOX方案治疗晚期胰腺癌近期有效率较高,毒性较低,值得临床推广应用。     

胰腺神经内分泌癌的诊断及外科治疗（附10例临床报告）

目的探讨胰腺神经内分泌癌的诊断和外科治疗方法。方法回顾性分析外科手术治疗的10例胰腺神经内分泌癌的临床病理资料。结果本组10例均经手术病理证实,无1例通过术前检查诊断。1例于肿瘤切除术后30月死亡;术后迄今9例生存;2例未能切除肿瘤经术中放疗和化疗,生存11、17月。肿瘤切除组生存〉20月2例,34月1例,〉40月2例,50月1例,66月1例。结论胰腺神经内分泌癌术前诊断困难,对疑似病例应进行激素检测。胰腺神经内分泌癌应积极手术治疗,无法手术切除应积极进行化疗、化疗栓塞以延长生存时间。     

5-FU联合与5-FU单药治疗晚期胰腺癌比较的Meta分析

目的:通过Meta分析,探讨5FU联合化疗和5FU单药化疗在治疗晚期胰腺癌患者中的意义。方法:通过MEDLINE、EMBASE等数据库检索国内外已发表和未发表的相关文献。选择治疗组为5FU联合化疗,对照组为5FU单药化疗的晚期胰腺癌的随机对照试验(RCT)。由两位评价者分别按上述检索策略收集资料,按选择标准入选,主要对ORR、半年PFS、1年OS和毒副反应进行Meta分析。结果:在治疗晚期胰腺癌方面,5FU联合化疗与5FU单药化疗比较,ORR提高7%(P=0.0050),半年PFS(P=0.1800)和1年OS(P=0.7000)无差异,但毒副反应增加,3/4度中性粒细胞减少的概率增加1.13倍(RR=2.13,P<0.0001)、血小板减少的概率增加3.46倍(RR=4.46,P<0.0001)、呕吐的概率增加0.68倍(RR=1.68,P=0.0030)明显高于5FU单药化疗。结论:5FU联合化疗不适合用于晚期胰腺癌的治疗。     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌疗效观察

目的:观察GEMOX联合方案治疗晚期胰腺癌的疗效和毒副反应。方法:19例确诊晚期胰腺癌患者接受至少2个周期的GEMOX联合方案化疗,吉西他滨1000mg/m2,静脉滴入,d1、d8;奥沙利铂130mg/m2,静脉滴入,d1。每21d重复。结果:1例CR,5例PR,8例SD,5例PD,总有效率为31.6%(6/19),毒副反应可以耐受,没有化疗相关的死亡。结论:吉西他滨加奥沙利铂联合化疗是治疗晚期胰腺癌安全有效的方案,可以使部分患者得到临床受益。但需要有Ⅲ期的随机临床试验与吉西他滨单药化疗进行比较,以明确此联合方案的优势。