定量不对称PCR－SSCP检测携带N－ras基因点突变的微量残留白血病细胞

定量不对称ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测携带Ｎ－ｒａｓ基因点突变的微量残留白血病细胞蔡辉国，陈佩贞，张立冬，马双，王立，杨天楹我们采用多聚酶链反应－单链ＤＮＡ构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析检测携带Ｎ－ｒａｓ基因点突变的微量残留白血病细胞（ＭＲＬＣ），其灵敏...     

卡介菌多糖核酸对慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬细胞免疫功能的影响

慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)是呼吸系统常见病[1] 。卡介菌多糖核酸 (ＢＣＧ -ＰＳＮ)在ＣＯＰＤ治疗中取得了良好的疗效[2 ] 。其机制可能是ＢＣＧ -ＰＳＮ能提高ＣＯＰＤ病人巨噬细胞 (ＡＭｓ)免疫功能。为了证实此设想 ,作者运用支气管肺泡灌洗 (ＢＡＬ)技术收集健康非吸烟者和ＣＯＰＤ病人的支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ) ,分离ＡＭｓ,观察ＢＣＧ -ＰＳＮ对体外ＡＭｓ吞噬、杀菌和肿瘤坏死因子 -α(ＴＮＦ -α)水平的影响。1　对象与方法1.1　对象　健康对照组 12名 ,男 7名 ,女 5名 ,平均年龄 35(2 6～ 52 )岁。近 2个月内无呼吸系统疾…     

P53基因与人类血液系统恶性肿瘤

Ｐ５３基因与人类血液系统恶性肿瘤许小平综述阎影，丁方杰审校早期的一些实验观察到Ｐ５３基因的表达产物Ｐ５３蛋白可以协同激活的ｒａｓ基因促进正常细胞转化，故把Ｐ５３基因也列为癌基因的一种￣［１］。１９８９年Ｆｉｎｌａｙ等￣［２］的研究证明与细胞癌变有关的...     

人脐血和骨髓CD_(34)~ 细胞基因转移效率的比较研究

人脐血和骨髓ＣＤ34 细胞在相同实验条件下,基因转移效率是否相同尚未见报道。我们研究比较了干细胞因子(ＳＣＦ),白细胞介素(ＩＬ)3,ＩＬ6等联合应用对人脐血和骨髓ＣＤ34 细胞基因转移效率的差别,为基因治疗的临床应用提供实验依据。材料和方法1　细胞系　Ｇ418抗性包装细胞株ＰＡ317ＧＣＧＰＸＳＮ及检测病毒滴度用细胞株ＮＩＨ3Ｔ3,均由上海东方肝胆外科医院钱其军博士惠赠。2　病毒上清的制备及病毒滴度测定　按文献[1]进行。3　基因转移　脐血9份,来自兰州市妇幼保健院健康产妇;骨髓9份,来自健康供者。将脐血和骨髓用Ｆｉｃｏｌｌ液(…     

妊娠滋养细胞疾病中ras基因突变及其P^21蛋白表达的研究

目的了解妊娠滋养细胞疾病分子生物学发病机制中ｒａｓ基因的作用。方法应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（聚合酶链反应－限制性片段长度多态分析）检测绒毛膜细胞株ＪＡＲ和ＢｅＷｏ、和３６例标本（６例新鲜组织及３０例石蜡标本）中Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ的第１２位点点突变情况；应用免疫组织化学方法检测石蜡标本野生型Ｐ２１和３种突变型Ｐ２１蛋白的表达情况。结果所有被测标本均未见Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ第１２位点的点突变。而野生型Ｐ２１蛋白在妊娠滋养细胞疾病中存在着不同程度的表达，其表达强度依ＧＴＤ恶性程度增加而递减。结论Ｒａｓ基因并不以第１２位点点突变的方式在ＧＴＤ中发挥作用。野生型Ｐ２１参与正常滋养细胞的增殖、分化过程；而其作用随ＧＴＤ恶性程度增加而减弱     

致痫大鼠脑组织中Fas表达及神经生长因子的干预性作用

目的：观察癫痫发作后大鼠脑组织中Ｆａｓ的表达及细胞凋亡的情况及神经生长因子（ＮＧＦ）的干预性作用。方法：采用ＬｉＣＬ－Ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎ致痫的Ｗｉｓｔｅｒ大鼠模型,通过ＴＵＮＥＬ和免疫组化方法对各组Ｆａｓ的表达、细胞凋亡情况进行观察。结果：癫痫后１ｈＦａｓ表达开始增加,１２ｈ达高峰,持续１周,Ｆａｓ的高表达与细胞凋亡的分布一致。ＮＧＦ组Ｆａｓ表达和细胞凋亡情况均致痫组有显的减少（Ｐ〈０．０１）,结论：癫痫发作可引起Ｆａｓ表达和细胞凋亡增加,ＮＧＦ有抑制Ｆａｓ表达和细胞凋亡增加的作用。     

化疗药物诱导白血病细胞凋亡对Fas/FasL途径依赖性的研究

化疗药物除通过同各自的靶点直接作用外 ,也可以通过诱导细胞凋亡而杀伤肿瘤细胞。文献报道化疗药物诱导白血病细胞凋亡与Ｆａｓ/ＦａｓＬ途径有关[1 3 ] ,我们对此进行了研究 ,并探讨化疗药物与ＦａｓＬ联用的疗效及其机制 ,期望为白血病的治疗提供新的线索。材料和方法1　主要试剂　柔红霉素 (ＤＮＲ)、阿糖胞苷 (Ａｒａ Ｃ)、碘化丙锭(ＰＩ)购自Ｓｉｇｍａ公司 ;原位末端标记 (ＴＵＮＥＬ)试剂盒购自博士德公司 ;可溶性Ｆａｓ配体 (ｓＦａｓＬ) ,小鼠抗人Ｆａｓ单抗 (ＩｇＧ1) ,白血病细胞系ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2、Ｕ937由华中科技大学同济…     

Fas基因在rhG-CSF诱导白血病细胞凋亡过程中的作用

目的探讨了Ｆａｓ基因是否参与重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧＣＳＦ）对白血病细胞的诱导凋亡过程。方法利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）介导的基因转染技术将Ｆａｓ基因转入ＨＬ６０细胞中,并经原位杂交、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及流式细胞术（ＦＣＭ）证实已成功建立了Ｆａｓ高表达的ＨＬ６０细胞株,用ＦＣＭ对Ｆａｓ基因在ｒｈＧＣＳＦ诱导白血病细胞凋亡过程中的作用进行了探讨。结果相同浓度的ｒｈＧＣＳＦ作用相同时间后转染的ＨＬ６０细胞凋亡率较未转染的ＨＬ６０细胞凋亡率明显增加,且随ｒｈＧＣＳＦ作用时间延长,Ｆａｓ在ＨＬ６０细胞中的表达逐渐增加。结论Ｆａｓ基因是凋亡诱导基因,ｒｈＧＣＳＦ诱导白血病细胞凋亡依赖Ｆａｓ径路传递凋亡信号。     

特发性血小板减少性紫癜患儿Th1/Th2相关细胞因子的检测

特发性血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)是一种自身免疫性疾病 ,其发病机制尚未完全明确 ,目前认为其发生与患者机体Ｔｈ1/Ｔｈ2细胞的平衡失调有关[1,2 ] 。我们参考Ｓｅｗｅｌｌ等的实验方法[3 ] ,建立了流式细胞术检测单个淋巴细胞内细胞因子方法 ,检测了 12例儿童ＩＴＰ患者的Ｔｈ1/Ｔｈ2细胞相关细胞因子ＩＦＮ γ和ＩＬ 4的表达情况 ,并与正常儿童相比较。材料和方法1　试剂和仪器　ＦＩＴＣ标记的抗ＣＤ4 单抗 ,ＰＥ标记的ＩＦＮ γ、ＩＬ 4单抗以及相应的同型对照 ,购自深圳晶美生物工程有限公司 ,三色的单抗ＣＤ4 Ｆ1ＴＣ/ＣＤ8 ＰＥ/Ｃ…     

干扰素及Fas抗体对肝癌细胞的细胞毒性研究

应用基因重组人干扰素γ和抗Ｆａｓ抗体体外处理人肝癌细胞系ＨｅＰＧ－２，采用ＭＴＴ法检测各处理组和对照组细胞的凋亡。结果表明：ＩＦＮ－γ诱导ＨｅＰＧ－２２４ｈ后，再加入Ｆａｓ抗体，发现对ＨｅＰＧ－２细胞的细胞毒作用显著高于ＩＦＮ－γ和Ｆａｓ抗体单独作用，提示ＩＦＮ－γ能促进抗Ｆａｓ抗体对肝癌细胞的细胞毒性，为ＩＦＮ－γ协同Ｆａｓ抗体治疗肿瘤提供了一定的实验依据。     

骨髓增生异常综合征患者Fas、FasL和FAP-1基因的表达

有报道骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)患者存在凋亡诱导基因Ｆａｓ、ＦａｓＬ的表达异常[1,2 ] 。ＦＡＰ 1为Ｆａｓ相关酪氨酸磷酸酶 ,可与Ｆａｓ胞浆内链相互作用 ,抑制Ｆａｓ介导的细胞毒作用[3 ] ,其在ＭＤＳ细胞中的表达 ,国外报道尚少 ,国内未见报道。我们采用ＲＴ ＰＣＲ对 2 6例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞(ＢＭＭＮＣ)中Ｆａｓ、ＦａｓＬ和ＦＡＰ 1的ｍＲＮＡ表达进行了研究。对象和方法1　病例　 2 6例ＭＤＳ患者 ,男 12例 ,女 14例 ,中位年龄 46 (17～ 79)岁。按 1982年ＦＡＢ标准诊断和分型[4 ] ,ＲＡ患者须符合 :①外周血至少二系细…     

脐血血浆增强阿糖胞苷抗白血病效应的实验研究

目的研究脐血血浆（ＣＢＰ）对２８例急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（ＡｒａＣ）敏感性的影响。方法以基因重组人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）和空白组作对照，采用ＭＴＴ法检测ＡｒａＣ的细胞毒作用。结果ＡＭＬ细胞对ＡｒａＣ的敏感性表现出异质性，但使用ＣＢＰ及ｒｈＧＭＣＳＦ均可显著增强ＡｒａＣ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性，与空白对照组相比，差异有显著性（Ｐ＜００５），尤以ＣＢＰ为优。结论ＣＢＰ与ｒｈＧＭＣＳＦ类似，可能通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期，从而增强ＡＭＬ细胞对ＡｒａＣ的敏感性，预示ＣＢＰ与ＡｒａＣ联合运用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值。     

维甲酸、砷剂及柔红霉素对NB4细胞组织因子表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸（ Ａ Ｔ Ｒ Ａ） 、三氧化二砷（ Ａｓ２ Ｏ３） 及柔红霉素（ Ｄ Ｎ Ｒ） 对急性早幼粒细胞白血病（ Ａ Ｐ Ｌ） 细胞株 Ｎ Ｂ４ 细胞组织因子（ Ｔ Ｆ） 表达的影响。方法　用复钙时间检测 Ｎ Ｂ４ 细胞的促凝活性（ Ｐ Ｃ Ａ） ;用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法检测其 Ｔ Ｆ 抗原;用逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测 Ｔ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ的转录水平。结果　 Ａ Ｔ Ｒ Ａ 和 Ａｓ２ Ｏ３ 均呈时间依赖的方式下调 Ｎ Ｂ４ 细胞的 Ｐ Ｃ Ａ、 Ｔ Ｆ 抗原水平以及 Ｔ Ｆ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的转录;而 Ｄ Ｎ Ｒ 处理 Ｎ Ｂ４ 细胞的 Ｐ Ｃ Ａ及 Ｔ Ｆ 抗原在早期上调,至２４ ～４８ 小时达到最大值。对 Ｐ Ｃ Ｒ 产物测序,发现 Ａ Ｐ Ｌ 细胞 Ｔ Ｆ 第５ 个外显子缺失的转录本。结论　 Ａ Ｔ Ｒ Ａ 和 Ａｓ２ Ｏ３ 均可下调 Ａ Ｐ Ｌ 细胞 Ｔ Ｆ的表达并降低其 Ｐ Ｃ Ａ,改善 Ａ Ｐ Ｌ患者的弥散性血管内凝血（ Ｄ Ｉ Ｃ） 出血症状; Ａｓ２ Ｏ３ 和 Ｄ Ｎ Ｒ 对 Ａ Ｐ Ｌ凝血障碍不同效应的作用机制至少部分与药物对 Ａ Ｐ Ｌ细胞 Ｔ Ｆ 表达和 Ｐ Ｃ Ａ 的不同调节作用有关。     

琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色与荧光片段自动分析检测IgH基因产物的比较

在Ｂ 细胞发育过程中 ,免疫球蛋白重链 (ＩｇＨ)经历一个复杂的基因重排过程 ,由此产生 3个可变的互补决定区 (ＣＤＲ) ,这 3个决定区由 4个相对保守的框架区 (ＦＲ)分开 ,ＣＤＲⅢＶ Ｎ Ｄ Ｎ Ｊ序列是可用于分子技术研究的特异性标志物。以ＦＲ1、ＦＲ2和ＦＲ3相应引物的ＰＣＲ扩增ＣＤＲⅢ和ＪＨ序列常用于Ｂ细胞瘤的诊断。ＰＣＲ产物的检测方法有许多 ,如琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色 (ＥＴＢ ＡＧＧＥ)、荧光片段自动分析(ＡＬＦ)、ＳＳＣＰ、杂合性分析等。本研究以新鲜的或冷冻保存的典型血液淋巴瘤病人的骨髓穿刺细胞为材料 ,其中包…     

高效绿色荧光蛋白基因标记系统的建立及其初步应用

逆转录病毒载体编码的众多报告分子被广泛用于分析基因转导率、分选或示踪基因修饰靶细胞 ,特别在改进基因转导条件、阐明造血干细胞 (ＨＳＣ)生物学特性和判定白血病复发的细胞来源等方面发挥了重要作用[1,2 ] 。作为新一代的报告分子 ,增强型绿色荧光蛋白 (ＥＧＦＰ)最近已被用于造血细胞的基因转移和示踪肿瘤转移与血管形成等研究[3 ] 。我们曾建立双启动子逆转录病毒载体介导的ＥＧＦＰ基因转移系统 ,但发现转导靶细胞后荧光强度较低[4 ] 。为提高靶细胞ＥＧＦＰ的表达 ,我们构建了仅携带ＥＧＦＰ单基因的逆转录病毒载体Ｇ1ＦＰ ,并在不…     

重组人造血干细胞因子基因在人造血干／祖细胞的转移和表达

目的：拓展造血干细胞因子（ＳＣＦ）的研究和基因治疗途径。方法：利用基因重组技术，构建了编码可溶性人ＳＣＦ基因的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＳＣＦ，应用脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ基因转移法将重组质粒导入Ψ２和ＰＡ３１７病毒包装细胞，经Ｇ４１８选择性培养基筛选，获得产重组病毒的包装细胞ＰＡ３１７／ＳＣＦ，其病毒效价为（２．４～８．５）×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，继而感染人造血干／祖细胞。应用多聚酶链反应、ＡＰＡＡＰ免疫组化染色和化学发光－直接酶标法检测人ＳＣＦ基因在细胞中转移和表达。结果：逆转录病毒载体介导的ｒｈＳＣＦ基因在人造血干／祖细胞中获得有效转移和表达。结论：为进一步研究ＳＣＦ的生物学特性及开展干细胞移植等提供了一定的途径。     

肝性糖尿病发生有关因素的研究

许多研究证明 ,肝硬化患者存在不同程度的糖耐量减低 ,有的表现临床糖尿病 ,心钠素 (ＡＮＦ)的水平明显高于正常人。本文报道 2 0例肝硬化患者用口服 10 0ｇ葡萄糖分别测空腹 (0ｈ)、1ｈ、2ｈ、3ｈ的血糖 (ＢＧ)、胰岛素 (ＩＮＳ)、Ｃ肽 (Ｃ Ｐ)、ＡＮＦ的水平 ,设 9名正常人对照。并对肝硬化有与无糖尿病患者的血浆ＩＮＳ、Ｃ Ｐ、ＡＮＦ的水平进行比较 ,探讨肝性糖尿病的发生与ＡＮＦ及胰岛分泌功能的关系。1　资料和方法1.1　研究对象　肝硬化 2 0例 ,男 11例 ,女 9例 ,平均年龄4 7.1岁。肝功能全部为失代偿期 ,Ｃｈｉｌｄ ｐｕｇｈ分级…     

caspase 3在细胞因子调节急性白血病细胞凋亡中的变化

目的 研究ｃａｓｐａｓｅ３在粒细胞集落刺激因子（Ｃ－ＣＳＦ）和粒巨洚细胞集落因子（ＧＭ－ＣＳＦ）调节白血病细胞系ＮＢ４细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法 利用细胞这、流式细胞仪分析及ＤＮＡ片段化比率测定,检测Ｇ－ＣＳＦ及ＤＭ－ＣＳＦ对ＮＢ４细胞凋亡的影响,应用荧光分光光度法检测ｃａｓｐａｓｅ３活性变化,并利用ＡＥ－ＤＥＶＤ－ＣＲＯ进行ｃａｓｐａｓｅ３抑制试验。结果 Ｇ－ＣＳＦ能诱导ＮＢ４细胞凋亡,     

什么是Fas/FasL系统?

答 :ＦａｓｒｙｍｎｄｒｉｔＦａｓ配体 (ＦａｓＬ)是细胞表面的两种跨膜蛋白。目前研究认为ＦａｓＬ是死亡因子 ,Ｆａｓ则是它的受体。当一个细胞的ＦａｓＬ与另一个细胞的Ｆａｓ结合时 ,可以导致表达Ｆａｓ的细胞凋亡。Ｆａｓ又称Ａｐｏ 1,即ＣＤ95分子。人Ｆａｓ基因定位于 10号染色体ｑ2 3,基因长度约 2 5Ｋｂ ,人ＦａｓｃＤＮＡ长度为 2 5 34ｂｐ。人ＦａｓＬ基因定位于 1号染色体ｑ2 3,基因长度约 8Ｋｂ。Ｆａｓ/ＦａｓＬ系统与自身免疫疾病、肿瘤发生、移植物耐受等均有密切关系。什么是Fas/FasL系统?@秦雪…     

rasP21在食管不典型增生和食管癌细胞表达的定量研究

应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对食管癌前病变和食管癌细胞ｒａｓＰ２１进行了定量研究，并分析ｒａｓＰ２１的表达量与ＮＤＡ倍体和细胞增殖指数的关系。结果表明：食管癌细胞ｒａｓＰ２１表达量（荧光指数ＦＩ）明显高于食管癌前病变的表达量，并发现ｒａｓＰ２１表达的荧光指数随组织学分级增高升高，ＤＮＡ倍体与Ｐ２１表达量密切相关。