PKH26荧光示踪剂在小鼠骨髓单个核细胞肝内迁移过程中标记作用的研究

目的 探讨PKH26荧光示踪剂在小鼠骨髓单个核细胞肝内迁移过程中的标记作用。方法以红色荧光染料PKH26标记从小鼠骨髓中分离出的骨髓单个核细胞，从小鼠的尾静脉注入CCIA—AAF造成肝损伤的同种异体的小鼠体内，移植2周后取肝组织，通过荧光显微镜观察实验组小鼠骨髓干细胞向肝脏迁移的情况。结果受体组小鼠的肝小叶中央静脉及汇管区均可见新生的PKH26标记阳性的肝细胞。结论PKH26可用于标记向急性肝损伤小鼠肝脏迁移的骨髓单个核细胞。     

门静脉和尾静脉注入小鼠骨髓干细胞向肝脏迁移的比较

目的:探索小鼠骨髓干细胞,在同种异体不同途径移植后向受体肝脏迁移的情况．方法:以红色荧光染料PKH26标记从小鼠骨髓中分离出的干细胞,分别从小鼠的尾静脉和门静脉注入同种异体的CCL4-AAF造成肝损伤的小鼠体内,移植2 wk后分别取肝组织, 通过荧光显微镜观察两种移植途径对小鼠骨髓干细胞向肝脏迁移的影响．结果:两组鼠的肝小叶中央静脉及汇管区均可见新生的肝细胞,PKH26标记阳性的细胞在门静脉移植组20倍镜下每张切片平均为175．4 个,在尾静脉移植组平均172．9个(P>0．05)．结论:骨髓干细胞向肝脏迁移的细胞数与移植途径无关．     

粒细胞集落刺激因子促进自体骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠肝脏迁移的实验研究

目的 探索粒细胞集落刺激因子促进自体骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠肝脏迁移的作用.方法 以红色荧光染料PKH26标记从小鼠骨髓中分离出的骨髓单个核细胞,从小鼠的尾静脉注入同种异体的CCL4-AAF造成肝损伤的小鼠体内,移植2周后取肝组织.通过荧光显微镜观察实验组及对照组小鼠骨髓干细胞向肝脏迁移的情况.结果 两组小鼠的肝小叶中央静脉及汇管区均可见新牛的肝细胞,PKH26标记阳性的细胞在实验组20倍镜下每张切片平均为(102.76±37.304)个,在对照组平均(53.84±29.987)个(P＜0.05).结论 重组粒细胞集落刺激凶子可以促进骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠的肝脏迁移.     

分泌型与包涵体型G-CSF促进骨髓单个核细胞向肝脏迁移比较

目的 比较分泌型与包涵体型G—CSF促进骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠肝脏迁移的作用。方法 以红色荧光染料PKH26标记从小鼠骨髓中分离出骨髓单个核细胞，从小鼠的尾静脉注入同种异体的CCl4-AAF造成肝损伤的小鼠体内，移植2周后取肝组织，通过荧光显微镜观察实验组及对照组小鼠骨髓干细胞向肝脏迁移的情况。结果 两组鼠的肝小叶中央静脉及汇管区均可见新生的肝细胞，PKH26标记阳性的细胞在20倍镜下实验组每张切片平均为（75．76±70．00）个，对照组平均（79．84±80．98）个（P〉0．05）。结论 分泌型与包涵体型G-CSF在促进骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠的肝脏迁移作用无明显差异。     

基质细胞衍生因子1对骨髓单个核细胞向肝脏迁移分化的影响

目的 探索基质细胞衍生因子1对骨髓单个核细胞向肝脏迁移、分化的影响。方法建立小鼠CCl4-AAF肝损伤模型，从小鼠骨髓中分离出骨髓单个核细胞，以荧光染料PKH26标记后经尾静脉输入肝损伤模型的小鼠体内，实验组立即给予肝内注射基质细胞衍生因子1，对照组给予肝内注射盐水，12d后取肝组织，在荧光显微镜下观察两组骨髓单个核细胞向肝脏迁移的差异，并用免疫组化法测定移植细胞的白蛋白表达。结果 PKH26标记阳性的细胞20倍镜下实验组中每张切片平均迁移数为（195．40±9．095）个，对照组平均迁移数为（169．80±7.983）个（P〈0．05）。免疫组化显示移植细胞可以表达白蛋白。结论 基质细胞衍生因子1可以促进骨髓单个核细胞向肝脏迁移，并且迁移至肝脏的骨髓单个核细胞可以向肝细胞分化。     

不同途径移植骨髓干细胞治疗急性肝损伤小鼠模型的效果比较

目的探讨4种途径移植骨髓干细胞治疗的急性肝损伤小鼠的肝脏迁移情况及肝损伤的修复情况。方法雄性BALB/c小鼠分为A、B、C、D、E、F 6组,每组10只,A、B、C、D为移植组,E组为骨髓干细胞供体组,F组为急性肝损伤模型组。用CCL4/2-乙酰氨基芴制备小鼠急性肝损伤模型,分离小鼠骨髓干细胞,用红色荧光染料PKH26标记后经门静脉(A组,n=10)、尾静脉(B组,n=10)、腹腔(C组,n=10)及脾内(D组,n=10)输入到急性肝损伤小鼠体内,2周后处死小鼠,血清检测肝功能(ALT、AST、Alb),肝组织病理观察骨髓干细胞向肝脏迁移的情况及肝损伤小鼠的肝脏修复情况。F组小鼠于第8天处死检测ALT、AST及Alb值。计量资料2组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果显微镜下4个移植组移植的细胞均迁移到肝脏且通过病理图片均可见新生的肝细胞; ALT、AST、Alb值A、B、C、D 4组分别与F组比较差异均有统计学意义(ALT:t值分别为2. 372、2. 473、2. 354、2. 383,P值均0. 05; AST:t值分别为2. 534、2. 423、2. 437、2. 643,P值均0. 05; Alb:t值分别为2. 336、2. 243、2. 373、2. 352,P值均0. 05)。结论骨髓干细胞促进急性肝损伤小鼠肝脏的修复,其修复程度与移植途径无关。     

SCF和G-CSF对骨髓单个核细胞移植治疗急性肝损伤的研究

目的探索联合应用干细胞因子(SCF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员骨髓单个核细胞向急性肝损伤小鼠肝脏的迁移情况及对肝损伤的修复作用。方法应用CCl4/2-AAF制备急性肝损伤模型,然后行骨髓单个核细胞移植(体外先经PKH26标记)和皮下注射细胞因子SCF、G-CSF(实验按注射细胞因子的种类随机分为4组,A组:SCF+G-CSF;B组:SCF;C组:G-CSF;D组:移植对照组),分别于移植后2周、4周处死小鼠,取其血清检测肝功(ALT、AST、ALB值),取肝组织观察小鼠骨髓单个核细胞向肝脏迁移的情况及损伤肝脏的修复情况。结果 (1)PKH26标记阳性细胞数:A组>C组>B组、D组。A组与C组、B组、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)病理组织学检测:A组小鼠肝脏修复较其他组好;(3)肝功指标:与B组、C组、D组比较,A组ALT,AST值差异有统计学意义(P<0.05),ALB值差异无统计学意义(P>0.05);移植后4周与2周比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 (1)SCF和G-CSF可以通过动员骨髓干细胞促进急性肝损伤小鼠肝脏的修复。(2)联合应用SCF和G-CSF比单独应用更能有效保护受损肝脏,并加快受损肝脏的再生。     

骨髓间充质干细胞诱导分化后脾内移植治疗急性肝损伤的研究

背景：近年干细胞的研究为肝脏疾病的治疗提供了新契机。研究证实骨髓间充质干细胞（MSCs）不仅可分化为与其组织来源一致的细胞．且具有跨系或跨胚层分化为不同组织来源细胞的潜能。目的：探讨骨髓MSCs诱导分化后脾内移植治疗急性肝损伤的可行性。方法：密度梯度离心法联合贴壁培养分离、扩增BALB／c小鼠骨髓MSCs。体外诱导向肝系细胞分化，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学法检测肝系细胞的标志。制备BALB／c小鼠ccL急性肝损伤模型．脾内移植DAPI标记的诱导分化21d的MSCs。荧光显微镜下观察细胞的迁徙、定位．行血清肝功能指标、肝脏组织病理学检测移植效果。结果：诱导后7、14d，均检测到甲胎蛋白（AFP）mRNA和蛋白的表达，14、21d检测到白蛋白（ALB）mRNA和蛋白的表达。移植后实验组肝脏和脾脏均发现DAPI标记细胞。与对照组相比，实验组肝功能显著改善（P〈0．05），肝脏病变程度减轻。结论：脾内移植诱导分化的骨髓MSCs对急性肝损伤具有修复作用。     

PKH26标记示踪人脐带间充质干细胞在肝硬化大鼠体内的迁移

目的 用红色荧光染料PKH26标记人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),观察PKH26标记的hU CMSCs在肝硬化大鼠体内的迁移情况. 方法 hU CMSCs经复苏培养后,用PKH26对细胞进行标记,测定标记率和单次标记后荧光可检测时长;显微镜下观察标记后细胞形态,四甲基偶氮唑盐法测定细胞生长曲线.将PKH26标记的hU CMSCs通过大鼠尾静脉分别移植给正常大鼠和肝硬化大鼠;48 h后取肝组织做冰冻切片,荧光显微镜下观察hUCMSCs在大鼠体内的迁移情况.数据采用完全随机设计两组均数t检验进行分析. 结果 PKH26对hUCMSCs的标记率为100％,标记后细胞生长状态良好,细胞形态与未标记细胞无明显差别,均为长梭形成纤维样细胞;两组细胞各时间点的吸光度值的差异亦无统计学意义(P＞0.05),细胞增殖未见明显影响;第3～5天细胞生长速度最快,为对数生长期,在对数生长期中,对照组的细胞倍增时间为(2.22±0.04)d,标记组的细胞倍增时间为(2.20±0.04)d,两组的差异无统计学意义(P=0.53).体外单次标记后荧光至少可维持20 d;移植给大鼠后,PKH26标记的hUCMSCs主要分布于硬化肝脏的汇管区、血管及假小叶周围,脾脏、肺亦有少量分布.结论 PKH26是标记hUCMSCs的理想荧光染料,PKH26标记技术可用于hU CMSCs移植治疗肝硬化时的细胞示踪研究.     

低分子肝素预防自体骨髓干细胞移植血栓形成的动物实验研究

目的探讨低分子肝素预防小鼠自体骨髓单个核细胞移植后血栓形成的作用。方法应用CC14／2-AAF制备小鼠急性肝损伤模型,然后行骨髓单个核细胞移植。实验A组于经尾静脉注入骨髓干细胞悬液;实验B组于经尾静脉先注入低分子肝素后注入骨髓干细胞悬液。分别于移植2周后处死小鼠,取2组小鼠心、肺、肝、肾、脑等重要脏器于显微镜下观察有无血栓。结果HE染色观察发现：A组肝脏、心脏、肺脏、肾脏均有血栓形成（脑未发现血栓）;B组肝脏、心脏、肺脏、肾脏及脑均无血栓形成。结论低分子肝素可预防BALB／c小鼠尾静脉移植BMMCs后导致的血栓形成。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.