消瘀泄浊饮对慢性肾衰竭营养不良大鼠残肾组织保护作用机制研究

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)营养不良大鼠残肾组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)的影响。[方法]46只SD雄性大鼠,随机选取10只为正常组,其余大鼠采用5/6肾切除同时予以低蛋白饮食制作CRF营养不良大鼠模型,观察营养不良发生时间,随机分成模型组、复方ɑ-酮酸组(开同组)、消瘀泄浊饮组,每组12只,治疗4周后检测血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、白蛋白(albumin,ALB)水平,应用光学显微镜(HE染色)观察肾组织病理学变化,用免疫组化法检测残肾组织MMP-9、TIMP-1、FN、ColⅣ的表达。[结果]CRF大鼠在术后10周出现营养不良。与治疗后模型组比,消瘀泄浊饮组大鼠血清ALB明显增加(P0.05),营养状况和肾功能明显改善(P0.05),消瘀泄浊饮组对于肾功能的改善要优于开同组(P0.05),消瘀泄浊饮组肾脏病理组织损害轻于开同组;与正常组比,模型组TIMP-1、FN、ColⅣ表达增强,MMP-9表达减少(P0.05);与模型组比,消瘀泄浊饮组MMP-9的表达明显增强,TIMP-1、FN、ColⅣ表达明显减弱(P0.05)。[结论]消瘀泄浊饮可通过上调MMP-9、下调TIMP-1表达,减少FN、ColⅣ在肾组织中沉积,从而起到保护CRF营养不良大鼠残肾组织的作用。     

消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠保护作用的机制研究

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠肾素(renin)、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、消瘀泄浊饮组、洛汀新(盐酸贝那普利)组各10只。采用环孢素灌胃及低盐饮食建模,治疗4周后检测大鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿肌酐、24小时尿蛋白总量,并计算肌酐清除率(creatinine clearance,Ccr),用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠的肾脏组织病理学改变,免疫组化法观察肾脏组织IV型胶原(collagen-Ⅳ,Col-Ⅳ)表达情况;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)法检测血清及肾组织Renin水平,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测肾脏组织AngII、TGF-β_1m RNA表达情况。[结果]相比于模型组,洛汀新组及消瘀泄浊饮组大鼠Scr、Bun、Ccr及24小时尿蛋白明显改善,血清肾素水平下降,肾组织AngⅡ、TGF-β_1m RNA及肾素、Col-Ⅳ表达下调,肾脏病理纤维化程度明显降低,消瘀泄浊饮组大鼠死亡率低于洛汀新组和模型组。[结论]消瘀泄浊饮可通过下调Renin、AngⅡ表达、抑制TGF-β信号转导,延缓慢性环孢素肾病的进展。     

消瘀泄浊饮对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间质转分化及PAR-3表达的影响

[目的] 通过检测极性蛋白-3(partitioning defective-3,PAR-3)在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所导致的肾间质纤维化大鼠中的表达,探讨消瘀泄浊饮对肾小管上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。[方法] 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型(UUO)组、西药(贝那普利)组和中药(消瘀泄浊饮)组。从术后1 d起,每天分别给予消瘀泄浊饮药液10.4 g/(kg·d)和盐酸贝那普利溶液1 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组以等体积0.9%氯化钠注射液灌胃4周。给药结束后分别检测白蛋白(albumin,ALB)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)水平;取手术侧肾组织分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及Masson染色进行相关病理检测;采用免疫荧光和免疫印迹法分别检测肾组织PAR-3的表达;采用免疫组化检测肾组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达。[结果] 与假手术组比较,模型组、西药组、中药组BUN、Scr、UA水平均增高,差异有统计学意义(均P＜0.05);与模型组比较,中药组BUN、Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05);与西药组比较,中药组Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均升高(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均降低(均P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织PAR-3水平均下降(均P＜0.05);与模型组比较,中药组肾组织PAR-3表达升高(P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织α-SMA表达增加,E-cadherin表达减少(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组大鼠肾组织α-SMA表达减少,E-cadherin表达增加(均P＜0.05)。[结论] UUO大鼠肾组织PAR-3表达减少,消瘀泄浊饮能通过上调肾组织PAR-3表达、阻止肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,起到改善肾间质纤维化的作用。     

消瘀泄浊饮对造影剂肾病大鼠保护作用的实验研究

目的探讨消瘀泄浊饮对造影剂肾病(CIN)大鼠是否具有保护作用及其相关机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组:正常组(A组)、CIN组(B组)、消瘀泄浊饮低剂量组(C组)和消瘀泄浊饮高剂量组(D组)。造模后48 h处死大鼠,测定各组大鼠血清肌酐、尿素氮水平,HE和PAS染色观察各组肾脏组织病理变化,Western Blot检测各组Bax、Bcl-2、Caspase-3、P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR蛋白表达量。结果造模48 h后,与A组相比,B组大鼠血清肌酐和尿素氮水平均明显升高(P0.05);肾小管上皮细胞出现空泡样变性、管腔变大及肾间质水肿,肾小球组织未发现明显改变;Bax/Bcl-2和Caspase-3蛋白表达上调(P0.05),且P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR蛋白表达同时上调(P0.05)。与B组相比,C、D组血清肌酐和尿素氮水平明显下降(P0.05);肾小管上皮空泡样变性减少;Bax/Bcl-2和Caspase-3蛋白表达下调(P0.05),且P-Akt/Akt和P-m TOR/mTOR蛋白表达同时下调(P0.05)。结论消瘀泄浊饮对造影剂肾病大鼠具有预防作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路过度激活从而抑制肾小管上皮细胞凋亡。     

消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠ACE2-Ang(1-7)-MAS轴相关组分表达的影响

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)[angiotensin converting enzyme 2-angiotensin(1-7),ACE2-Ang(1-7)]-MAS轴相关组分表达的影响。[方法] 40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、消瘀泄浊饮组和贝那普利组,每组各10只。采用3mg·mL-1的环孢素A溶液灌胃及低盐饮食建模,灌胃4周后检测大鼠血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,并计算内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr);以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察大鼠肾组织病理学改变,免疫组化法检测肾组织ACE2、Ang(1-7)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)的表达;以酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清及肾组织ACE2、Ang(1-7)和肾素含量。[结果]与空白对照组比较,模型组大鼠BUN、Scr水平明显升高,Ccr明显下降(均P0.01);与模型组比较,消瘀泄浊饮组和贝那普利组大鼠BUN、Scr水平和Ccr明显改善(P0.01,P0.05,P0.05)。与空白对照组比较,模型组肾组织ColⅣ阳性染色面积、总光密度明显升高(均P0.01),而ACE2、Ang(1-7)阳性染色面积、总光密度均升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,消瘀泄浊饮组和贝那普利组肾组织ColⅣ阳性染色面积、总光密度下降(均P0.01),肾组织ACE2、Ang(1-7)阳性染色面积、总光密度明显升高(均P0.05)。ELISA检测显示,与空白对照组比较,模型组肾组织和血清中肾素含量均显著升高(P0.01,P0.01),肾组织中ACE2含量显著升高(P0.05),Ang(1-7)含量显著下降(P0.05);血清ACE2、Ang(1-7)含量显著升高(均P0.01)。与模型组比较,贝那普利组肾组织中肾素含量降低(P0.05),而消瘀泄浊饮组和贝那普利组血清中肾素含量也降低(均P0.05);两组肾组织ACE2含量升高(P0.05),血清ACE2含量下降(P0.01);而肾组织和血清Ang(1-7)含量均升高(均P0.05);肾组织炎性细胞浸润及纤维化程度明显降低。消瘀泄浊饮组和贝那普利组数据差异无统计学意义(P0.05),两组肾组织炎性细胞浸润及纤维化程度也无明显差异。[结论]消瘀泄浊饮通过激活ACE2-Ang(1-7)-MAS轴,减少肾组织ColⅣ的沉积,从而延缓慢性环孢素肾病进展。     

消瘀泄浊饮对糖尿病肾病小鼠肾脏足细胞凋亡及HIF1α表达的调控作用

[目的]探讨消瘀泄浊饮对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠肾脏足细胞凋亡的保护作用及对低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF1α)的影响。[方法]选用6只db/m小鼠为阴性对照组,18只db/db小鼠随机分为DKD模型组、低剂量消瘀泄浊饮组、高剂量消瘀泄浊饮组,每组6只。灌胃12周后,检测尿液中尿蛋白、β₂-微球蛋白(β₂-microglobulin,β₂-MG)、尿白蛋白/肌酐(albumin/creatinine ratio,Acr)、尿β₂-微球蛋白/肌酐(β₂-microglobulin/creatinine ratio,β₂-MG/Ucr)及血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白蛋白(albumin,Alb)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum cre...     

化浊方对肾小球硬化大鼠肾组织TRPC6 mRNA表达的影响

目的:观察化浊方对大鼠肾小球硬化模型瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 mRNA(TRPC6 mRNA)表达的影响,探讨其延缓肾小球硬化的作用机制。方法:72只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组各6只,模型组、化浊方高、中、低剂量组及厄贝沙坦组各12只,造模后用化浊方治疗8周,检测治疗前及治疗后24 h尿蛋白定量、肾功能,显微镜下观察肾脏病理,荧光定量PCR检测肾组织TRPC6 mRNA表达。结果:治疗8周后,各治疗组24 h尿蛋白定量、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)均低于模型组(P0.05),肾脏病理显示大鼠肾小球纤维增生较模型组改善,均以高剂量组改善明显。模型组大鼠TRPC6 mRNA表达增高,各治疗组肾脏TRPC6 mRNA表达较模型组低(P0.05)。结论:化浊方能降低肾小球硬化模型大鼠24 h尿蛋白、Scr、BUN及改善肾小球纤维增生,其机制可能是通过下调大鼠肾脏TRPC6 mRNA的表达而延缓肾小球硬化。     

消瘀泄浊饮对慢性肾脏病2～4期患者Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)2～4期患者辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory cells,Treg)免疫平衡的影响。[方法]选取CKD 2～4期气虚夹瘀型患者共80例,随机分为两组:对照组40例,仅予基础治疗;治疗组40例,除基础治疗外加用中药汤剂消瘀泄浊饮治疗,1剂/d,分早晚两次服用。治疗12周后,比较两组治疗前后外周血Th17、Treg细胞占CD+4T细胞的比例和相关指标变化情况,对比总结其临床疗效。[结果]治疗组治疗后,Th17、血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白定量(24hour urinary protein quantity,24UPr)水平较治疗前明显下降(P0.01),血低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平较治疗前下降(P0.05),白蛋白(albumin,ALB)水平较治疗前明显升高(P0.01),Treg水平较治疗前升高(P0.05)。治疗后治疗组Th17、Scr、BUN水平低于对照组(P0.05)。治疗组总体疗效评价中总有效率42.5%,明显高于对照组(P0.01)。[结论]消瘀泄浊饮配合复方α-酮酸片等基础治疗,能够提高CKD2～4期气虚夹瘀型患者Treg细胞水平,降低Th17细胞水平,恢复Th17/Treg免疫平衡状态,同时能够改善肾功能,延缓CKD病情进展。     

益气泄浊和络方联合中药灌肠影响CKD3-4期气虚湿瘀型患者中医证候积分的临床观察

目的观察益气泄浊和络方联合中药灌肠治疗CKD3-4期气虚湿瘀型患者临床疗效,并探讨其对患者中医证候积分的影响,检测肾小球滤过率(e GFR)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys C),旨在延缓慢性肾脏病患者的病程进展,提高生活质量,改善远期预后。方法将60例患者随机分为治疗组30例和对照组30例,治疗组在基础治疗上采用益气泄浊和络方联合中药灌肠治疗,对照组在基础治疗上加用肾衰宁治疗。疗程12周。比较两组治疗前后e GFR、BUN、Scr及中医证候积分的变化。结果中医证候综合疗效比较,治疗组和对照组总有效率分别为80.0%(24/30)和50.0%(15/30),组间比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗前后综合疗效比较:治疗组和对照组总有效率分别为86.6%和73.3%,组间比较,差异有统计学意义(P0.05);两组治疗后肾小球滤过率(e GFR)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys C)与治疗前比较,差异有统计学意义(P0.05);两组组间比较尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys C),差异有统计学意义(P0.05),组间肾小球滤过率(e GFR)比较差异无统计学意义(P0.05)。结论益气泄浊和络方联合中药灌肠可早期干预肾脏代谢及内分泌功能,减少并发症,提高生活质量,延缓进入终末期肾脏的风险。     

化浊方对肾小球硬化大鼠肾组织细胞因子TGF-β1表达的影响

目的:观察化浊方对肾小球硬化(GS)大鼠模型肾组织TGF-β1表达的影响,探讨其延缓GS的作用机制。方法:72只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组及模型组、化浊方高、中、低剂量组及厄贝沙坦组。采用尾静脉注射阿霉素、单侧肾脏切除建立肾小球硬化模型,予灌胃治疗8周后处死各组大鼠,检测治疗前后24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),HE染色后光镜下观察肾小球病理改变及肾小球硬化指数(GSI),免疫组化(IHC)检测肾组织TGF-β1的表达。结果:治疗8周后,各治疗组24小时尿蛋白定量、SCr、BUN的水平均低于模型组,肾脏病理显示大鼠肾小球硬化较模型组改善,以化浊方高剂量组明显。高剂量组大鼠肾脏TGF-β1表达明显低于模型组、中低剂量组及厄贝沙坦组。结论:化浊方可能通过抑制大鼠肾脏TGF-β1的表达,改善肾脏病理形态,延缓肾小球硬化。