脑缺血再灌注后脑梗塞周围区生长相关蛋白—GAP43表达的变化及外源性神经生

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后生长相关蛋白－４３（ＧＡＰ－４３）表达的变化规律及外源性神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。方法：成年健康雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠７２只,随机分为假手术组、自然恢复组、人工脑脊液组和ＮＧＦ治疗组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注（ＭＣＡＯ）动物模型,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后ＧＡＰ－４３的表达。结果：⑴脑缺血再灌注６ｈ后,缺血周围区ＧＡＰ－４３表达逐渐增高,第７天达高峰,以后逐渐降低,第２１天仍有表达。⑵应用外源性ＮＧＦ后,ＧＡＰ－４３表达较对照组有所增高,但无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：提示中枢神经系统损伤后,神经元具有再生和修复的可塑性,外源性ＮＧＦ对ＧＡＰ－４３的调节有特进一步研究。     

GAP—43表达与神经元生长,可塑性的关系

神经生长因子相关蛋白质（ＧＡＰ－４３）与神经元生长、神经突触连接重建以及神经再生长关系密切。通过对ＧＡＰ－４３表达时间、部位、调控和生理功能的研究，可更深入了解神经系统的生长及可塑性。     

表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒伴随病毒的产生

来源于维多利亚水母 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃ ｔｏｒｉａ)的绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)是近年来发现的一种新的报告基因 ,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点 ,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1 ] 。重组腺病毒伴随病毒 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ,ｒＡＡＶ)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点 ,是目前比较理想的基因治疗载体。构建表达ＧＦＰ的ｒＡＡＶ载体 (ｒＡＡＶ ＧＦＰ)对于…     

下丘脑弓状核内GABA神经元与P物质神经元相互关系的免疫电镜双标研究

为了探讨下丘脑神经内分泌功能的突触调控机制和Ｐ物质（ＳＰ）神经元与γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）神经元之间的相互关系，我们用包埋前免疫电镜ＰＡＰ双标技术，研究了大鼠弓状核内ＳＰ和ＧＡＢＡ神经元的超微结构分布。先以ＤＡＢ为呈色剂显示ＳＰ的免疫反应，然后用钢酸铵－ＴＭＢ法显示ＧＡＢＡ免疫反应，再经ＤＡＢ－氧化钴稳定后作免疫电镜研究。结果观察到，在弓状核内有大量含ＤＡＢ和ＴＭＢ免疫反应产物的神经元结构，ＤＡＢ反应产物为颗粒状或絮状沉淀，电子密度高，弥漫分布；ＴＭＢ反应产物呈针状或块状，散在分布。含ＤＡＢ免疫反应的结构有ＳＰ神经元的胞体、树突和轴突。含ＴＭＢ免疫反应的结构有ＧＡＢＡ神经元的胞体、树突和轴突。两种神经元均为中、小型细胞，在弓状核内混杂分布。含ＳＰ的轴突接受免疫反应阴性轴突的非对称性突触连接；含ＳＰ的树突与含ＧＡＢＡ的轴突形成对称性的轴一树突触。含ＧＡＢＡ的树突接受免疫反应用性轴突的非对称性突触连接，也接受含ＳＰ轴突的非对称性突触连接。本研究不仅在超微水平进一步证实了大鼠弓状核内存在着ＳＰ和ＧＡＢＡ神经元及其末梢，而且首次在形态学上为下丘脑氨基酸能神经元与肽能神经元之间的相互调控提供了超微结构依据。     

大鼠神经垂体内后叶加压素神经分泌末梢的GABA能神经支配的免疫电镜证实

为了探讨神经垂体内后叶加压素（ＶＰ）释放的γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）能神经调控，本研究用包埋前ＡＢＣ法结合免疫电镜双标技术，研究了大鼠神经垂体内ＶＰ能神经和ＧＡＢＡ能神经的超微结构分布及其相互联系。先用ＤＡＢ法显示ＧＡＢＡ免疫反应，然后用钼酸铵－ＴＭＢ法显示ＶＰ免疫反应，再用ＤＡＢ－氯化钴稳定后作免疫电镜包埋。电镜观察发现：在神经垂体内ＧＡＢＡ样免疫反应产物呈电子密度高的颗粒状沉淀，定位于神经末梢内的小清亮羹泡周围和线粒体膜上；ＶＰ样免疫反应产物呈电子密度高的不规则形块状或针状散在于神经分泌末梢内。ＧＡＢＡ样神经末梢分布于神经分泌末梢之间或紧贴毛细血管和垂体细胞，可与神经分泌末梢紧密接触甚至形成突触。ＶＰ样神经分泌末梢内含小透亮囊泡和大颗粒囊泡，并可与ＧＡＢＡ样轴突末梢形成突触。在这种情况下，ＧＡＢＡ样轴突为突触前成分，突触前、后膜呈对称性，突触间隙宽度小于２０ｎｍ，内含电子致密物质。以上结果证实，在大鼠神经垂体内ＶＰ释放受到ＧＡＢＡ神经的直接突触调控。     

脑啡肽对早期反应性胶质增生形态及其神经营养功能的影响

目的　研究脑啡肽对早期反应性胶质细胞形态、增殖及神经营养功能的影响。方法　在相差显微镜下观察反应性胶质细胞形态,３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验检测反应性胶质细胞增殖,以Ｇｒｉｅｓｓ反应测定亚硝酸盐含量表示一氧化氮（ＮＯ）量,原位杂交实验检测生长相关蛋白（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＡＰ－４３）ｍ ＲＮＡ 的表达。结果　脑啡肽能促进损伤边缘的胶质细胞向损伤裸露区伸出宽大扁平的突起,增强反应性胶质细胞３Ｈ－ＴｄＲ的掺入（Ｐ＜０．０５）,抑制其ＮＯ的生成（Ｐ＜ ０．０５）;经脑啡肽处理的反应性胶质细胞能增强神经元ＧＡＰ－４３ ｍ ＲＮＡ 的表达（Ｐ＜０．０５）。结论　脑啡肽增强反应性胶质增生的同时抑制了反应性胶质细胞ＮＯ 的生成而增强反应性胶质细胞的神经营养功能。     

听源性惊厥发作后中脑导水管周围灰质内c-fos基因的变化

目的 探讨中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）与听源性惊厥的关系。方法 用神经细胞Ｚ（Ｎｉｓｓｌ）染色和免疫细胞化学技术,观察听源性惊厥发作后易感大鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）ＰＡＧ内即早基因ｃ－ｆｏｓ的表达情况。结果 听源性惊厥发作２ｈ后,Ｐ７７ＰＭＣ大鼠ＰＡＧ的背侧亚区及背外侧亚区,尾侧段腹外侧亚区内出现大量Ｆｏｓ阳性神经元,Ｆｏｓ阳性神经元百分率显著高于对照组。     

表达人HGF／MBP融合蛋白的pMAL—MBP／HGF重组质粒的构建及鉴定

将人ＨＧＦ完整编码区ｃＤＮＡ片段插入ＭＢＰ表达型ｐＭＡＬ－Ｃ２载体质粒中，构建了表达人ＨＧＦ／ＭＢＰ融合蛋白的ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＨＧＦ重质粒。表达的ＨＧＦ／ＭＢＰＧＥ分析分子量约为１１０ｋＤ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ表明能被兔抗ＭＢＰ抗体和抗人ＨＧＦＭｃＡｂ所识别。     

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的制备

ＣＦＰ10和ＥＳＡＴ6都是结核分枝杆菌(Ｍ .ｔｂ)特有的、有良好抗原性的分泌性蛋白 ,将其编码基因 1ｈｐ和ｅｓａｔ6用ＧｅｎｅＳＯＥｉｎｇ法通过Ｌｉｎｋｅｒ (Ｇｌｙ4 Ｓｅｒ) 3构建成融合基因 ,并克隆入ｐＱＥ30质粒 ,表达、纯化、鉴定ｒＣＦＰ10 ＥＳＡＴ6 ,为其应用于Ｍ .ｔｂ感染的诊断和预防奠定基础。1 1ｈｐ ｅｓａｔ6基因的构建 :以已构建的ｐＱＥ30 ＣＦＰ10质粒为模板 ,用引物(Ｐ1) 5′ ＣＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＣ 3′和 (Ｐ2 ) 5′ ＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＴＴＣＣＧＣＣＡＣＣＧＣ…     

大肠癌表皮生长因子受体和p53蛋白表达与临床病理特？…

为了研究大肠癌表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和ｐ５３蛋白表达与病理特征和预后的关系，应用免疫组化检测ＥＧＦＲ和ｐ５３在６１例大肠癌中的表达，结果提示：正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ和ｐ５３阳性表达，而两者在大肠癌均有较高表达（７７．０４％和５５．７５％）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ〈０．０５）。ｐ５３表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ〈０．０５）。大肠癌生存率随ＥＧＦＲ和ｐ５３     

链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体

目的 根据链球菌蛋白Ｇ与人抗体的Ｆａｂ片段有弱结合位点的行生,探索应用蛋白Ｇ亲合纯化原核表达的人源ｍＡｂ片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据。方法 扩增抗ＨＢｓ＋菌株。经ＩＰＴＧ诱导表达后制备表达产物上清,上商品化链球菌蛋白Ｇ亲合胶（ＧａｍｍａＢｉｎｄ）反应。ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白。梯６度酸洗脱结合ＵＶ检测观察解离效果。聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）检验纯化产物的纯度,Ｄｏｔｙ Ｂ     

大鼠肾上腺的NADPH,NPY,CGRP,SP,c—fos细胞化学特性

目的 探讨肾上腺内分泌组织和神经组织的双重组织学特性。方法 组织化学和免疫组织化学技术,在光学显微下观察ＮＡＤＰＨ、ＮＰＹ、ＣＧＲＰ、ＳＰ、ｃ－ｆｏｓ在大鼠肾上腺的分布。结果 肾上腺皮质分布有ＮＰＹ阳性神经细胞和神经纤维、ＣＧＲＰ阳性神经纤维;肾上腺髓质分布有ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经细胞和神经纤维、ＣＧＲＰ阳性神经纤维、ＳＰ阳性神经纤维、ｃ－ｆｏｓ阳性神经细胞和神经纤维。肾上腺皮质球状带、网状带、束状带细胞均ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性,髓质部分嗜铬细胞ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性,部分嗜铬细胞ＮＰＹ阳性,部分嗜铬细胞ＣＧＲＰ阳性,部分嗜铬细胞ＳＰ阳性。结论 大鼠肾上腺接受广泛的非经典递质的神经支配,特别是肽能神经支配的肾上腺实质细胞及髓质嗜铬细胞,能分泌多种神经肽物质。提示肾上腺的内分泌活动不仅受到复杂的神经调节而且也受到自身的活     

大肠癌表皮生长因子受体和p53蛋白表达与临床病理特征和预后的关系

为了研究大肠癌表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和ｐ５３蛋白表达与病理特征和预后的关系，应用免疫组化检测ＥＧＦＲ和ｐ５３在６１例大肠癌中的表达。结果提示：正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ和ｐ５３阳性表达，而两者在大肠癌均有较高表达（７７．０４％和５５．７５％）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。大肠癌生存率随ＥＧＦＲ和ｐ５３表达增高而降低，其中两者４年生存率＞６５％表达组均明显低于＜２５％组（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦＲ－ＬＩ和ｐ５３－ＬＩ与生存期均有明显负相关。结果表明：ＥＧＦＲ和ｐ５３表达与大肠癌的进展程度有关，该两项指标对大肠癌临床诊治和预后的评估有重要价值。     

血小板源性生长因子和rasP21在实验性肝癌发生中的作用

为探讨血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）是否参与肝癌发生，应用免疫组化技术，观察了在二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌变过程中，ＰＤＧＦ－β多肽和ｒａｓＰ２１在肝细胞内的表达。结果显示，诱癌早期即检测到肝细胞内有高表达的ＰＤＧＦ－β多肽和Ｐ２１。随诱癌过程的进行，这些阳性细胞增多，形成灶和结节，并常见结节周边细胞反应较强。此外，ＰＤＧＦ－β肽和Ｐ２１常呈联合表达现象。同时对甲胎蛋白（ＡＦＰ）的检测也发现，其阳性分布与前者重合，提示异常表达的ＰＤＧＦ是早期肝癌变过程中特定的事件，并可能以自泌方式并通过ｒａｓＰ２１信号传导途径刺激大鼠肝细胞增生和癌变。     

新型酵母表达系统—Pichia.pastoris高效分泌型表达病毒生长因 …

目的：实现痘苗病毒生长因子的高效分泌型表达。方法：构建ｐＰＩＣ９Ｄ／ＶＧＦ表达载体,扩增引物分别为Ｐ１：ＴＡＴＡＣＧＴＡＧＡＴＡＧＴＧＧＴＡＡＣＧ,Ｐ２：ＴＡＧＡＡＴＴＣＴＴＡＡＧＴＧＴＴＴＧＧＴＴＴＴ;采用Ｐｉｃｈｉａ．ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母表达系统。结果：经酶切鉴定,证明克隆的基因是正确的;经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,证明转化基因组中确实整合有ＶＧＦ基因,其分子量为９．６ｋＤ;得到了高效分泌型ＶＧＦ     

生长相关蛋白（GAP－43）在大鼠中枢神经系统的分布

生长相关蛋白（ＧＡＰ－４３）在大鼠中枢神经系统的分布（第三军医大学组织学胚胎学教研室，重庆６３００３８　　　　　　　　　王传松，蔡文琴）生长相关蛋白（ｇｒｏｗｔｈａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＡＰ－４３）在中枢神经系统内的分布国内尚未见报道。...     

AAV载体介导的人β_2-AR、EGFP基因导入心肌细胞的研究

目的 :观察腺相关病毒 (ａｄｅｎｏ -ａｓｓｏｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ,简称ＡＡＶ)载体介导的人β2 肾上腺素能受体 (简称β2 -ＡＲ)基因和增强型绿色荧光蛋白基因 (简称ＥＧＦＰ)对心肌细胞的转染及其表达。方法 :构建以串联方式携带 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ基因的ＡＡＶ载体 ,转染大鼠的心肌细胞 ,检测心肌细胞 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ的表达及ｃＡＭＰ的含量。结果 :Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示转染的心肌细胞表达人 β2 -ＡＲｍＲＮＡ ;Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人β2 -ＡＲ ;并在荧光显微镜下可观察到心肌细胞表达…     

PAI—1在TGF—β1基因和反义TGF—β1基因转染人肝癌？…

目的：通过对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）转染ＴＧＦ－β１基因及反义ＴＧＦ－β１基因,观察该细胞ＰＡＩ－１表达的变化。方法：采用电穿孔法进行基因转染,并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法另以鉴定后,分别应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ观察该细胞表达ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的变化。结果：过表达的ＴＧＦ－β１细胞克隆ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达均高于对照组,而低表达ＴＧＦ     

免疫应答中小鼠脾GAP-43神经支配的可塑性--神经纤维数量和分布的变化

为了解脾交感神经在免疫功能增强时的形态变化，用免疫组织化学方法观察了ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾内生长相关蛋白样免疫反应（ＧＡＰ－４３－ＬＩ）性神经在结核菌素衍生蛋白（ＰＰＤ）诱发的免疫反应高峰期数量和分布的变化。结果显示，动物在接受两次ＰＰＤ注射（２１ｄ＋７ｄ）后，脾ＧＡＰ－４３－ＬＩ神经纤维密度明显增加并伴有分布和形态的变化。于对照动物，脾ＧＡＰ－４３－ＬＩ神经纤维主要分布于血管周围，少量伸入动脉周围淋巴鞘的脾基质中，而在免疫刺激的动物，不仅血管周围的神经纤维明显增多，动脉周围淋巴鞘外层、边缘区和红髓等免疫应答活跃的部位也出现许多神经纤维。神经纤维分支和纤维上膨体明显增多。以上结果提示：免疫应答中脾神经成分发生活跃的结构重塑，这些变化有可能与神经的免疫调节功能有关。     

星形细胞瘤的胶质纤维酸性蛋白和波形蛋白免疫组织…

应用图像分析仪对２５例Ⅱ－Ⅳ级星形细胞瘤进行ＧＦＡＰ，ＶＩＭ免疫组织化学定量研究。结果表明：２５例星形细胞瘤全部呈ＧＦＡＰ，ＶＩＭ阳性反应，ＧＦＡＰ，ＶＩＭ免疫反应强度与肿瘤组织的分化程度有关，高分化的星形细胞瘤（Ⅱ级），ＧＦＡＰ反应强，ＶＩＭ反尖弱，而低分化的星形细胞瘤（Ⅲ，Ⅳ级）中，ＶＩＭ反应强，ＧＦＡＰ反应弱，即ＧＦＡＰ与肿瘤恶性度负相关；ＶＩＭ与肿瘤组织恶性程度正相关。