不同亚型急性髓性白血病细胞转化为树突状细胞的研究

目的 :探讨利用一定组合的细胞因子 ,将不同亚型的急性髓性白血病 (acute m yeloidleukemia,AML)细胞在体外转化为树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法 :8例初发 AML 患者 (其中M1 1例、M2 a3例、M32例、M4 c1例、M51例 )的骨髓单个核细胞 (BMMNC) ,在含 GM- CSF、IL- 4和TNF-α的完全培养液中培养 14天 ,通过光镜及电镜下观察细胞形态、流式细胞仪测定细胞免疫表型和 MTT法混和淋巴细胞反应来鉴定 DC。结果 :6例患者的 BMMNC培养 14天后转化为 DC。 DC的免疫表型 CD1 a、CD83、CD86 、HL A- DR较培养前明显上调 (P<0 .0 5 )。 DC对同种异体 T淋巴细胞有较强的刺激作用 ,远高于对照 (P<0 .0 5 ) ,而且随 DC数量的增加刺激 T细胞增生的活性越强。2例患者(M2 a1例 ,M31例 )的 BMMNC未转化为 DC,免疫表型分析显示 CD83及 CDla的表达较低 ,但 CD86 及HL A- DR的表达明显增高。结论 :利用一定组合的细胞因子可以将 AML细胞在体外转化为形态、表型和功能符合 DC特征的细胞。某些 AML患者的原始细胞不能转化为 DC,与其亚型无关 ,原因有待进一步探讨     

四种不同来源的树突状细胞的性能比较研究

目的:探讨正常人外周血单按细胞、肿瘤患者外周血单按细胞、脐带血CD34^ 细胞、非淋巴细胞白血病细胞来源的树突状细胞性能差异。方法：分别利用正常人及肿瘤患者的外周血分离单个核细胞，黏附贴壁法收集单核细胞，在GM-CSF、IL-4及TNF-α细胞因子组合下诱导树突状细胞；脐带血细胞则利用MACS系统分离纯化CD34^ 细胞作为树突状细胞的前体细胞，培养体系为FL SCF GM-CSF IL-4 TNF-α；非淋巴细胞白血病细胞作为树突状细胞的前体细胞培养条件同CD34^ 细胞。流式细胞仅分析诱导细胞的表型，电镜分析细胞形态。结果：利用4种不同来源的前体细胞在不同细胞因子组合下可分别诱导出DC细胞，细胞CD1a，CD80，HLA-DR的表达较诱导分化前明显上调．细胞形态学表明4种细胞来源的DC均有较典型的DC细胞形态，并均可刺激同种异体T细胞的增生。结论：利用健康人或肿瘤患者外周血可成功诱导出树突状细胞，利用脐血CD34^ 细胞及部分非淋巴细胞白血病原代细胞也可体外诱生出树突状细胞，不同来源的树突状细胞在形态及初步功能上无明显区别。     

人急性早幼粒细胞性白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的体外研究

树突状细胞(dendritic cells,DC)在激发机体抗白血病T细胞免疫应答中具有重要作用,有报道DC可以由单核细胞及粒细胞分化生成,本研究应用细胞因子在体外诱导了急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞向DC的分化.从M3型APL患者外周血分离白血病细胞,加入GM-CSF(100ng/ml)或GM-CSF(100ng/ml) rhIL-4(500U/ml)体外培养14天,并于培养结束前3天加人TN-α(100ng/ml).结果表明,GM-CSF可以促进白血病细胞体外增殖,并从幼稚状态逐渐分化成熟,表达高水平的CD45分子,其中部分为CD14~ 的单核细胞,部分为CDla~ 的DC(M3DC);培养后期加入TNF-α,可以促进DC生成,约占35%;以GM-CSF IL-4培养也诱导了幼稚细胞的成熟,2周后DC约占10%,但较少单核细胞生成,培养至3周时DC约占60%;而在培养后第11天加入TNF-α则可以加速DC生成,3天后生成的白血病型DC达90%.电镜观察到M3DC具有与单核细胞来源的DC相似的超微结构,但具有的突出特征是部分细胞存在少量胞浆颗粒;M3DC高表达HLA-DR、B7-2、CD40、CD54分子,体外可以强烈刺激同种T细胞增殖.此类由白血病细胞诱导生成的DC可被用于体内外诱导生成肿瘤特异性CTL,在APL的免疫治疗中具有一定的应用价值.     

脐血、健康人及慢粒患者外周血来源的DC介导的抗白血病免疫效应研究

目的：观察脐血、健康人及慢性柱细胞性白血病(CML)患者外周血3种不同来源的树突状细胞(DC)及其抗白血病效应。方法：分离3种来源的单个核细胞(MNC)并在细胞因子(GM-CSF IL-4 TNF-α)作用下诱导培养DC。观察DC形态，流式细胞技术检测DC免疫表型(CD1α、CD80、CD83、HLA-DR)；将所得DC经CML细胞可溶性抗原负载后和其同源T细胞混合诱导抗原特异性CTL，MTT法检测其杀伤活性。结果：3种来源MNC在细胞因子作用下均可获得形态典型的DC，且高表达CD1α、CD80、CD83、HLA-DR，经抗原负载后的DC诱导的CTL对CML靶细胞的杀伤活性也较强。结论：脐血、健康人及CML患者外周血均为理想的DC来源；有较好的诱导CTL杀伤白血病细胞效应；应用DC瘤苗免疫治疗白血病必将成为一种崭新的肿瘤免疫治疗方法，有十分诱人的发展前景。     

宫颈癌患者外周血树突状细胞的体外扩增和鉴定

 目的 探索体外扩增宫颈癌患者外周血来源的成熟树突状细胞(denelritic cell，DC)的方法，并鉴定DC的形态、结构、表型及生物学活性。方法 淋巴细胞分离液分离宫颈癌患者外周血，得到DC前体细胞(PBMC)，以(3M-CSF、IL-4、TNF-α诱导培养。用光镜和透射电镜观察形态结构，流式细胞仪检测细胞表面特异性分子，MTT法测定DC刺激T细胞增殖的活性。结果 联合应用细胞因子可诱导扩增出源自宫颈癌患者外周血的成熟DC，具有典型形态特征，较高表达HLA-DR、CD1a、CD80，能强烈激发同种异体T细胞增殖反应。结论 宫颈癌患者外周血体外培养可成功获得成熟的DC，为开展宫颈癌临床免疫治疗奠定了基础。     

树突状细胞应用于急性白血病免疫治疗的初步研究

目的为了将树突状细胞(DC)应用于急性白血病的免疫治疗,初步探索从急性白血病患儿的外周血诱导扩增树突状细胞的可能性,并对其特性加以研究。方法获取完全缓解6个月以后的急性白血病患儿的外周血单核细胞,加入rIL-4、hGM-GSF、TNF-α等细胞因子诱导单核细胞分化形成DC,利用间接免疫荧光技术进行DC的表型鉴定,利用混合淋巴细胞反应检测了其抗原刺激能力。结果培养7～8天后的细胞高度表达DC的特征性表面分子CD1α(86.2％)、CD80(73.2％)及HLA-Ⅰ类(64.6％)、HLA-Ⅱ类(77.2％)分子等;正常人DC的产量平均为9.05×106/100ml,白血病人DC的产量平均为2.0×106/100ml,两者差别有极显著意义(P＜0.001);5×102个DC可较强地刺激同种异体淋巴细胞增殖,并且随着DC浓度的增加,淋巴细胞增殖反应增强。结论急性白血病人完全缓解6个月后从外周血可以诱导出有较强的抗原刺激能力的DC。     

IFN-α联合GM-CSF诱导胃癌患者外周血单个核细胞分化为树突状细胞

目的： 探索干扰素-α（interferon-α,IFN-α）联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF）体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）向树突状细胞（dendritic cell,DC）分化的可能性。 方法： 10 例胃癌患者PBMC分别用GM-CSF 100 ng/ml联合IFN-α 500 IU/ml（命名为IFN-α DC） 或GM-CSF 100 ng/ml联合50 ng/ml IL-4（命名为IL-4 DC）体外培养,然后用CD40L、LPS诱导DC成熟。Giemsa染色法观察IFN-α DC和IL-4 DC的形态,流式细胞术分析IFN-α DC和IL-4 DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达情况,同种异体混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）检测不同的成熟DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果： IFN-α DC和IL-4 DC均呈现典型DC形态。IFN-α DC和IL-4 DC分别在诱导第3天和第5天时,细胞表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达达到较高水平,成熟IFN-α DC表面CD83\[（78.25±15.36）% vs （50.14±10.24）%,P<0.05\]和CD86\[（84.84±10.12）% vs （62.93±15.12）%,P<0.05\]的表达均高于成熟IL-4 DC。成熟IFN-α DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力强于未成熟IFN-α DC（P<005）。在DC与T细胞数量比为1∶40和1∶20时,成熟IFN-α DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力明显强于成熟IL-4 DC\[（39.43±9.21）% vs （27.34±10.63）%,（60.31±7.86）% vs （48.63±6.25）%;均P<0.05\]。 结论： 相比常用的IL-4联合GM-CSF诱导方法,IFN-α联合GM-CSF可以在更短时间内将胃癌患者PBMC诱导成具有更强刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的DC细胞,这可能与其表面CD83和CD86表达增高有关。     

IL-27促进人单个核细胞来源树突状细胞的分化成熟及其作用机制

目的:探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)形态和功能的影响及其作用机制。方法:从正常健康人外周血中分离出单个核细胞,将其用GM-CSF、IL-4体外培养7 d,并于培养的第5天加入不同刺激因子,并将细胞分为4组:阴性对照组、阳性对照组(20 ng/ml TNF-α)、IL-27(20 ng/ml)组、IL-27+TNF-α组(即双细胞因子组,10ng/ml TNF-α+10 ng/ml IL-27)。用倒置显微镜观察培养7 d的DC形态,用流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD1a/CD83和CD80/CD86的水平,RT-PCR检测DC表面趋化因子受体CCR5、CCR7 mRNA的表达,混合淋巴细胞实验检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,Western blotting检测DC信号通路蛋白P-STAT1/STAT3的含量。结果:IL-27组和双细胞因子组诱导7 d时DC呈现典型的成熟形态学特征;DC表面CD1a和CD83双阳性表达[(35.75±4.10)%、(52.49±2.65)%vs(23.29±4.49)%,P<0.05]、CD80和CD86双阳性表达[(39.06±1.61)%、(54.10±0.46)%vs(22.66±3.20)%,P<0.05]、趋化因子受体CCR7 mRNA[3.98±0.09、4.75±0.11 vs 3.09±0.18,P<0.05]和转录因子蛋白P-STAT1/STAT3水平均较阴性对照组明显上调,而CCR5 mRNA[0.99±0.03、0.61±0.02 vs 1.23±0.26,P<0.05]表达含量则明显下降;IL-27组和双细胞因子组DC均可明显刺激T细胞增殖,且随DC与T细胞比例增加而增强,以双细胞因子组的刺激作用更为明显。结论:细胞因子IL-27可以直接或者协同TNF-α诱导人DC分化成熟,并增强DCs的抗原提呈功能,其机制可能与活化P-STAT1/STAT3信号通路有关。     

自体恶性黑色素瘤抗原激活的树突状细胞体外诱导免疫试验

树突状细胞(dendritic cells,DC)是迄今为止所知的抗原呈递能力最强的抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC).肿瘤患者因DC免疫功能低下致宿主抗肿瘤免疫无能.研究表明,人外周血单核细胞在体外用粒/巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)及白介素4(IL-4)诱导后,可培养出表达高水平MHCI、MHCII类抗原和CD80、CD86等因子的DC.本实验拟应用黑色素瘤患者外周血单核细胞,经GM-CSF及IL-4诱导后获得DC,再经自体肿瘤细胞冻融物冲击,在体外激活自体T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),观察其体外抗肿瘤作用.     

PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用

目的： 探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa with mannose sensitive hemagglutination pili,PA-MSHA）疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC）对调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的抑制作用。 方法： rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24 h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果： PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和 HLA-DR表达较对照组明显升高（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β（P<0.05）,CD4、CD25的表达及Foxp3 mRNA水平均较对照组明显降低（P<0.05）。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。 结论： PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。     

CIK、DC-CIK细胞对神经母细胞瘤细胞杀伤作用的研究

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（ CIK）与树突状细胞（ DC）共培养后对神经母细胞瘤（ neuro-blastoma,NB）细胞株的杀伤作用。方法：取健康人和肿瘤患者外周血单个核细胞（ PBMC）,加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,用流式细胞术测定诱导培养前后DC和CIK细胞的表型,MTT法测定不同组CIK细胞对NB细胞株的杀伤活性。结果：流式细胞仪检测健康人PBMC培养后CD3＋CD56＋淋巴细胞百分比以及对NB细胞株的杀伤活性均显著高于肿瘤患者（ P〈0.05）。此外,与单纯CIK细胞相比,DC-CIK细胞具有更强的杀伤NB细胞株的活性（ P〈0.05）。结论：DC-CIK细胞是一种细胞毒作用高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。健康人和肿瘤患者的PBMC经诱导培养获得的CIK细胞有显著差别,为临床进一步提高CIK细胞的治疗效果提供了实验依据。     

Can cancer cells transform normal host cells into malignant cells?

A human prostate tumour cell line, LNCaP C4-2, when injected into athymic male nude mice, produced tumours containing: (1) only human cancer cells similar to those injected; (2) only murine stromal cells containing abnormal chromosome constitutions; or (3) both human prostate cancer cells similar to those injected and the transformed murine stromal cells with altered chromosome constitutions. Karyotypic analysis of murine metaphases from all the host-derived tumours showed mostly pseudodiploid chromosome constitutions, with multiple copies (amplification) of mouse chromosome 15 and the absence of a typical Y chromosome. Fluorescence in situ hybridization analysis of these murine cells, using a biotin-labelled total human DNA painting probe, further demonstrated the absence of human DNA and the presence of only mouse metaphase and interphase cells in these transformed stromal cells. These results suggest that cancer cells are capable of inducing neoplastic transformation in stromal cells of the host organ by some, as yet unknown, epigenetic mechanism(s).     

肝干细胞与肝癌干细胞

正常肝干细胞在致癌因素作用下发生基因突变，获得无限增殖能力成为肿瘤干细胞，肿瘤干细胞分化成各种分化等级、表型不一的肿瘤。在正常肝干细胞转化成肝癌干细胞的过程中保留了一些干细胞表型特征和进一步向相对成熟细胞分化的能力。正常肝干细胞是肝癌重要起源。     

Melanoma cells interfere with the interaction of dendritic cells with NK/LAK cells

Dendritic cells (DCs) and natural killer (NK) cells are key players at the interface between innate resistance and acquired immunity. NK cells can induce DC maturation, a differentiation process whereby DCs respond to a environmental stimulus and acquire the ability of eliciting adaptive immunity. Conversely, maturing DCs promote NK functions in vivo and in vitro. This interplay has important consequences on the immune response to pathogens and possibly to neoplastic cells. Here, we show that B16 melanoma cells actively modulate the interaction between DCs derived from bone marrow precursors and NK/LAK cells propagated from the spleen of C57BL/6 mice. DCs increased in a dose-dependent manner the ability of NK/LAK cells to kill melanoma cells and to produce cytokines. This activatory cross-talk entailed the production of IL-18 by DCs and of IFN-gamma by NK/LAK cells. Melanoma cells were not a passive target of NK activity; they regulated the outcome of the interaction between DCs and NK/LAK cells, inhibiting the in vitro production of cytokines as effectively as the genetic deletion of IL-18 or IFN-gamma. Interference with the NK/DC interaction possibly represents a mechanism used by growing tumors to evade the immune response.     

神经干细胞和脑肿瘤干细胞研究进展

神经干细胞(NSC)是中枢神经系统(CNS)内具有自我更新和多向分化潜能的干细胞,主要存在于脑室下区域(SVZ),NSC通过自我更新和分化维持正常CNS的形态和功能。可塑性(plastici- ty)是NSC的重要特征,由NSC所处的微环境(microenvironment)决定。脑肿瘤干细胞(BTSC)是脑肿瘤中与NSC相似的细胞,是脑肿瘤发生和生长的细胞来源。BTSC可能起源于NSC,是NSC可塑性的表现,导致NSC向BTSC分化的机制可能是微环境作用的结果。     

甲状腺干细胞及其与甲状腺肿瘤干细胞的关系

甲状腺干细胞是存在于甲状腺组织内具有自我更新及增殖分化潜能的细胞.甲状腺肿瘤干细胞是甲状腺肿瘤组织中与甲状腺干细胞相似的细胞,是甲状腺肿瘤发生发展的细胞来源.研究表明,甲状腺干细胞是甲状腺肿瘤干细胞的重要来源,其恶变时所处的分化阶段对甲状腺肿瘤的恶性程度有重要影响.     

神经干细胞和脑肿瘤干细胞研究进展

神经干细胞（NSC）是中枢神经系统（CNS）内具有自我更新和多向分化潜能的干细胞，主要存在于脑室下区域（SVZ），NSC通过自我更新和分化维持正常CNS的形态和功能。可塑性（plasticity）是NSC的重要特征，由NSC所处的微环境（microenvironment）决定。脑肿瘤干细胞（BTSC）是脑肿瘤中与NSC相似的细胞，是脑肿瘤发生和生长的细胞来源。BTSC可能起源于NSC，是NSC可塑性的表现，导致NSC向BTSC分化的机制可能是微环境作用的结果。     

自然杀伤细胞与肿瘤细胞之间的免疫编辑

自然杀伤细胞(nature killer cell, NK)是机体天然免疫的主要承担者，NK细胞表面表达的抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(inhibitory killer cell immunoglobulinlike receptor，KIR)和活化性受体NKG2D是调节NK细胞杀伤活性的主要受体。NK细胞通过其细胞表面的活化性受体和肿