单克隆抗体相对亲和力和特异性的测定

在单克隆抗体的制备中,亲和力和特异性的测定是非常重要的。实验证明单抗的特异性不是绝对的,我们也发现在免疫酶组化染色过程中,当单抗浓度达到一定水平时会出现交叉反应,即抗3型(或7型)腺病毒单抗与7型(或3型)腺病毒出现反应。因此有必要测定单抗特异性,以便筛选高特异性的单抗。     

家兔心肌缺血时α1—肾上腺素能受体的变化

本文用[~3H]-哌唑嗪为配基,测定了家兔心肌缺血前、心肌缺血后缺血区及非缺血区α_1-受体数目及亲和力的变化。发现家兔心肌缺血后15min缺血区α_1-受体明显增加,并持续到30min;45min时开始降低。非缺血区缺血前、后α_1-受体数目均无明显变化。α_1-受体亲和力在心肌缺血后缺血区和非缺血区均无显著变化。     

流行性脑脊髓膜炎患儿血浆HNE α_1-AT及Fn含量的变化

中性粒细胞的活化产物粒细胞弹性蛋白酶(NE),以及α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)和纤维结合蛋白(Fn)与感染,休克、烧伤等发病关系密切。本文测定流行性脑脊髓膜炎(流脑)患儿治疗前后血浆中上述三个指标的变化,为阐明发病原理和疗效机理积累资料。以从人中性粒细胞中提取出的人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE),为抗取制备兔抗HNE之抗体,酶联测定法测HNE含量,以单扩散法测定α_1-AT及Fn含量。测定值以均值±标准误((?)±SE)表     

脾淋巴细胞α2—肾上腺素能受体的特征和功能的实验研究

用放射配基结合法研究大鼠脾淋巴细胞α_2-肾上腺素能受体的特征。~3H-可乐定(~3H-CLO)与脾淋巴细胞的结合呈现快速(t1/2:2min)、可逆(t1/2:3—4min)、高亲和力(K_D:6.57±SD1.63nM)、可饱和性(B_(?a):72.4±SD13.4fmo1/10~?细胞)(n=6)和立体结构特异性等特征,表明脾淋巴细胞存在α_2-肾上腺素能受体。肾上腺素能受体激动剂抑制~3H-CLO结合的效能顺序是:肾上腺素>去甲肾上腺素>异丙肾上腺素,表明为α_2亚型。竞争实验资料的计算机分析提示,脾淋巴细胞α_2-肾上腺素能受体存在高、中、低三种亲和力状态,彼此相差2～3个数量级。在体外诱生抗体中,10umo1.L~(-1)可乐定显著抑制诱生的IgM量,可被10umol:L~(-1)酚妥拉明阻断,表明脾淋巴细胞α_2肾上腺素能受体激活抑制抗体应答。     

糖尿病患者尿液α1—m,AlbRIA

我们对95例糖尿病患者进行尿液α_1-m(U-α_1-m)、尿A1b(U-A1b)RIA,并相应空腹血清作甘油三酯,胆固醇含量测定,现将结果分析如下。 资料和方法 一、资料;95例糖尿病患者(男64例,女31例),年     

高、低亲和力糖皮质激素受体同源性的研究

我们以前的工作表明糖皮质激素(GC)靶细胞上除存在经典的高亲和力、低容量GC受体(GR_H)外,尚存在低亲和力GC受体(GR_L)。GR_L可介导大剂量GC的作用。本文初步探讨了GR_L与GR_H在分子结构以及基因水平上的相互关系。利用两种抗大鼠肝GR_H单克隆抗体(MabN250:为抗GR_H N端免疫活性区的单抗,MabBuGR_1:为抗GR_H DNA结合区的单抗)制备Mab-Sepharose 4 B亲和层析柱,将[~3H]曲安缩酮(TA)与大     

用人McAb检测血清中α_2M含量

<正> α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,α_2M)具有重要的免疫调节作用。α_2M的测定对多种疾病的临床研究有重要价值。我们用自己研制的抗人α_2M单克隆抗体(McAb)建立了火箭免疫定量技术检测人血清中α_2M含量,为McAb的临床实际应用提供了可能。     

抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定

目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定.方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力.结果:检测方法中抗原、酶标抗体的最佳稀释度分别为1∶800和1∶10 000,单抗的相对亲和力分别为:4A9约在5.242 μg/ml(1∶600),4C3约在0.763 μg/ml(1∶5 000),9F12约在0.127 μg/ml(1∶40 000),即9F12＞4C3＞4A9.结论:用建立的ELISA方法测定了3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力,将为进一步研究口蹄疫病毒而选取合适的单抗提供理论依据.     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定

本研究应用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),对6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(单抗)的抗原结合位点及相亲和力进行了测定。通过ELISA相加试验证实,6株单抗识别5个不同的抗原位点。2H_4和2F_2的相加指数小于50％,表明二者识别相同的抗原位点,而其余单抗则具有不同的抗原位点。由本测定可知,JEV表面至少有5种不同的抗原决定簇。 从50％最大结合的单抗浓度分析可知,6株单抗的相对亲和力为nG_2>2H_4>2F_2>mG_9     

血清唾液酸、岩藻糖和急性期蛋白测定对甲胎蛋白阴性肝癌的诊断

本文对正常人58例、肝硬化35例、AFP(+)肝癌31例、AFP(-)肝癌33例患者血清唾液酸、岩藻糖及五种急性期蛋白[α_1—酸性糖蛋白(α_1—AG)、触珠蛋白(HP)α_1—抗胰蛋白酶(α_1—AT)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TF)等]进行测定。结果表明AFP(一)肝癌组血清唾液酸、岩藻糖、α_1—AG、HP和α_1—AT五项指标均非常显著地高于对照组,其中岩藻糖、α_1—AG与HP又比AFP(+)肝癌为高(P<0.0     

靶向IL-12 p40和TNF-α的双功能抗体可抑制小鼠银屑病发生北大核心CSCD

目的构建具有能同时阻断白细胞介素12(IL-12)/IL-23 p40与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的双功能抗体,并对其生物学功能进行鉴定,观察其对小鼠银屑病的阻断效果。方法根据已有的阿达木单抗(adalimumab)和优特克单抗(ustekinumab)蛋白序列,设计、构建并制备了全新的双功能抗体Bi AU003、Bi AU022和Bi AU023。采用ELISA检测抗原抗体结合能力;用TNF-α和双功能抗体处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入FITC标记的内皮白细胞黏附分子1(ELAM-1)抗体,经流式细胞术检测ELAM-1的表达量;用IL-12和双功能抗体处理经IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC),并用ELISA检测上清液中γ干扰素(IFN-γ)的量;体外实验采用双功能抗体治疗IL-12和TNF-α诱导的银屑病小鼠,HE染色检测病变皮肤厚度。结果3种双功能抗体对其相应的抗原都有较强的亲和力,能明显抑制ELAM-1蛋白的表达和IFN-γ的分泌,并且明显抑制小鼠的银屑病形成,其效果与现有的抗体药阿达木单抗和优特克单抗相当或更优。结论新构建的3种双功能抗体Bi AU003、Bi AU022和Bi AU023,是TNF-α和IL-12/IL-23 p40的阻断剂,能有效阻断小鼠银屑病形成。     

癌症患者血清唾液酸、岩藻糖及五种急性期蛋白含量的观察

本文对64例原发性肝癌、63例鼻咽癌、34例喉癌、20例胃癌、16例结肠直肠癌、60例良性疾患及68例正常人血清SA、Fuc及五种App[α_1～酸性糖蛋白(α_1—AG)、α_1—抗胰蛋白酶(α_1—AT)、触珠蛋白(HP)、前白蛋白(PA)及转铁蛋白(TF)]含量进行测定。结果发现五个癌症组患者血清SA、Fuc、α_1—AG、α_1—AT及HP均非常显著地高于正常人(P<0.001),五个癌症组中,除喉癌组患者血     

应用替代评估方法评价西门子两检测仪测定尿液α_1-MG的一致性

目的对西门子BN~(TM)Ⅱ全自动蛋白分析仪(简称BN~(TM)Ⅱ)与西门子BNP特定蛋白分析仪(简称BNP)测定尿液中的α_1-微球蛋白(α_1-MG)结果进行一致性评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的GP29-A2文件要求分割试验样本,对室间质评不能提供能力验证的检测项目α_1-MG分别在BN~(TM)Ⅱ和BNP上进行双份重复测定。选取当日新鲜尿液样本(测定前离心取上清液)40份进行测定,分析浓度尽可能分布于检测项目的整个检测范围内,计算各自检测结果的均值、均值的差值及允许差异值(D)。结果 BNP上α_1-MG检测结果均落在BN~(TM)Ⅱ允许D范围内。两种检测仪器对α_1-MG检测结果一致性可以接受。结论BN~(TM)Ⅱ与BNP两检测仪器对于尿液中α_1-MG的检测结果基本一致,临床检测过程中可选用任何一种仪器进行α_1-MG的检测。     

TNF单克隆抗体的研制及其在内毒素休克中的作用

6株抗重组人肿瘤坏死因子单克隆抗体,其中5株是IgG1,1株是IgG2a。单抗AT-1、2、3对nhTNF-α具有较高中和活性,AT-4、5、6却未表现出中和活性或很弱。同时单抗AT-1、2、3还可以中和天然人和小鼠的TNF-α。这6株单抗均可以与nhTNF-α发生免疫沉淀反应,虽然其中AT-6较其他5株为弱。特异性实验表明,这6株单抗均不能中和人的TNF-β和人IFN,而、其中AT-1,2和AT-4,5,对人TNF-β具有免疫沉淀活性,但AT-3和AT-6却没有。这6株单抗均不与IFN发生免疫沉淀反应。肽_1和肽_2分别是nhTNF-α分子的一部分,其中肽_1是nhTNF-α分子的中间部分,肽_2是nhTNF-α分子的C末端部分,单抗AT-5与肽_1和肽_2均能发生反应,但另外5株却不能。体内实验表明,具有高中和活性和高免疫沉淀活性的单抗AT-1能较好地保护小鼠免遭致死剂量的LPS攻击,而具有高免疫沉淀活性,但中和活性很弱的AT-4保护作用很差。     

糖尿病患者尿中α1—mRIA

本文测定了糖尿病患者尿中α_1-m和β_2-m的浓度,以探讨它们在糖尿病早期诊断中的意义。 材料和方法 一、材料: (一)α_1-m试剂盒由中国原子能科学研究院同位素研究所提供;β_2-m由中国北方免疫试剂研究所提供。 (二)FMJ-87型γ计数器。 二/对象和方法:正常对照组34例(男性21例,女性13例),年龄34～46岁。糖尿病组53例(男性30例,女性23例),年龄49～61岁。所有受检者均排去晨尿后收集尿液,一小时后测定α_1-m和β_2-m都采用放射免疫分析法测定,所有操作均按操作说明书进行。 结果 糖尿病患者尿中β_2-m浓度与正常对照组相比,儿显著性差异(p<0.05)而α_1-m浓度与正常对照组     

重组人α2a型干扰素单克隆抗体的研制、特性鉴定及初步应用

应用常规方法建立了5株稳定分泌抗重组人α2a 型干扰素单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系1B8、2B6、3F1、4G5和5G10,并对其免疫学特性进行了较系统的鉴定.5株单抗均为 IgG1,特异性强,与重组人α1 型、γ型干扰素以及受体菌菌体蛋白成分无交叉反应.间接 ELISA 测定小鼠腹水单抗效价1:320,000～1:10,240,000,其中3F1和5G10单抗对重组人α2a 型干扰素具中和活性(中和效价均为1:10,000)。竞争结合 ELISA 证实5株单抗针对3种不同表位。用3F1和5G10单抗建立的夹心 ELISA 能检测到60pg/ml的重组人α2a 和α2b 型干扰素。3F1单抗用于制备亲和层析柱纯化重组人α2a 型干扰素结果与进口单抗NK2相当。     

不同年龄组血浆HNE、α_1-AT之正常值及SLE病人的变化

人中性粒细胞弹性蛋白酶(Human neutrophil elastase简称HNE)及其抑制剂α1-抗胰蛋白酶(α_1-Antitrypsin简称α_1-AT)的平衡失调与多种疾病的发病学有关。因目前缺乏中国人的血浆HNE、α_1-AT之正常值,常难于判断各种病人之测定值的病理生理意     

4株鼠抗人B7-1分子单抗的制备及其生物学活性的鉴定

目的：制备鼠抗人B7—1分子(mAb)单抗及研究其生物学活性。方法：以人多发性骨髓瘤细胞转人B7-1基因细胞株XG7-B7为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠抗人B7—1分子单抗；以Western blot及间接免疫荧光标记法鉴定其特异性和亲和力；采用^3H—TdR掺入实验和Annexin-Ⅴ染色分析测定该单抗的生物学功能。结果：获得了4株持续分泌抗人B7—1分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为1F11、3H8、6H2和7B10，其分泌的单抗类别分属于小鼠IgG1和IgM；4株单抗均具有良好的特异性和亲和力；1F11、3H8和6H2能部分组断B7—1分子基因转导细胞介导的共刺激信号，从而抑制T细胞的增殖效应(抑制率21％—52％)；且能诱导天然表达B7—1分子的人B系淋巴瘤细胞Raji的凋亡。结论：成功研制4株功能性抗人B7—1分子抗体，这些抗体在抗异体组织器官移植排斥反应及在B系淋巴瘤的治疗中具有潜在的应用价值。     

运动神经-肌肉接点的突触前α-受体属于α_1-受体

Langer曾按α-受体的分布将突触后α-受体划分为。α_1-受体,将突触前α-受体划分为α_2-受体。根据α-受体与选择性激动剂和/或阻断剂的相互作用,已有大量证据表明,静脉平滑肌等效应器细胞上存在突触后α_2-受体。同样,亦有证据提示,突触前膜上的α-受体亦不仅限于α_2-受体。 最近,Snider等在大鼠膈神经-膈制备发现,去甲肾上腺素(NA,50μM)可使刺激膈神经引起的乙酰胆碱(Ach)释放增加183％;非选择性α-受体阻断剂酚妥拉明(10μM)和选择性α_1-受体阻断剂WB4101(10μM)予处理可完全阻断NA引起的Ach释放增加;     

分泌高效价抗催产素单抗杂交瘤细胞系的建立

为进一步研究催产素分子的生理功能及空间结构 ,制备识别其特有表位的单抗。用改良的碳二亚胺二步法交联催产素和牛甲状腺球蛋白 ,用常规方法制备针对催产素分子的单抗 ,测定了抗体的亚类、亚型和相对亲和力 ,并采用竞争ELISA法 ,检测各株细胞分泌的单抗和几种催产素的拟似物的交叉反应程度。结果制备出了 3株分泌高效价抗体的杂交瘤细胞 4G11、 2B11和 3F1,其亚类均为IgG1,亚型均为κ型 ,相对亲和力均较高。 3株中 4G11和 2B11可以特异性地和催产素反应 ,而 3F1与AVP、VAS及ASU有较强的交叉反应。催产素单抗可用于阻断催产素的生物学功能等研究