新风胶囊通过抑制miR-155/SOCS1/NF-κB通路降低干燥综合征患者血液高凝状态

目的探讨新风胶囊(XFC)改善干燥综合征(SS)患者高凝状态与miR-155/细胞因子信号传送阻抑物(SOCS1)/核因子κB(NF-κB)信号转导通路的关系。方法将66例SS患者随机分为XFC治疗组和硫酸羟氯喹(HCQ)治疗对照组各33例,分别予XFC及HCQ治疗。另选20名健康者作为正常对照组。全自动凝血仪测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIG)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D);ELISA检测外周血血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、P50、P65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)水平;同时采用实时荧光定量PCR检测p65、p50、IκBαmRNA水平;一步法荧光定量PCR反应测定miR-155含量;Western blot法检测P65、P50、SOCS1蛋白水平;魏氏法测定血沉(ESR);全自动生化分析仪测定超敏C反应蛋白(hs-CRP)。结果与NC组比较,SS患者凝血参数D-D、FIB明显升高;SS患者外周血miR-155、IL-1β、TNF-α、P50、P65、IκBα及炎症指标hs-CRP、ESR水平明显升高;IL-4、IL-10水平明显降低;凝血参数与细胞因子、NF-κB信号转导通路及炎症指标明显相关。药物干预后,两组凝血参数和相关实验室指标均有部分改善;与对照组比较,XFC组有效率显著高于HCQ组,且在降低FIB、D-D、miR-155、TNF-α、IL-1β、P50、P65、ESR、hs-CRP水平,增加SOCS1,IL-4、IL-10水平方面明显优于HCQ组。结论 XFC能有效降低SS患者血液高凝状态,其机制与抑制miR-155/SOCS1/NF-κB信号通路有关。     

类风湿性关节炎患者高凝血状态与核因子κB活化及致炎因子增加有关

目的基于核因子κB(NF-κB)信号转导通路探讨类风湿性关节炎(RA)患者高凝血状态的机制。方法选取RA患者35例,健康志愿者20例。ELISA检测两组血清中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、IL-4、IL-17、NF-κB激活子1(Act1)、p50、p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、血小板激活因子(PAF)、PAF-乙酰水解酶(PAF-AH)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,全自动血细胞分析仪检测血小板(PLT)数量,魏氏法检测血沉(ESR),全自动生化仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF),全自动凝血仪检测D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FBG)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)水平;同时半定量反转录PCR检测Act1、p65、p50、IκBα、IκB激酶α(IKKα)mRNA水平,Western blot法检测p65、p50、IκBα蛋白水平。采用Spearman分析RA患者外周血中凝血纤溶指标与细胞因子、NF-κB、活动性指标以及临床症状体征之间的相关性。结果与正常组相比,RA患者外周血中D-D、FBG、PLT明显升高,TT缩短,APTT和PT无明显改变;RA患者血清IL-4、IL-10、PAF-AH的水平明显降低,IL-6、IL-17、Act1、p50、p65、IκBα、IKKα,PAF明显升高;相关性分析显示,RA患者外周血中凝血纤溶指标与细胞因子、NF-κB、活动性指标以及临床症状体征均明显相关。结论 RA患者体内普遍存在高凝状态,并与炎性因子、活动性指标及NF-κB异常活化密切相关。     

基于NF-κB信号通路的变化探讨新风胶囊改善骨关节炎患者高凝状态的机制

目的:探讨骨关节炎(OA)患者的高凝状态与核因子-κB(NF-κB)通路的活化及致炎/抑炎细胞因子之间的关系及新风胶囊(XinFeng capsule,XFC)对其影响。方法:将56例OA患者按随机数字表法分为两组:XFC组(28例)和氨基葡萄糖(GS)组(28例)。两组均治疗3个月。用酶联免疫吸附法检测两组血清中的NF-κB信号通路指标[p50、p65、转化生长因子激酶1(TAK1)、核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)]及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、IL-10、血小板活化因子(PAF)的含量,并测定凝血指标、实验室指标的水平,观察两组之间的变化;采用OA症状积分量表、OA严重程度指数(Lequesne MG)、国际普适生活质量量表(SF-36)及视觉模拟评分法(VAS)评定疗效;并进行相关性分析。结果:与治疗前相比,2组治疗后PLT、FIB、D-D、PAF、p50、p65、TAK1、IL-1、TNF-α、hs-CRP、ESR、症状量化积分、Lequesne MG、VAS积分明显升高(P0.01),APTT、PT、PAF-AH、IL-10、SF-36各维度积分显著降低(P0.01)。且在降低PLT、FIB、TNF-α、p65、TAK1、hs-CRP、ESR、症状量化积分、VAS积分,升高PT、SF-36部分维度积分等方面,XFC组明显优于GS组(P0.05,P0.01);Pearson相关分析结果显示:凝血指标PLT、FIB、D-D、PAF与p50、p65、TAK1、IL-1、TNF-α、hs-CRP、ESR、IgG、Lequesne MG、症状量化积分、VAS积分表达成正相关,与IL-10、SF-36各维度积分成负相关(P0.05或P0.01)。PT与IL-10、GH、PF成正相关,与p50、p65、TAK1、IL-1、TNF-α、hs-CRP、ESR、IgG、症状量化积分、VAS积分成负相关(P0.05或P0.01)。结论:XFC可能通过抑制NF-κB信号通路,上调IL-10水平,下调IL-1、TNF-α、p50、p65、TAK1等水平的表达,降低异常的炎症免疫反应,从而延缓及抑制骨关节炎高凝状态的产生,减少关节病变,减轻关节疼痛及僵硬症状,最终改善患者的生活质量。     

miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法 采用人SH-SY5Y细胞，设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达，Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p3...     

新风胶囊对干燥综合征患者高凝状态的改善作用及其对细胞因子NF-κB信号通路的影响

目的观察干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)患者凝血参数及细胞因子、NF-кB信号通路蛋白、实验室指标的变化,探讨新风胶囊(Xinfeng Capsule,XFC)改善SS患者高凝状态的机制。方法将66例SS患者随机分为研究组和对照组各33例,分别予XFC和硫酸羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)治疗。另选20名健康者作为正常对照组。酶联免疫吸附法检测IL-4、IL-1β、TNF-α、IL-10、p65、p50、IκBα;实时荧光定量检测p65、p50、IκBαm RNA表达量,免疫印迹法检测p65、p50蛋白表达;并测定凝血指标及相关实验室指标。结果与NC组比较,SS组D-D、FIB明显升高,唾液流率、泪膜破裂时间及IL-4、IL-10表达明显降低,角膜染色评分及IL-1β、TNF-α、P50、P65、IκBα、hs-CRP、ESR显著升高(P0.05或P0.01);相关性显示SS患者的凝血指标与细胞因子、NF-κB通路以及临床症状体征、疾病活动性指标等呈明显相关性;药物干预后,2组凝血参数、临床症状和实验室指标均有所改善;与HCQ组比较,XFC组有效率和总有效率显著高于HCQ组,且在改善患者静态唾液流率、泪膜破裂时间、双眼染色评分,降低FIB、D-D、P50、P65,ESR、Hs-CRP水平,上调TNF-α、IL-1β,下调IL-4、IL-10方面明显优于HCQ组(P0.05或P0.01)。结论 XFC可通过平衡细胞因子的表达,抑制NF-κB信号通路的活化,降低对血管内皮细胞的损伤,从而改善SS患者高凝状态。     

新风胶囊通过调节NF-κB通路改善类风湿关节炎患者高凝状态

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者的高凝状态与核因子-κB通路的活化及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将60例RA患者随机等分为XFC组(3粒/次,每日3次)和来氟米特(LEF)组(1片/次,每日1次),连续治疗3个月。20例健康体检者为对照组。采用ELISA法检测2组血清中IL-10、IL-6、IL-17、Act1、p50、p65、IκBα、血小板活化因子(PAF)、血小板活化因子-乙酰水解酶(PAF-AH)、CCP水平,采用日本Sysmex XT-2000i全自动血细胞分析仪检测血小板(PLT),采用魏氏法检测血沉(ESR),采用日本HITACHI7060全自动生化仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF),采用Sysmex CA-1500型全自动凝血仪检测D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FBG)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)水平。结果与正常组相比,RA患者外周血中D-D、FBG、PLT明显升高,APTT、TT缩短,IL-10、PAF-AH的表达明显降低,IL-6、IL-17、Act1、p50、p65、IκBα、PAF明显升高(P0.05或P0.01)。与对照组相比,XFC组D-D、FBG、PLT、IL-6、IL-17、Act1、p65、PAF水平明显降低(P0.05或P0.01),且在改善患者关节疼痛、关节肿胀、关节压痛、晨僵明显优于对照组(P0.05或P0.01)。Spearman相关性分析显示,RA患者的凝血指标以及PAF/PAF-AH与细胞因子、NF-κB通路以及临床症状体征、疾病活动性指标等呈明显相关性。结论 XFC可能通过降低RA患者外周血细胞因子水平并抑制NF-κB的活化,从而改善其血液的高凝状态。     

新风胶囊通过抑制NF-κB信号通路改善膝骨关节炎患者高凝状态

目的探讨膝骨关节炎(KOA)患者的高凝状态与核因子-κB(NF-κB)通路的活化及致炎/抑炎细胞因子之间的关系以及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将80例KOA患者按随机数字表法分为2组:XFC组(40例)和氨基葡萄糖(GS)组(40例),另设正常对照(NC)组(30例)。前2组均治疗3个月。用ELISA检测2组血清中的NF-κB信号通路指标(P50、P65、IκBα、ACT1、TRAF6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-17、IL-4、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板活化因子(PAF)的含量;半定量PCR检测Act1、P65、P50、IκBα、Iκκα的m RNA水平;荧光定量PCR检测Act1、P65、P50的m RNA水平;Western blot法检测P50、P65蛋白表达水平并测定凝血指标、实验室指标的水平,观察2组之间的变化;采用KOA症状积分量表、Lequesne MG、SF-36及VAS评分评定疗效并进行相关性分析。结果与NC组比较,KOA患者各参数出现明显异常。其中PT、PAF-AH、IL-4明显缩短,PLT、FIB、D-D、PAF、VEGF、P50、P65、ACT1、TRAF6、IL-17、TNF-α、hs-CRP、ESR、IgG水平显著升高(P0.05,P0.01);与治疗前比较,2组治疗后PLT、FIB、D-D、PAF、VEGF、P50、P65、Act1、TRAF、IL-7、TNF-α、hs-CRP、ESR明显降低(P0.01),APTT、PT、PAF-AH、IL-4显著升高(P0.05,P0.01)。在降低PLT、FIB、D-D、VEGF、P65、TRAF、IL-17、hs-CRP、ESR,升高PT、IL-4等方面,XFC组明显优于GS组(P0.05,P0.01);疗效判定:XFC组在降低症状量化积分、Lequesne MG、VAS积分,升高SF-36部分维度积分方面明显优于GS组。结论 XFC可能通过抑制NF-κB信号通路的异常活化,上调IL-10水平,下调IL-1、TNF-α、P50、P65、TAK1等水平的表达,降低异常的炎症免疫反应,从而延缓及抑制膝骨关节炎高凝状态的产生,减少关节病变,减轻关节疼痛及僵硬症状,从而改善患者的生活质量。     

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P0.05),细胞增殖能力明显升高(P0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。     

白藜芦醇抑制肾移植大鼠肾损伤

目的探究白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤的改善作用及作用机制。方法将40只大鼠分为假手术组、模型组(同种异体肾移植手术)、白藜芦醇高和低剂量组[40和20 mg/(kg·d),腹腔注射,连续7 d]。术后24 h,检测血清Cr、BUN、SOD和MDA水平,RT-qPCR检测肾组织Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot检测IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组血清Cr、BUN和MDA含量增高,SOD活性降低,肾组织Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,白藜芦醇显著降低血清Cr、BUN和MDA含量,提高SOD活性,降低Bax mRNA、IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达,提高Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。结论白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤具有保护作用,其作用机制与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P0.05)。LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P0.05)。LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P0.05)。miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P0.05)。结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的。     

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达及其与免疫炎症反应的相关性

目的 检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miRNA)的表达及其与免疫炎症反应的关系。方法 选取AS患者(AS组)及健康志愿者(对照组),每组15例。利用高通量测序技术筛选PBMC中miRNA表达,利用实时定量PCR检测6个差异表达miRNA水平,ELISA检测外周血细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-17、 IL-23表达,Spearman法分析差异miRNA与疾病活动、免疫炎症指标的相关性。结果 与对照组相比,AS患者组共有44个miRNA差异表达,其中有22个上调,22个下调(差异倍数≥1);其中miR-1-3p、 miR-133a-5p表达明显上调,miR-127-5p、 miR-345-3p、 miR-136-3p表达明显下调;且AS患者TNF-α、 IL-1β、 IL-17、 IL-23表达明显升高,miR-1-3p与TNF-α、 C反应蛋白(CRP)、 Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数(BASDAI)呈正相关,miR-133a-5p与TNF-α呈正相关,miR-127-5p与红细胞沉降率(ESR)...     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

医用臭氧通过下调神经病理性痛大鼠核因子κB/核因子κB抑制蛋白α/核因子κB抑制蛋白激酶β的表达发挥镇痛效应

目的观察医用臭氧(OZ)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛大鼠的镇痛作用及对核因子κB(NF-κB)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)及核因子κB抑制蛋白激酶β(IKKβ)表达水平的影响。方法采用CCI法复制大鼠神经病理性痛动物模型,同时给予不同剂量(0.8、0.4、0.2ml)的OZ予以干预,用Von Frey纤维丝机械刺激触痛仪及冷板测痛仪测定不同剂量OZ对CCI大鼠的机械缩足反射阈值与冷缩足反射阈值的影响;用RT-PCR法和Western blotting法检测不同剂量OZ对CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβmRNA和蛋白表达水平的影响。结果与CCI神经病理性痛模型组比较,OZ 0.8、0.4ml剂量升高CCI大鼠机械缩足反射阈值,降低冷缩足反射阈值(P0.05,P0.01);OZ 0.8、0.4ml剂量可下调CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβmRNA和蛋白表达水平(P0.05,P0.01)。结论 OZ对CCI致神经病理性痛大鼠有镇痛作用,其机制可能与下调NF-κB p65、IκBα及IKKβ的表达有关。     

新风胶囊通过抑制PKC/NF-κB通路改善佐剂性关节炎大鼠的肺功能

目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠蛋白激酶C(PKC)/核因子κB (NF-κB)信号通路影响。方法将大鼠分正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、XFC组、来氟米特(LEF)组。除NC组外,其余组采用Freund完全佐剂复制AA模型,第19天给药,每天1次,共30 d。XFC剂量为0. 34 g/(kg·d),1 m L/100 g灌胃,LEF剂量为0. 05 mg/(kg·d)灌胃;采用肺功能仪检测大鼠肺功能参数,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-12、IL-10、IL-17、IL-35、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,实时定量PCR检测肺组织Ras相关C3肉毒素底物1(Rac-1)、PKC、NF-κBp65 mRNA水平,Western blot法检测肺组织Rac-1、PKC、NF-κBp65蛋白水平,免疫组织化学染色法观察肺组织PKC、NF-κB的表达。结果 XFC组大鼠肺功能参数最大呼气第一秒呼出的气量的容积(FEV1)、50%肺活量的呼气流量(FEF50)、75%肺活量的呼气流量(FEF75)、用力最大呼气流量(PEF)较MC组显著升高,XFC组大鼠血清IL-10、IL-35水平升高,血清IL-6、IL-17、MMP-9降低,肺组织PKC、NF-κBp65、Rac-1 mRNA及PKC、NF-κBp65蛋白水平降低。结论 XFC通过抑制PKC/NF-κB通路,调节相关细胞因子的平衡,改善肺功能。     

miR-122低表达对糖尿病肾病足细胞损伤和IKK/NF-κB信号通路的抑制作用研究

目的:探究微小RNA-122(miR-122)低表达对糖尿病肾病(DN)足细胞炎性因子水平、增殖、凋亡、迁移和IκB激酶(IKK)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:体外培养人肾小球足细胞HGPC,取对数生长期细胞，分为正常糖组(5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30mmol/L D-葡萄糖)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC片段至细胞，后加入30mmol/L D-葡萄糖)、miR-122 inhibitor组(转染miR-122 inhibitor片段至细胞，后加入30mmol/L D-葡萄糖),每组设置3个重复。24h后，实时荧光定量PCR(qPCR)测定各组细胞中miR-122表达水平，酶联免疫法(ELISA)测定细胞上清液中白介素(IL)-6、IL-1β及IL-10水平，细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Hoechst 33258染色法及划痕法分别测定细胞活力、增殖率、凋亡率及迁移率，蛋白免疫印迹法(WB)测定细胞中IKKα、IκBα、磷酸化(p-)IκBα、NF-κB p65、p-NF-κB ...     

镧抑制内毒素/脂多糖激活NF-κB信号通路的分子机制探讨

目的 分析镧调控内毒素/脂多糖(LPS)激活巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路的分子机制.方法 体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,随机分为:LaCl3 +LPS组、LPS对照组、LaCl3对照组和空白对照组.免疫细胞化学法分析p65蛋白核转位情况;分别提取细胞总蛋白或胞核胞质蛋白,ELISA法测胞核蛋白中p65蛋白与靶基因结合的活性;Western blot分析胞核蛋白中p65蛋白、胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化的核因子抑制蛋白α(p-IκBα)水平,及总蛋白IKK激酶的表达和磷酸化情况.结果 镧可阻断LPS诱导p65蛋白活化,如抑制其核转位、降低其在胞核中的表达并减弱其与靶基因结合活性.镧可抑制LPS诱导的IκBα降解,但LPS诱导IKKβ磷酸化不能为镧所阻断,且p-IKKβ磷酸化IκBα的能力亦未受到镧的影响.结论 镧可通过抑制LPS激活巨噬细胞IκBα蛋白降解、p65蛋白核易位及与靶基因结合,从而抑制LPS诱导NF-κB信号通路的活化,这可能是镧抑制LPS活化NF-κB通路分子机制之一.     

新风胶囊通过抑制PKC/NF-κB通路改善佐剂性关节炎大鼠的肺功能北大核心CSCD

目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠蛋白激酶C(PKC)/核因子κB (NF-κB)信号通路影响。方法将大鼠分正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、XFC组、来氟米特(LEF)组。除NC组外,其余组采用Freund完全佐剂复制AA模型,第19天给药,每天1次,共30 d。XFC剂量为0. 34 g/(kg·d),1 m L/100 g灌胃,LEF剂量为0. 05 mg/(kg·d)灌胃;采用肺功能仪检测大鼠肺功能参数,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-12、IL-10、IL-17、IL-35、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,实时定量PCR检测肺组织Ras相关C3肉毒素底物1(Rac-1)、PKC、NF-κBp65 mRNA水平,Western blot法检测肺组织Rac-1、PKC、NF-κBp65蛋白水平,免疫组织化学染色法观察肺组织PKC、NF-κB的表达。结果 XFC组大鼠肺功能参数最大呼气第一秒呼出的气量的容积(FEV1)、50%肺活量的呼气流量(FEF50)、75%肺活量的呼气流量(FEF75)、用力最大呼气流量(PEF)较MC组显著升高,XFC组大鼠血清IL-10、IL-35水平升高,血清IL-6、IL-17、MMP-9降低,肺组织PKC、NF-κBp65、Rac-1 mRNA及PKC、NF-κBp65蛋白水平降低。结论 XFC通过抑制PKC/NF-κB通路,调节相关细胞因子的平衡,改善肺功能。     

土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用

目的初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制。方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理。流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路相关信号分子水平。结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平。下调NF-κB p65、p NF-κB p65、IKKα、IKKβ、p IKKα/β、IκBα、p IκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期。GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用。结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关。     

脑钠肽联合miR-328基因对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨脑钠肽(BNP)联合miR-328基因对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌损伤的影响。方法:按照随机数字表将50只大鼠分为5组,假手术组(Sham组,开胸后只穿线,不结扎)、MIRI模型组(I/R组,建立MIRI模型)、BNP组(建立MIRI模型前静脉给予BNP 0.01μg/kg)、miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予miR-328 antagomir 200μl)和BNP+miR-328组(建立MIRI模型前静脉给予BNP和miR-328 antagomir,量同前),每组各10只。于再灌注结束后,获取心脏穿刺血液及心脏组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Sham组、I/R组和miR-328组心肌组织miR-328 mRNA表达水平;TTC+伊文思蓝双染色法测定各组心肌梗死面积;ELISA法测定血清肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;硫代巴比妥酸(TBA)法及邻苯三酚法分别测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法测定心肌细胞凋亡率;Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和核因子活化B细胞κ轻链增强子p65(NF-κB p65)蛋白表达水平。结果:I/R组miR-328 mRNA表达显著高于Sham组和miR-328组(P0.05)。I/R组心肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达水平均显著高于Sham组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著低于Sham组(P0.05),而BNP组和miR-328组肌梗死面积、CK-MB水平、TNF-α和MDA含量、细胞凋亡率、Bax和NF-κB p65蛋白表达均显著低于I/R组,高于BNP+miR-328组,IL-10含量、SOD活性及Bcl-2蛋白表达均显著高于I/R组,低于BNP+miR-328组(P0.05)。结论:BNP及miR-328 antagomir均可降低炎症反应、氧化损伤及心肌细胞凋亡率,从而对MIRI起保护作用,而联合使用效果更明显,机制可能与其下调NF-κB p65信号通路有关。     

没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组。处理后的细胞培养24 h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测TLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平。结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高。LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应。