载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

载脂蛋白E基因敲除小鼠是目前在动脉粥样硬化 (AS)研究领域中应用最多的基因工程动物。参考国内外应用载脂蛋白E基因敲除小鼠研究AS的有关文献 ,就其AS病灶形成的规律及形态学改变 ,有氧运动和饮食对该小鼠AS病灶的影响 ,关于调脂药物和其它药物研究情况 ,骨髓移植和基因治疗对该种小鼠AS病灶的影响等方面作一综述 ,以期将这种基因工程小鼠动物模型更广泛地应用于中西医药研究     

载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

载脂蛋白E基因敲除小鼠是目前在动脉粥样硬化（AS）研究领域中应用最多的基因工程动物。参考国内外应用载脂蛋白E基因敲除小鼠研究AS的有关文献，就其AS病灶形成的规律及形态学改变，有氧运动和饮食对该小鼠AS病灶的影响，关于调脂药物和其它药物研究情况，骨髓移植和基因治疗对该种小鼠AS病灶的影响等方面作一综述，以期将这种基因工程小鼠动物模型更广泛地应用于中西医药研究。     

肝脏特异性DEK基因敲除小鼠模型的制备及鉴定

目的　利用Cre/loxp基因敲除技术构建肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,为研究DEK基因在肝脏中的生物学功能提供重要动物模型。 方法　将DEKflox/flox小鼠与肝脏特异性表达Alb-Cre重组酶的小鼠进行交配和鉴定,筛选出子代中DEKflox/+/Alb-Cre小鼠与DEKflox/flox小鼠进行交配与鉴定,获得DEKflox/flox/Alb-Cre小鼠,将DEKflox/flox/Alb-Cre小鼠与DEKflox/flox小鼠进行交配,其子代基因型为DEKflox/flox/Alb-Cre的小鼠即为本实验所构建的肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,DEKflox/flox小鼠即为对照小鼠。提取小鼠尾基因组DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;提取小鼠肝脏RNA和总蛋白,利用Real-Time PCR和Western Blotting技术检验DEK基因在小鼠肝脏中的mRNA水平和蛋白质水平的表达情况,使用激光共聚焦检测DEK蛋白在小鼠肝脏的表达情况;对小鼠肝脏行苏木精-伊红染色观察小鼠肝组织的形态学变化。 结果　PCR结果表明子代小鼠基因型符合DEKflox/flox/Alb-Cre;肝脏特异性DEK基因敲除小鼠肝组织中DEK基因的mRNA水平及蛋白质水平显著低于DEKflox/flox型小鼠;肝脏特异性DEK基因敲除小鼠肝组织的形态学特征与对照组小鼠相比无明显差异。 结论　本研究利用Cre/Loxp技术成功构建了肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,为在动物水平进一步研究DEK基因的作用提供了重要动物模型。     

转录激活因子样效应物敲除klf4 b基因的质粒构建与鉴定

目的： KLF4是哺乳动物细胞中调控和维持全能性的关键因子,构建与鉴定klf4 b基因敲除的有效位点与相关质粒,以期构建klf4 b基因敲除动物模型研究其功能。方法转录激活因子样效应物核酸酶是目前最有效敲除和编辑基因的基因工程技术之一,设计和组装了klf4 b基因TALENs质粒,在胚胎和整体动物水平验证其有效性。结果成功组装了两对klf4 b基因TALENs质粒,显微注射胚胎后,经检测其中一组成功诱导klf4 b靶向区域突变,突变类型既有插入型也有缺失型;遗传检测显示这些突变型高效的遗传给了下一代。结论在斑马鱼中有效敲除了klf4 b基因,成功获得了斑马鱼klf4 b突变群体;为进一步阐释斑马鱼中klf4 b基因的生物功能提供了良好的研究材料,也为全面理解哺乳类klf4基因的功能提供了研究模型。     

人类疾病动物模型研究的进展

人类疾病动物模型，在医学发展中起着重要作用，以自然发生作为人类疾病研究的动物模型，已经不能满足科学需要，利用现代分子生物学技术进行人类疾病动物学研究势在必行。为此本文围绕体内基因转移动物模型，基因敲除动物模型，模仿人体癌发生动物模型三方面，对近几年人类疾病动物模型研究的进展综述如下。     

人类疾病动物模型研究的进展

人类疾病动物模型，在医学发展中起着重要作用，以自然发生作为人类疾病研究的动物模型，已经不能满足科学需要，利用现代分子生物学技术进行人类疾病动物学研究势在必行。为此本文围绕体内基因转移动物模型，基因敲除动物模型，模仿人体病发生动物模型三方面，对近几年人类疾病动物模型研究的进展综述如下。     

Klotho基因及其生物学效应

klotho基因是主要在肾脏和脑表达的基因,其表达产物有膜结合型和分泌型两种蛋白异构体形式,二者可能分别是膜结合受体和体液调节信号蛋白.klotho基因敲除后小鼠过早出现和人类衰老相关的多种行为和病理生理改变,如寿命缩短、运动失调、性功能障碍、痴呆、白内障、动脉粥样硬化、肺气肿、骨质疏松、免疫功能降低等.持续血液循环应激和慢性肾衰时肾klotho基因的表达下调.klotho基因是抑制衰老的基因,其分泌性蛋白是抗衰老激素.分泌型klotho蛋白有望成为防治老年病的有效药物.klotho基因敲除鼠是目前研究人类衰老及多种老年病发生、预防和治疗的最合适的动物模型.     

基因敲除模型小鼠在疾病研究中的应用

背景：人类很多疾病是由基因决定的,构建相应的基因敲除动物模型对疾病的发病机制和治疗研究具有重要的意义。 目的：探讨基因敲除小鼠模型在心血管、神经、骨骼、肝脏、视网膜等系统的疾病研究中的应用与发展前景。 方法：应用计算机检索CNKI 期刊全文数据库和PubMed数据库(1990-01/2009-12)与基因敲除小鼠模型相关的文献。检索词分别为“基因敲除小鼠;动脉粥样硬化;神经系统;骨质疏松;肝脏;视网膜”和“Gene knock-out; Mice Atherosclerosis; Nervous system; Osteoporosis; Liver; Retinal”。纳入具有原创性,论点论据可靠的以基因敲除小鼠模型评价的文献报道。排除重复研究或Meta分析类文章。 结果与结论：检索到文献75篇,按纳入及排除标准筛选后共纳入文献38篇。经分析得出以下结论：基因敲除小鼠广泛应用于人类疾病模型,目前已构建了数百个人类疾病的小鼠模型,包括心血管疾病、神经退化性疾病、糖尿病、癌症等小鼠模型。通过对基因敲除小鼠疾病模型的研究,可以找到相关疾病的潜在治疗靶点,为人类精确地研究基因与疾病的直接关系提供了可能。     

SETD4基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的　构建并鉴定SETD4基因敲除小鼠,为研究SETD4的生物学功能提供动物模型。 方法　将引进的SETD4flox/+小鼠与EIIa-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为SETD4+/-.EIIa-Cre的小鼠;再与C57BL/6小鼠杂交去除Cre酶,获得杂合子SETD4+/-小鼠;该小鼠自交获得纯合子SETD4-/-小鼠。通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型;RT-PCR、荧光定量PCR方法鉴定纯合子的SETD4基因敲除小鼠SETD4 mRNA表达情况;HE染色观察小鼠肝、肺组织的形态学变化。 结果　PCR结果表明子代小鼠的基因型符合SETD4-/-;纯合子基因敲除小鼠SETD4 mRNA水平显著低于野生型小鼠;SETD4基因敲除小鼠肝、肺组织的形态学特征与野生型小鼠相比无明显差异。 结论　本研究基于Cre/loxp系统,成功构建并鉴定了SETD4基因敲除小鼠。     

载脂蛋白E基因敲除鼠不同部位动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的 通过建立载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)动物模型,分析其不同部位AS病变的病理形态学特征.方法 用高脂高胆固醇饲料喂养载脂蛋白E基因敲除鼠,并行右颈总动脉套环术建立AS动物模型.连续石蜡切片,HE染色观察套环侧和未套环侧颈总动脉及主动脉粥样硬化病变,进行病变分型.结果 未套环侧颈总动脉未见病变,套环侧颈总动脉粥样硬化病变明显,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共14例;主动脉无病变的共8例,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共6例.结论 载脂蛋白E基因敲除鼠套环形成的AS病变严重且发生、发展迅速,主动脉自发形成的AS病变发展缓慢.