HIV-1感染者CD4~+CD127~-T细胞减少与PD-1高表达相关

目的通过检测HIV-1感染者CD4+CD127~-T细胞上PD-1、HLA-DR和CD38的表达水平,探究HIV-1感染者CD4+CD127~-T细胞的免疫状态。方法募集慢性HIV-1感染者70例,根据CD4~+T细胞计数绝对值,将慢性HIV-1感染者分为高CD4+计数组(CD4~+T细胞≥500 cells/μl)、中CD4+计数组(350 cells/μl≤CD4~+T细胞500 cells/μl)和低CD4+计数组(CD4~+T细胞350 cells/μl);同时设立健康对照组12例。利用流式细胞术检测HIV-1感染者和健康对照者外周血中CD4+CD127~-T细胞PD-1、CD38和HLA-DR的表达情况,并分析不同指标表达的相关性。结果在HIV-1慢性感染期间,外周血CD4+CD127~-T细胞百分比与CD4计数绝对值负相关(P0.05);CD4+计数350 cells/μl的HIV-1感染者CD4+CD127~-T细胞上HLA-DR与CD38表达水平显著升高,并且与CD4计数存在负相关关系(P0.05)。HIV-1感染者PBMCs中CD4+CD127~-T细胞上高表达PD-1,并且PD-1与CD4计数存在负相关关系,与HLA-DR的表达存在正相关关系。结论在慢性HIV-1感染过程中,CD4~+T细胞数量的减少可能与CD4+CD127~-T细胞PD-1的表达相关。     

肝癌患者外周血CD3~+T细胞和CD19~+B细胞中程序性死亡蛋白1(PD-1)及其配体表达水平增加

目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中程序性死亡蛋白1(PD-1)和配体以及γ干扰素(IFN-γ)水平的变化。方法 采集15例早期HCC患者、13例进展期HCC患者和12例健康人(对照组)的外周血并分离PBMC。流式细胞术检测PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,ELISA检测血清中IFN-γ的水平,利用Pearson相关系数法和One-way ANOVA分析PD-1与IFN-γ的相关性。结果 进展期HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达水平和血清IFN-γ水平显著高于健康人群和早期HCC患者,HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞PD-1、PD-L1表达水平与IFN-γ呈正相关。结论 肝癌患者PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2分子表达增加,且PD-1、PD-L1与IFN-γ水平有关联。     

Tim-3、PD-1和CD28表达与慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能的关系

目的研究慢性乙肝患者肝脏中恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim-3、PD-1、CD28表达的关系。方法无菌分离人体肝脏单个核细胞,建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后的iNKT细胞体外诱导扩增模型,以流式细胞术检测体外培养基线水平0 h和72 h的iNKT细胞的表面Tim-3、PD-1、CD28的表达以及IL-4、IFN-γ的分泌情况;用ELISA法检测培养上清中IL-4、IFN-γ的水平;阻断PD-1、Tim-3及活化CD28信号通路,以流式和ELISA法检测IL-4+iNKT与IFN-γ+iNKT。结果慢性乙肝患者(实验组)肝脏中的iNKT细胞的比例明显低于正常人(对照组)(P0.05);iNKT表面Tim-3、PD-1的表达明显增多(P0.05),而CD28的表达则明显减少(P0.05);iNKT细胞分泌IL-4、IFN-γ的功能明显降低(P0.05);单一α-GalCer刺激培养72 h后,实验组IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT的表达没有明显变化(P0.05),而阻断PD/PDL1、Tim-3/Tim-3L和(或)活化CD28/CD80信号通路后,IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT细胞的表达明显提高(P0.05)。结论慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能存在明显的缺陷,并提示负向调控因子Tim-3、PD-1表达的增加和正向调控因子CD28表达的降低可能与iNKT细胞功能的下调密切相关。     

γ干扰素上调人胎盘间充质干细胞PD-L1表达并增强其诱导脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞的分化

目的比较人胎盘间充质干细胞(h PMSC)对脐血和外周血IL-10~+T细胞分化的调节作用,并探讨γ干扰素(IFN-γ)在其中的作用机制。方法应用酶消化法分离、培养h PMSC;反转录PCR和流式细胞术分别检测程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)在h PMSC的表达;Ficoll密度梯度离心法分离脐血和健康成人外周血单个核细胞,并用红细胞花环法纯化T细胞;用植物血凝素(PHA)活化T细胞并与h PMSC进行共培养,流式细胞术分别检测在阻断型PD-L1 m Ab和IFN-γ预刺激的条件下h PMSC对脐血和外周血T细胞向CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞分化的诱导作用。结果 h PMSC可诱导脐血和外周血T细胞向CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞分化,且对外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的诱导能力明显高于对脐血T细胞向该细胞分化的诱导能力;IFN-γ预处理h PMSC后,h PMSC促进脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化能力明显增强;h PMSC高表达PD-L1,IFN-γ可明显上调其在h PMSC上的表达;阻断PD-L1在h PMSC上表达后,脐血、外周血中CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞比例均明显降低。结论 h PMSC诱导外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的能力明显高于其诱导脐血T细胞向该细胞分化的能力。IFN-γ可通过上调PD-L1在h PMSC上的表达,增强h PMSC对脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的诱导能力。     

日本血吸虫感染小鼠的脾脏CD8+PD-1+T细胞的功能特性

目的研究日本血吸虫感染后小鼠脾脏CD8+PD-1+T细胞含量及功能的变化情况。方法使用日本血吸虫感染5～6周的C57BL/6小鼠,分离脾脏,制备石蜡切片,HE染色,观察组织病变情况;分离淋巴细胞并计数,运用流式细胞术检测CD8+PD-1+T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察CD8+PD-1+T细胞的CD25、CD69、CXCR5、CD40L的表达变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌情况。结果日本血吸虫感染后,小鼠体质量下降(P0.05),而脾脏质量和体积均明显上升(P0.01);脾脏中CD8+PD-1+T细胞的比例和绝对值数目增加(P0.01);感染组CD8+PD-1+T细胞高表达CD69(P0.05),而感染组CD8+PD-1+T细胞CXCR5分子表达显著下降(P0.05);经PMA与离子霉素刺激以后,CD8+PD-1+T细胞IFN-γ分泌增加(P0.05)。结论血吸虫感染5～6周小鼠脾脏中CD8+PD-1+T细胞为一群主要的活化细胞群可大量分泌IFN-γ,在血吸虫感染疾病发挥重要的免疫调节作用。     

程序性死亡受体-1与丙型病毒性肝炎

死亡受体-1 ( PD-1)可导致病毒特异性CD8+T细胞的功能耗竭,在HCV感染过程中PD-1表达增强,阻断PD-1信号通路可恢复CD8+T细胞的免疫功能,有助于病毒清除。     

结核分枝杆菌H37Ra诱导核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2~(-/-))小鼠的1型辅助T(Th1)细胞型免疫应答

目的探讨1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)及多功能T细胞在感染结核分枝杆菌H37Ra的核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2~(-/-))小鼠中的作用。方法 NOD2~(-/-)小鼠与野生型C57BL/6小鼠气管分别滴入MTB减毒株H37Ra建立肺部感染模型并设立生理盐水对照组,每组10只。4周后,取肺组织进行HE染色及病理评分;ELISA检测肺组织匀浆中TNF-α和IFN-γ含量;流式细胞术检测脾细胞中多功能CD4~+ T/CD8~+ T细胞的比例。结果 NOD2~(-/-)小鼠感染H37Ra后肺组织炎症加重,肺组织TNF-α和IFN-γ含量增加。与生理盐水组相比,两种小鼠感染后, CD4~+/CD8~+T细胞中TNF-α~+、 IFN-γ~+单阳性细胞及TNF-α~+IFN-γ~+细胞均显著增加;与C57BL/6小鼠感染组相比, NOD2~(-/-)小鼠感染组体内TNF-α~+ CD4~+ T细胞、 IFN-γ~+ CD4~+T细胞及IFN-γ~+ CD8~+ T细胞显著增加。结论 H37Ra可诱导NOD2~(-/-)小鼠的Th1细胞型免疫应答反应。     

PD-1/PD-L1在骨肉瘤中的研究进展

PD-1是一种主要表达于活化的CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和DC等免疫细胞上的跨膜蛋白。PD-1及其配体PD-L1是一对共刺激分子,在正常情况下,这对分子活化后的信号通路可调节外周组织中T细胞的分化,进而调控机体对外来或自身抗原的免疫应答反应,以防免疫过激情况的发生。但在肿瘤发生时,肿瘤细胞高表达PD-L1打破了这一动态平衡,导致了肿瘤细胞的免疫逃逸。该文就PD-1/PD-L1信号通路、骨肉瘤中PD-1/PD-L1的表达、PD-1/PD-L1抑制剂在骨肉瘤中的应用作一综述。     

PD-1/PD-L1在系统性红斑狼疮患者外周血表达水平及其临床意义

本研究旨在检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4~+T细胞表面PD-1和B细胞表面PD-L1分子的表达并探索其临床意义。采用流式细胞术检测SLE患者及健康对照外周血CD4~+T细胞上PD-1分子及B细胞上PD-L1分子的表达,并分析其与SLE临床指标的相关性。结果显示,SLE患者外周CD4~+T细胞表面PD-1分子及B细胞上PD-L1分子的表达均明显高于健康对照组(均P0.05),且SLE患者CD4~+T细胞上PD-1分子的表达水平与血清Anti-dsDNA的含量及SLEDAI评分呈正相关(均P0.05),B细胞上PD-L1分子的表达水平与血清dsDNA水平呈正相关(P0.05)。上述结果表明,SLE患者外周血CD4+T细胞上PD-1分子及B细胞上PD-L1分子均发生上调,并与SLE病程和自身抗体水平呈现正相关,提示分别表达于T细胞和B细胞表面的PD-1/PD-L1分子,通过相互作用参与SLE的致病和发展过程。     

慢性HBV感染者CD4~+T细胞高表达CD95与活化相关

目的检测HBV感染者CD4~+T细胞CD95、CD38、HLA-DR的表达水平,探讨HBV感染者CD4~+T细胞免疫活化和免疫耗竭的意义。方法根据外周血HBV DNA水平将HBV感染者分为高病毒载量组(38例)与低病毒载量组(32例),并设健康对照组(16例);采用流式细胞术对HBV感染者外周血CD4~+T细胞CD95、CD38、HLA-DR的表达进行检测分析。结果与健康对照组比较,慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95、HLA-DR的表达显著升高(P0.05),CD95、CD38和HLA-DR两两共表达显著升高(P0.05);慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95水平与CD38负相关,与HLA-DR正相关(P0.01)。结论慢性HBV感染者CD4~+T细胞CD95表达上调;CD4~+T细胞耗竭的原因可能与活化诱导的细胞凋亡有关。     

PD-1 / PD-L1 在复发性流产患者外周血T 淋巴细胞中的表达及意义

目的:探究程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L1)在复发性流产患者外周血T淋巴细胞中的表达及意义。方法:选取2015年7月至2017年2月本院收治的复发性流产患者57例为观察组,另选取42例正常妊娠妇女为对照组,采用流式细胞仪检测两组PD-1/PD-L1在外周血T淋巴细胞表达水平。并对患者实施淋巴细胞免疫治疗,检测治疗过程中PD-1/PD-L1水平变化情况及妊娠结局。结果:观察组CD3~+、CD8~+显著低于对照组,CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于对照组(P0.05);观察组PD-1/CD4~+、PD-1/CD8~+、PD-L1/CD4~+、PD-L1/CD8~+显著低于对照组(P0.05);患者治疗后4周、治疗后8周PD-1/CD4~+、PD-1/CD8~+、PD-L1/CD4~+、PD-L1/CD8~+均显著高于治疗前(P0.05);妊娠成功43例,妊娠失败14例,妊娠成功组PD-1/CD4~+、PD-1/CD8~+、PD-L1/CD4~+、PD-L1/CD8~+均显著高于治疗前,且显著高于妊娠失败组(P0.05)。结论:PD-1/PD-L1在复发性流产患者外周血T淋巴细胞中呈低水平表达,可能参与疾病发生发展进程,影响妊娠结局,其可作为临床治疗潜在靶点。     

Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒感染者特异性CD8~+T细胞的调控作用

目的检测Notch受体和配体在甲型H1N1流感患者中的表达,观察Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒特异性CD8~+T细胞的调控作用。方法本研究入组轻症甲型H1N1流感患者27例、重症甲型H1N1流感患者11例和健康对照者18例。实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中Notch受体和配体mRNA的相对表达量。PBMC与Notch信号通路抑制剂DAPT刺激培养24 h后,流式细胞术检测病毒特异性CD8~+T细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的变化,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测病毒特异性CD8~+T细胞分泌穿孔素和颗粒酶B的变化。纯化HLA-A2限制性患者CD8~+T细胞,DAPT刺激培养24 h后建立与甲型H1N1病毒株感染的NCI-H345细胞的直接接触和间接接触培养系统,通过检测乳酸脱氢酶的释放计算CD8~+T细胞诱导靶细胞死亡比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清TNF-α和IFN-γ水平,评估CD8~+T细胞非细胞杀伤功能。结果轻症和重症甲型H1N1流感患者PBMC中Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)和Notch配体(DLL1、DLL4、Jagged1、Jagged2)mRNA相对表达量均高于对照组(P0.05)。重症甲型H1N1流感患者病毒特异性CD8~+T细胞分泌IFN-γ的细胞比例、分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量均高于轻症患者(P0.05)。DPAT刺激抑制甲型H1N1流感患者病毒特异性CD8~+T细胞分泌TNF-α和IFN-γ的细胞比例以及分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量(P0.05)。直接培养系统中,DAPT刺激均可降低病毒特异性CD8~+T细胞诱导的靶细胞死亡比例(P0.05),培养上清中TNF-α和IFN-γ水平均亦降低(P0.01)。间接接触培养系统中,虽然DAPT刺激后培养上清TNF-α和IFN-γ水平降低(P0.01),但CD8~+T细胞诱导的靶细胞死亡比例的差异在经DAPT刺激和无DAPT刺激之间的差异无统计学意义(P=0.149)。结论甲型H1N1流感患者中升高表达的Notch受体和配体可增强病毒特异性CD8~+T细胞的直接细胞杀伤功能,促进疾病进展。     

PDL1 和IFN-α与系统性红斑狼疮患者免疫功能异常的关系研究

目的:探讨PD-L1和IFN-α与系统性红斑狼疮(SLE)患者免疫功能异常的关系。方法:选取2018年1月～2019年12月于我院就诊的SLE患者52例(SLE组)和健康志愿者48例(对照组)。根据抗dsDNA抗体检测结果,将SLE组分为抗dsDNA抗体阳性组(18例)和阴性组(34例)。ELISA检测血清PD-L1和IFN-α,分别采用ELISA法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体,流式细胞术检测细胞表面PD-1和PD-L1,速率散射比浊法检测补体C3和C4,免疫比浊法检测CRP。结果:与对照组相比,SLE患者外周血CD4~+T细胞表面PD-1和PD-L1表达上调,阳性组高于阴性组(P0.01);CD8~+T和CD19~+B细胞表面PD-1表达上调,PD-L1表达下调,阳性组与阴性组比较差异均有统计学意义(P0.01);与阴性组和对照组相比,阳性组血清PD-L1、补体C3和C4显著降低,而IFN-α、CRP、SLEDAI及抗dsDNA抗体滴度显著增高(P0.01);SLE患者血清PD-L1与IFN-α、SLEDAI、抗dsDNA抗体滴度和CRP呈显著负相关(r=-0.468,-0.494,-0.493,-0.352,P0.05),与补体C3和C4呈显著正相关(r=0.498,0.326,P0.05)。结论:PD-L1和IFN-α异常表达于SLE患者T、B淋巴细胞表面和血清,共同参与细胞及体液免疫功能调节。     

程序性死亡受体1/程序性死亡配体1信号各组分在急性冠脉综合征患者外周血中的表达及意义

目的 探讨程序性死亡受体1/程序性死亡配体1信号各组分在急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及意义.方法 采用流式细胞术检测CD4+ CD28-T细胞表面程序性死亡受体1(PD-1)以及单核细胞表面程序性死亡配体1(PD-L1)的表达;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血中可溶性程序性死亡受体1(sPD-1),可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)和干扰素-γ(IFN-γ)的浓度.结果 与稳定性心绞痛(SA)和正常对照组(HC)相比,ACS患者CD4+ CD28-T细胞表面PD-1和单核细胞表面PD-L1的表达明显上调(P＜0.05),外周血中sPD-1、sPD-L1和IFN-γ的水平显著升高(P＜0.05).其中,sPD-L1和IFN-γ的水平呈显著正相关(r=0.772,P＜0.05).sPD-1和IFN-γ的水平无相关性(r =0.306,P＜0.05).结论 ACS患者体内CD4+ CD28-T细胞过量产生的IFN-γ是单核细胞表面PD-L1表达上调和外周血sPD-L1水平升高的原因之一,为进一步研究CD4+ CD28-T细胞的增殖活化和防治ACS提供理论依据.     

慢性乙型肝炎病毒感染者CD8~+T细胞Toll样受体2表达增强

目的测定未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者CD8~+T细胞中Toll样受体2(TLR2)的水平,探索TLR2在慢性HBV感染者CD8~+T细胞中的表达的情况。方法采用实时荧光定量PCR检测40例样本的血清HBV载量,分为高病毒载量组(HBV DNA1×104拷贝/m L)、低病毒载量组(HBV DNA1×104拷贝/m L),19例志愿者作为健康对照组;分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD8~+T淋巴细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达,并分析TLR2表达情况及与它们之间的相关性。结果低病毒载量组与高病毒载量组CD8~+T细胞TLR2的表达较健康对照组高,低病毒载量组CD8~+T细胞TLR2表达高于高病毒载量组;相关性分析结果显示CD8~+T细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、PD-1表达缺乏相关性。结论 HBV感染者CD8~+T淋巴细胞TLR2的表达增强。     

EBV阳性或微卫星不稳定性相关胃癌常见PD-L1表达

<正>阻断PD-1通道已成为一种新的肿瘤治疗方法,为预测治疗反应,通过免疫组化法判读其配体(PD-L1)表达水平将有助于患者进行分层。研究表明,富于CD8~+T细胞的实性肿瘤PD-L1表达增强,作者推测具有此类肿瘤微环境的EBV病毒阳性或微卫星不稳定性(MSI),胃癌PD-L1表达增加。     

体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞及其生物学特性的初步分析

目的探讨体外大量培养扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的新方法,并初步研究其分子表型和功能特征。方法 20例手术切除的原发性肝癌组织经混合消化酶消化为单个细胞后,应用密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞,然后应用两步培养法大量扩增TILs,并检测它们的生长扩增速度。应用流式细胞仪检测扩增淋巴细胞的分子表型,ELISA法检测其IFN-γ的分泌水平,并分析高表达PD-1和低表达PD-1分子TILs分泌IFN-γ的能力。结果 18例标本中的TILs在体外经两步法培养后可以扩增达到1010数量级。扩增的TILs中CD3~+细胞的比例为(91.7±7.4)%,CD3~+CD56~+细胞的比例为(28.5±11.7)%,CD3~+CD4~+细胞的比例为(32.5±19.6)%,CD3~+CD8~+细胞的比例为(62.5±29.1)%。PD-1分子在CD3~+CD8~+细胞的比例为(23.5±16.1)%。扩增的TILs分泌INF-γ的水平为(827.8±307.7)pg/ml,其中9例PD-1分子低表达的CD3~+CD8~+细胞的分泌INF-γ的水平为(1087.5±249.6)pg/ml,6例PD-1分子高表达的CD3~+CD8~+细胞的分泌INF-γ的水平为(478.6±69.3)pg/ml,两者相比有明显差异(P0.05)。结论应用两步培养法从原发性肝癌中大量扩增TILs简便易行,扩增的TILs主要为CD3~+CD8~+T淋巴细胞,且TILs中PD-1的表达与其分泌IFN-γ的能力呈负相关。     

程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中的表达及临床意义

目的 通过分析程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1(programmed death ligand-1/programmed death-1,PD-L1/PD-1)在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中表达情况,探讨其临床意义.方法 选择同一时期90例老年胃癌患者(具有不同临床分期)及90例老年健康体检者,分别采取新鲜外周血后经流式细胞仪检测血中CD8+T淋巴细胞表面PD-L1/PD-1表达情况,结合老年胃癌患者的临床分期,分析PD-L1/PD-1在不同胃癌分期中的表达意义.结果 PD-L1/PD-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞呈高表达,相较于老年健康者差异具有统计学意义(t=7.043,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-L1/PD-1阳性表达均随着临床分期的增加而增加,呈明显的正相关性(r=0.883,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-1阳性表达随着临床分期的增加而增加,两者之间呈正相关性(r=0.811,P<0.05);临床分期较晚的老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1表达比其他相对较早的临床分期老年胃癌患者显著上升(t=4.377,P<0.05).结论 PD-L1/PD-1信号通路异常在老年胃癌患者病变的发生发展过程中发挥了重要作用,外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1的表达对评判患者的预后具有指导作用.     

PD-L1在人胎盘源间充质干细胞对脐血CD8~+T细胞免疫调节中的作用

目的:研究PD-L1在人胎盘源间充质干细胞(Human placenta mesenchymal stem cell,hPMSCs)介导的对脐血CD8+T细胞活化、周期及对IL-17分泌免疫调节中的作用。方法:RT-PCR及FCM检测hPMSCs对PD-L1的表达;应用化学合成的PD-L1 siRNA阻断PD-L1在hPMSCs上的表达;免疫磁珠分选脐血CD8+T细胞;FCM分析阻断PD-L1后,hPMSCs对PHA刺激下CD8+T细胞活化、周期及PMA活化下CD8+T细胞分泌IL-17的影响。结果:hPMSCs高表达PD-L1分子,PD-L1 siRNA能有效阻断hPMSCs对PD-L1的表达;FCM分析结果显示,hPMSCs能够抑制CD8+T细胞对CD69的表达,但阻断PD-L1后,CD69的表达与未阻断组相比无明显变化;与未阻断组相比,处于G0/G1期的CD8+T细胞数量明显减少,处于S期的细胞数量明显增加;在hPMSCs存在条件下,脐血CD8+T细胞对IL-17的分泌明显增加,阻断PD-L1的表达后,IL-17的分泌被进一步上调。结论:PD-L1在hPMSCs上表达能够协同hPMSCs对脐血CD8+T细胞周期的抑制,并且能够抑制hPMSCs上调CD8+T细胞对IL-17的分泌。     

可溶性丙型肝炎病毒E2糖蛋白抑制人活化CD4~+T细胞的促炎细胞因子分泌

目的探索可溶性丙型肝炎病毒(HCV)E2糖蛋白对人活化CD4~+ T细胞的免疫调节作用。方法真核表达质粒pcDNA3.1-HCV sE2转染HEK293T细胞,细胞培养上清经Ni-NTA树酯亲和层析纯化可溶性HCV E2蛋白。应用流式细胞术分选健康捐献者外周血CD4~+ T细胞,经1.0μg/mL小鼠抗人CD3单克隆抗体、 1.0μg/mL小鼠抗人CD28单克隆抗体刺激培养48 h。刺激后的CD4~+ T细胞分成空白对照组、(2、 5、 10)μg/mL HCV E2蛋白组,后者经HCV E2糖蛋白处理。培养36 h后,流式细胞术检测CD4~+ T细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达变化, ELISA检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果与空白对照组比较, HCV E2蛋白组CD4~+ T细胞PD-1表达轻微降低,但差异无统计学意义。与空白对照组比较,可溶性E2蛋白组CD4~+ T细胞分泌TNF-α水平明显降低,并呈剂量依赖性;可溶性E2蛋白组CD4~+ T细胞分泌IFN-γ水平明显降低,但高低剂量组无明显差异。结论可溶性HCV E2蛋白抑制人活化CD4~+ T细胞促炎细胞因子的分泌。