组织激肽释放酶家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统及其重要应用

目前已明确,人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成,都定位于19q13.3～13.4,在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本文总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统的研究近况,并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。     

人组织激肽释放酶

人组织激肽释放酶是一个多基因家族 ,由 15个具有高度同源性的等位基因组成。组织激肽释放酶可在许多组织中表达。在肿瘤细胞中 ,多种组织激肽释放酶受类固醇激素的调节。人类多种疾病中均有组织激肽释放酶表达的改变     

人类组织激肽释放酶家族研究进展

人类组织激肽释放酶家族由 15个成员组成 ,它们位于同一染色体 (19q13.4 )上 ,在核苷酸及蛋白水平上具有很大的同源性 .研究发现它们与多种疾病的发病有关 ,尤其是前列腺癌等恶性肿瘤。     

组织型激肽释放酶基因多态性与长沙地区汉族人群脑出血的关联研究

目的 分析长沙地区汉族人群脑出血与组织型激肽释放酶(kallikrein 1,KLK1)基因多态性的关系.方法 收集273例散发性脑出血患者和140名正常对照者的外周血标本.采用多重单碱基延伸单核苷酸多态分型技术和DNA测序法检测KLK1基因rs5516及rs5517多态性位点在两组人群中的分布.结果 (1)脑出血组及对照组KLK1基因rs5516多态和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);脑出血组组织型KLK1基因rs5517多态A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05).(2)对照组rs5517多态AA及GA基因型携带者舒张压水平显著高于GG基因型携带者(P<0.05);而rs5516位点各基因型亚组间血压水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 组织型激肽释放酶基因rs5516多态性与脑出血无关,而组织型激肽释放酶基因rs5517多态性与脑出血存在关联,可能通过影响血压水平而参与脑出血的发生发展.     

胰激肽释放酶对脑缺血沙土鼠软脑膜微血管血流量的影响

胰激肽释放酶对脑缺血沙土鼠软脑膜微血管血流量的影响薛全福１吴云清１张宏１斯勤１王耀芳２蒋建平胰激肽释放酶（ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＫａｌｉｋｒｅｉｎ，ＰＫ）是一种蛋白水解酶，在体内作用于激肽原，释放出激肽而发挥作用。在国内外已取得良好的临床效果，并已用于...     

人组织激肽释放酶6的原核表达载体的构建及表达

目的：构建人组织激肽释放酶6原核表达系统。方法：采用RT-PCR技术从人乳腺癌组织中扩增出KLK6基因片段,克隆至原核表达载体pET28b中,经酶切和序列测定后,转化至E.coli BL21,IPTG进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化,其纯化产物进行SDS-PAGE和Western-blot检测。结果：pET28b-KLK6原核表达载体构建成功,经IPTG诱导高效表达hK6蛋白,纯化后获得大量高纯度蛋白。结论：成功构建了KLK6的原核表达系统并在E.coli BL21中高效表达,获得高纯度的hK6融合蛋白。     

激肽释放酶与激肽体系

哺乳类动物的血浆和组织中都存在着激肽体系,它包括凝血因子Ⅻ(仅血浆体系才有)、前激肤释放酶、激肤释放酶、激肤释放酶抑制剂、激肤原、激欣降解酶等等.     

组织激肽释放酶8在神经系统疾病中作用的研究进展

组织激肽释放酶8(KLK8)与中枢神经系统的联系极为紧密,通过改变突触间的黏附关系和细胞外基质分子从而改变突触形态,调节突触可塑性,最终参与多种神经系统疾病的病理过程。本文针对KLK8的生理特性,对其在神经系统疾病如情绪障碍、阿尔茨海默病、癫痫、多发性硬化中的作用与发病机制进行综述。期待能够为神经系统疾病诊断和预后提供理论依据,为此类疾病的研究提供方向。     

检测组织激肽释放酶基因寡核苷酸多态性方法的建立

目的：检测组织激肽释放酶启动子区寡核苷酸多态性，为开展基因诊断高血压研究奠定基础。方法：人外周静脉抗凝血提取基因组DNA，PCR扩增目标启动子片段，ASO(allele-specific oligonucleotide)斑点杂交检测基因型，并与测序法比较了解启动于等位基因多态性。结果：有4例杂交结果阳性，与测序结果吻合。结论：应用ASO斑点杂交技术检测该寡核苷酸多态性与测序法比较具有简便，快速，价廉，特异性高等优点，适于大规模人群筛查，是一种值得推广的研究方法。     

前列腺癌组织中人腺体激肽释放酶2基因表达值与Gleason评分的相关性分析

目的探讨人腺体激肽释放酶(hK)2基因表达值与前列腺癌的Gleason评分的相关性及临床意义.方法运用实时荧光定量(FQ)PCR方法检测40例已知Gleason评分前列腺癌病理组织中hK2的基因表达值.结果前列腺癌组织中hK2基因表达值在不同的Gleason评分中有差异,随Gleason评分值升高而升高.结论前列腺癌组织中hK2基因表达值与Gleason评分呈正相关;hK2有望成为前列腺癌早期诊断,恶性程度评估以及预后判断的重要指标.     

NES1基因的研究进展

NES1基因(normal epithelial cell specific-1)又称作人组织激肽释放酶10(kallilkrein10,KLK10),属于人类组织激肽释放酶家族的一员。NES1基因位于19 q13．3,编码分泌性丝氨酸蛋白酶(hk10)。NES1在许多人体正常组织中表达,但在肿瘤组织中表达下降或不表达。NES1基因为一种近年来发现的新型抑癌基因,由于其表达下降或缺失与肿瘤的发生发展密切相关,NES1基因第三外显子高甲基化是基因沉默的主要机制。NES1基因的表达和其DNA的高甲基化能否作为肿瘤的诊断和预后的分子生物学标志,近年来越来越成为国内外研究的热点。     

组织激肽释放酶与缺血性脑卒中患者预后的相关性研究

目的:探讨组织激肽释放酶(TK)与缺血性脑卒中(CIS)患者短期预后的关系.方法:采用酶联免疫吸附法检测280例CIS患者(试验组)和50例体检健康者(对照组)血浆TK,并对CIS患者进行神经功能缺损程度评分和牛津残障评分,探讨TK与其相关性.结果:①CIS患者急性期和恢复期血浆TK分别为(0.171±0.031)mg/L和(0.193±0.036)mg/L,均低于对照组(0.251±0.043)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05);②CIS患者急性期神经功能缺损评分(22.86±3.21)显著高于恢复期(13.12±1.45),差异有统计学意义(P<0.05);③CIS患者急性期和恢复期血浆TK水平与神经功能缺损评分均显著负相关(r分别为-0.582和-0.473,均P<0.05);④预后良好组急性期和恢复期血浆TK水平分别为(0.176±0.036)、(0.198±0.040)mg/L,均相应高于对照组急性期(0.159±0.023)和恢复期(0.184±0.027)mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:TK水平下降预示CIS患者预后不良.     

人类腺体激肽释放酶2(hK2)的研究进展

前列腺癌是男性常见疾病,前列腺特异抗原(PSA)是当今泌尿外科中最重要的肿瘤标志物,它在前列腺癌的诊断和治疗中得到了广泛的应用[1],但PSA在诊断灰区4ng/mL～10ng/mL的特异性不高,不能完全区别前列腺癌与良性前列腺增生.近年来大量研究证实,人类腺体激肽释放酶2(hK2)能改进前列腺癌早期诊断的特异性.由于测定方法的不断改进,对hK2的认识也逐渐清晰.现将近年来对hK2的研究综述如下:     

组织激肽释放酶1转染骨髓间充质干细胞的病毒感染复数选择

背景：血管舒缓素即组织激肽释放酶1,是组织激肽释放酶-激肽系统重要组成部分之一。有研究表明血管舒缓素通过促进血管新生,抑制心肌炎症产生等发挥其对心血管系统的保护作用,但并未从干细胞诱导分化方面进行探讨。 目的：实验利用已构建的腺病毒载体,将其携带的血管舒缓素基因转染到大鼠骨髓间充质干细胞上,观察其是否成功转染及转染率如何。 方法：以腺病毒作为载体,将目的基因血管舒缓素转染到大鼠骨髓间充质干细胞上,并采用荧光显微镜、四甲基偶氮唑盐法和流式细胞技术观察病毒对细胞的转染效果,以确定最佳的病毒感染复数。 结果与结论：荧光显微镜下观察到腺病毒携带的血管舒缓素目的基因成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上;流式细胞仪结果显示转染率跟病毒感染复数值的大小有关系,当病毒感染复数为150时,转染率为80.8%;四甲基偶氮唑盐法结果提示,病毒感染复数为200时,细胞生长受到明显的抑制。结果证实,腺病毒介导的血管舒缓素能成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上,且最佳的病毒感染复数为150。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人组织激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及机制

目的：探讨人组织激肽释放酶（HK）基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及其机制。方法:高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型。以重组腺相关病毒为载体介导HK基因（HK组）或对照基因LacZ（LacZ组）在糖尿病大鼠体内表达，观察实验动物血压变化及离体主动脉对乙酰胆碱（Ach）依赖性血管舒张反应和一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、内皮素受体A（ETA-R）表达。 结果:(1) HK组第2周开始出现血压下降，并一直持续到实验结束（12周时），而LacZ组血压无明显下降。(2) LacZ组离体主动脉对乙酰胆碱（Ach）依赖性血管舒张反应明显低于HK组。(3) HK组大鼠主动脉NO2-/NO3-浓度明显高于LacZ组，而ET-1和ETA-R mRNA明显低于LacZ组。 结论:重组腺相关病毒介导HK基因表达明显降低2型糖尿病大鼠血压，改善内皮依赖性血管舒张功能，原因可能与增加动脉NO释放，减少ET-1和ETA-R的表达有关。     

血液激肽释放酶－激肽系统在丹毒的发病机理中起作用

血液激肽释放酶－激肽系统在丹毒的发病机理中起作用［俄］／ЛевинЛД…／／КлинМед．－１９９６，７４（２）．－６３检查丹毒患者１１１例，男６７例，女４４例，其中５５．９％为初发丹毒，３２．４％为复发丹毒，１１．７％经常复发。５３．２％为红斑...     

天花粉蛋白及其片段对激肽系统的激活作用

本研究探讨了天花粉蛋白及其裂解片段(CBTf_1,CBTf_2)对人体激肽系统的作用。结果显示:天花粉蛋白对激肽系统有激活作用,实验组激肽释放酶活力单位为190±14mμ/ml,对照组为149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf_1同样可以激活激肽系统,而CBTf_2对激肽系统无影响。天花粉蛋白引起临床过敏反应及类过敏反应可能与激肽系统的激活有关。此外,作者还初步探讨了天花粉蛋白激活激肽系统的分子基础。     

人组织激肽释放酶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 制备人组织激肽释放酶(human tissue kallikrein,HK)单克隆抗体(McAb),并研制检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.方法 以一段HK特异多肽和血蓝蛋白(KLH)的耦联物作为抗原免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗HK的单克隆抗体.然后建立快速检测HK含量的间接竞争ELISA试剂盒.结果 获得了8株可分泌抗HK的杂交瘤细胞株,其产生的抗体效价为1:25 600;经1:1600倍稀释后的竞争抑制率为0.88;经纯化后的纯度为100%,其标准曲线对线良好(r=0.990).结论 成功制备了高效价、高特异性和高纯度的抗HK的单克隆抗体.同时建立了一种可以快速检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.

Abstract：

Objective To prepare monoclonal antibody(McAb) against human tissue kallikrein (HK) and develop an ELISA kit allows for the in vitro quantitative determination of human tissue kallikrein in urine. Methods To generate a monoclonal antibody specific for TK, the synthetic TK peptide consisting of 12 amine acids(12P), was fused to keyhole limpet hemocyanin(KLH) and used for immunization. Using hybridoma screening, monoclonal secreting cell lines were identified and used to generate ascites in BALB/c mouse. Antibody was purified by affinity column chromatography. 12% SDS-PAGE and Western blot were used to visualize the purified antibody. This kit employs indirect competitive ELISA technique and BiotinAvidin System. 12P was fused to bovine serum albumin(BSA) and has been pre-coated onto a microplate at first. Standards and samples were added to the appropriate microplate wells with a biotin-conjugated McAb croplate well. A TMB substrate solution is added to each well. The enzyme-substrate reaction is terminating by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of tissue kallikrein in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Results 8 hybridoma cell lines secreting mAbs special to HK,SDS-PAGE and Western blot demonstrated successful preparing and purification of McAb( 100% ). The linearity of this ELISA kit is demonstrated(r =0. 990). The range of detection of the assay is 0.008 μg/ml to 0. 5 μg/ml. The assay remained stable, with no change in the values measured, over five cycles of freezing and thawing. Conclusion 8 McAbs against HK have been prepared successfully and possess high titer and specificity. The development of an ELISA kit for detecting HK can meet the needs of detection of HK in urine samples.     

人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达。采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移。结果:(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20-100MOI)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5d时达高峰,抑制率为35.2%。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P0.01),而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140不影响该抑制作用。结论:hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,主要由缓激肽B2受体介导的,通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMCSHR迁移效应可能不通过B2受体。     

异丙肾上腺素性心肌梗塞血浆前激肽释放酶和抗凝血酶Ⅲ的动态变化

本实验动态观察了异丙肾上腺素性心肌梗塞大鼠血浆前激肽释放酶(PKA)和抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的变化,并探讨了它们之间及其与心肌缺血、梗塞间的关系。结果发现,首次皮下注射异丙肾上腺素后4小时,PKA已显著降低(P<0.05),AT-Ⅲ也有降低趋势;24小时两者均显著降低(P<0.01),且两者间呈正相关(r=0.59,P<0.05);48小时AT-Ⅲ几乎恢复到正常水平,PKA则仍显著降低;24小时PKA与血清谷草转氨酶活性及心电图Ⅱ导联J/R比值均呈负相关(r=-0.60,-0.78;P<0.05,0.01)。提示内源性凝血系统的激活在异丙肾上腺素导致大鼠心肌梗塞过程中可能具有重要作用,心肌梗塞后血浆AT-Ⅲ的降低主要与内源性凝血系统的激活有关。