终末期肝病患者HBV xDNA检测及其意义

目的：探讨HBVxDNA与终末期肝病的关系。方法：收集肝癌肝硬化等不同肝病患者血清及肝组织标本，提取标本核酸，经PCR扩增HBVxDNA，琼脂糖电泳显示产物，Southern—blot杂交验证PCR扩增的可靠性。结果：49例血清中检出HBVxDNA22例，肝组织中检出34例。HBsAg阳性及阴性患者中，血清检出率分别为66．7％及18．2％（P〈0．01），肝组织检出率分别为81．5％及54．5％（P〈0．01）。20例血清和组织中可同时检测到HBVxDNA，14例仅在肝组织中检出，2例仅见于血清中。结论：HBVxDNA与终末期肝病的发生密切相关。     

慢性HBsAg无症状携带者186例血清HBV-DNA分子杂交的初步结果

以~(32)P-HBV-DNA作为探针,与待检血清中提取的DNA作分子杂交试验,检测186例慢性HBsAg无症状携带者血清,结果血清HBV-DNA与HBe系统密切相关,在62例HBeAg阳性中有51例HBV-DNA阳性(82.2％),在抗-HBe阳性中也有个别HBV-DNA阳性。另外,HBeAg P/N值与HBV-DNA呈正相关,HBeAg P/N值在8.1以上,HBV-DNA阳性率95.0％,P/N值<5.0只有12.5％阳性。 以分子杂交试验检测的HBV-DNA,是血清中HBV存在的更为直接的证据,可用以判定慢性HBsAg无症状携带者在体内病毒增殖情况。     

招飞体检乙型肝炎病毒筛查方法及其意义

目的 调查招飞学生HBV血清标志物模式及分布特点,探讨聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法与酶联免疫吸咐测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)在招飞体检HBV筛查中的应用价值. 方法 对象为参加本区招飞体检的学生(包括应届高中生、大学生)3843名.按出生年分为1992年前和1992年后(包括1992年)两个年龄组;根据户籍种类分为农村和城市学生.乙肝血清标志物采用ELISA法进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb共5项定性检测,按随机数字法随机抽取不同模式(除单项HBsAb阳性外)标本365例,采用PCR荧光探针法进行HBV-DNA定量检测. 结果 ①共检出13种HBV血清标志物模式,主要为HBsAb(+)模式;其次为5项全阴模式,HBsAb(+)、HBcAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式,HBcAb(+)模式;HBsAg阳性以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)及HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式为主,分别占HBsAg阳性总数的38.75％和46.25％.②两个年龄组HBsAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)模式和HBcAb(+)模式检出率差异有统计学意义(x2 =9.350、8.563,P＜0.01);其他模式检出率差异无统计学意义(P＞0.05).③农村与城市学生相比,除HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式和HBcAb(+)模式外,其他5种常见模式检出率差异有统计学意义(x2=4.592～34.838,P＜0.01或P＜0.05).④HBV-DNA定量检测病毒载量＞1000 copies/ml者62例,其中HBsAg阳性者占77.42％,其他模式占22.58％.HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为95.45％(21/22),病毒载量为9.16×106～9.81×107copies/ml.HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为45.71％(16/35),病毒载量为1.24×104～7.95×105 copies/ml.HBsAg(+)、HBeAg(+)者均检出HBV-DNA,病毒载量为(2.39～5.34)×107 copies/ml. 结论 ELISA法检测HBV血清标志物与PCR定量检测HBV-DNA相结合,有助于解决招飞体检HBV携带者误诊和漏检问题.     

聚合酶链反应鉴定乙型肝炎病人尿液的传染性

聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV－DNA）敏感、快速，对HBeAg阳性病人血液HBV-DNA的检测阳性率高达100%）。我们选用乙型肝炎病人38例的尿液，并采用PCR法检测尿液HBV－DNA发现尿液HBV－DNA与血液HBV－DNA及血液HBeAg之间具有相关性。现将结果报告如下。对象与方法一、对家均为住院病人三．血清HBsAs－HBeAg和nscatr均阳性（以下简称血清nseag阳性病人）的病人16例。2．血清HBShg、HBCAb阳性，但HBeAg阴性（以下简称血清HBeAg阴性病人）的病人22例。二、方法1．血清HBsAgtHBcAb、HBeAg及…     

血清HBsAg阴性和HBsAg阳性慢性活动性肝炎患者肝内HBV DNA的研究

用原位杂交法和ABG法对慢性活动性肝炎患者(以下称CAH)血清HBsAg阴性34例和阳性30例对比进行了肝内HBV DNA、HBcAg和HBsAg的检测。上述检出率在34例HBsAg阴性CAH者中分别为23.5％,23.5％和32.4％,30例HBsAg阳性者中分别为63.3％、56.7％和83.3％。结果表明,在我国,血清HBsAg阴性、HBV相关抗体阳性或阴性的CAH中,仍有少部分人肝内存在HBV DNA和HBV抗原表达,并与肝病发病机理有关。血清HBsAg阳性的CAH者中,无论血清HBeAg阳性,或抗HBe阳性、或HBeAg阴性,均有较高比例的肝内HBV DNA和HBV抗原检出。肝内HBcAg与肝内HBV DNA关系密切,可作为反映HBV活跃复制指标;肝内HBsAg则不然。     

血清HBV-DNA检测在招收飞行学员筛选中的意义

目的 调查在ELISA方法检测血清HBsAg阴性飞行学员中，血清HBV-DNA的检出情况。方法 用ELISA法检测2224名应招飞行学员血清HBsAg。其中阴性者进一步检测抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe，并用聚合酶链反应（PCR）检测HBsAg阴性者HBV-DNA。结果 在2224名应招飞行学员中HBsAg阳性158例，阳性率7.1%；HBsAg阴性者中，除单项抗-HBs阳性血清模式外，其他各模式均有不同例数的人检测到HBV-DNA。结论 本研究表明，仅检测血清中HB-sAg的表达状况。不足以将所有感染有HBV者筛选出去，应由灵敏度更高的分子生物学方法取代。     

HBV感染产妇血清和乳汁中HBV-M与HBV-DNA检测

目的检测HBV感染产妇乳汁中HBV-M和HBV-DNA,以评价母乳喂养的安全性。方法采用ELISA静置式与振动式孵育法定性检测乳汁HBsAg,同时采用荧光定量PCR法检测血清和乳汁HBV-DNA。结果 144例产妇血清HBV-DNA阳性率52.1%（75/144）,乳汁阳性率34.7%（50/144）,乳汁HBsAg静置式孵育法阳性66例（45.8%）,振动式孵育为75例（52.1%）。结论应尽可能同时检测乳汁的HBsAg和HBV-DNA以提高母乳喂养的安全性。无HBV-DNA检测条件的实验室在检测乳汁中HBsAg时应采用振动式孵育以提高阳性检出率。     

乙型肝炎产妇乳汁乙肝病毒标志物检测与哺乳探讨

目的：正确指导乙型肝炎产妇母乳喂养。方法：选择本院产科住院分娩的乙型肝炎产妇88例分为两组。其中血清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性46例为两组：A组，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性42例为B组。对其产后3～5d乳汁进行乙肝病毒标志物（HBV-M）检测。结果：两组乙型肝炎产妇乳汁中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA比较有显著差异（P〈0．05）。结论：单纯HBsAg阳性、HBV-DNA阴性的产妇可以哺乳；而HBsAg阳性且HBeAg阳性产妇不宜母乳喂养。     

PreS1Ag、HBeAg和HBV-DNA的对比检测与分析

目的:通过对比检测和分析739份血清中preS1蛋白、HBeAg和HBV-DNA的检测阳性率,为临床正确选用实验室指标防治乙型肝炎提供依据。方法:应用ELISA法对739份血清进行PreS1Ag和HBV血清标志物检测,并与实时荧光定量PCR检测HBV-DNA结果进行比较。结果:所有739份血清中,PreS1Ag阳性率为34.6%(256/739),HBeAg阳性率为30.7%(227/739),HBV-DNA阳性率为58.9%(435/739)。227份HBeAg阳性血清中,PreS1Ag阳性率55.9%(127/227),HBV-DNA阳性率96.0%(218/227);512份HBeAg阴性血清中,PreS1Ag阳性率25.2%(129/512),HBV-DNA阳性率为42.4%(217/512)。HBeAg、HBV-DNA和PreS1的阳性率有显著差异(P<0.05),阳性率高低依次为HBV-DNA>PreS1>HBeAg;HBeAg阳性血清中PreS1Ag(55.9%)阳性率显著高于HBeAg阴性血清PreS1Ag(25.2%)阳性率(χ2=36.5,P<0.01);HBV-DNA阳性血清的PreS1Ag检出率58.9%(256/435)显著高于HBV-DNA阴性血清的PreS1Ag检出率18.4%(56/304)(P<0.01);PreS1抗原与HBV-DNA阳性符合率为(200/256)78.1%,阴性符合率为(248/483)51.3%。598份HBsAg阳性血清(阳性率为80.9%,598/739)中HBeAg、PreS1和HBV-DNA阳性数(率)分别是224(37.5%)、253(42.3%)、417(69.7%)。结论:PreS1Ag、HBV-DNA、HBeAg的阳性率有显著性差异(P<0.05)。作为HBV感染和复制的指标,以检测HBV-DNA最为可靠,而PreS1Ag可能较HBeAg更敏感。在HBV感染的不同时期,如何理解和使用上述指标对防治乙型肝炎有重要意义。     

丙型肝炎病毒逆转录—套式PCR检测方法和临床应用

在HCVRNA高度保守的5’末端非编码区域内选择合成内、外引物，建立了HCV的逆转录－套式PCR检测方法，并对血清标本中HCVRNA的提取方法进行比较。对23例肝病患者的检测结果显示，HCVRNA的阳性率为56．5％。与抗HCV抗体检测结果比较，抗HCV阳性患者中有81．5％HCVRNA阳性，而抗HCV阴性患者中仍有33．3％的HCVRNA阳性，表明PCR在HCV感染的早期诊断、传染性的确立及药物疗效考核等方面有重要作用。     

PreSlAg、HBeAg和HBV—DNA的对比检测与分析

目的：通过对比检测和分析739份血清中preS1蛋白、HmAg和HBV—DNA的检测阳性率，为临床正确选用实验室指标防治乙型肝炎提供依据。方法：应用ELISA法对739份血清进行PreSlAg和HBV血清标志物检测，并与实时荧光定量PCR检测HBV—DNA结果进行比较。结果：所有739份血清中，PmSlAg阳性率为34．6％（256／739），HmAg阳性率为觚7％（227／739），HBV—DNA阳性率为58.9％（435／739）。227份HBeAg阳性血清中，PreSlAg阳性率55．9％（127／227），HBV-DNA阳性率96．0％（218／227）；512份HBeAg阴性血清中，PreSlAg阳性率25．2％（129／512），HBV—DNA阳性率为42．4％（217／512）。HBeAg、HBV—DNA和PreSl的阳性率有显著差异（P〈0．05），阳性率高低依次为HBV—DNA〉PreSl〉HBeAg；HBeAg阳性血清中PreSlAg（55．9％）阳性率显著高于HmAg阴性血清PreSlAg（25．2％）阳性率（x^2=36．5，P〈0．01）；HBV—DNA阳性血清的PreSlAg检出率58．9％（256／435）显著高于HBV—DNA阴性血清的PreSlAg检出率1＆4％（56／304）（P〈0.01）；PreSl抗原与HBV—DNA阳性符合率为（200／256）7＆1％，阴性符合率为（248／483）51．3％。598份HBeAg阳性血清（阳性率为80．9%，598／739）中HBeAg、PreSl和HBV—DNA阳性数（率）分别是224（37．5%）、253（42．3oA）、417（69．7％）。结论：PreSlAg、HBV—DNA、HBeAg的阳性率有显著性差异（P〈0．05）。作为HBV感染和复制的指标，以检测HBV—DNA最为可靠，而PmSlAg可能较HBeAg更敏感。在HBV感染的不同时期，如何理解和使用上述指标对防治乙型肝炎有重要意义。     

乙型肝炎前S1、S2抗原与HBV-DNA的相关性分析

 目的 对比分析乙型肝炎(乙肝)前S1、S2抗原和HBV-DNA的相关性,探讨乙肝前S1、S2抗原的临床应用价值。方法 随机选取乙肝患者420例,采用ELISA法对前S1、前S2抗原进行检测,采用荧光定量PCR对HBV-DNA进行检测,从血清学标志类型、HBV-DNA载量和HBV感染类型角度对HBV-DNA和前S1、S2抗原检测结果进行分析。结果 乙肝大三阳患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为98.48%、95.45%、100.0%;小三阳患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为53.25% 、45.45% 、46.75%。HBsAg(+)HBcAb(+)患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为53.75%、43.28%、44.78%。在高HBV-DNA载量组中乙肝前S1、S2抗原检出率较高。结论 乙肝前S1、S2抗原与HBV-DNA有较好的相关性,可作为反映病毒感染与复制的指标。     

应用荧光定量聚合酶链反应检测血清、肝组织中HBV-DNA含量观察HGV感染对慢性乙型肝炎HBV复制的影响

目的　探讨庚型肝炎病毒 (HGV)感染对慢性乙型肝炎 (CH B)患者乙型肝炎病毒 (HBV)复制的影响。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、过氧化物酶与抗过氧化物酶复合物 (PAP)法免疫组织化学、荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 6例CH B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测 ,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA ,HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量进行了对比研究。 结果　血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为 8例 (1 4 3 % )、1 0例 (1 7 9% )。血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关 (P <0 .0 1 ) ,但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达。血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　HGV感染对CH B患者HBV复制无影响。肝脏是HGV的复制场所 ,但可能亦有肝外组织器官中复制。HGV至多具有微弱的致病性 ,但仍然需要进一步研究。     

乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒血清标志物和HBV—DNA联合检测的临床应用

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1）、乙肝病毒标志物（HBVM）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）检测三者之间的关系，判断乙肝病毒在体内的复制情况。方法对550例乙型肝炎患者血清，用ELISA方法检测PreS1、两对半标志物，用荧光定量PCR方法定量检测HBV—DNA并分析3者之间的关系。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中，PreS1与HBV-DNA检出率分别为5213％与88．4％，HBsAg（＋）、HbeAb（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV—DNA检出率分别为31．1％和47．5％，HBsAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为47.3％和63．4％。结论PreS1能较好的反映HBV病毒感染及复制情况，可作为一种新的HBV血清标志物和监测指标，三者联合检测互相补充，更有助于临床疾病的诊治。     

DNA序列测定法与实时荧光PCR法检测YMDD突变结果的比较

目的比较DNA序列测定法与实时荧光法检测YMDD突变的结果,并对除YMDD突变之外的耐药相关基因突变及其意义进行讨论。方法收集89例慢性乙肝患者的92份血清样本,均用实时荧光PCR法做YMDD突变检测。采用巢式PCR法扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,采用NTI软件比对结果,并对RT基因上其他11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在37份YMDD突变阴性的样本中,DNA测序法检测结果为33份M204M(未突变)、1份M204I、3份M204V;4份YMDD突变阳性样本均为突变/未突变序列共存;另检出7份样本存在ADV耐药相关突变,占18.9%(7/37)。在55份YMDD突变阳性样本中,DNA测序法检测到52份,阳性结果符合率为94.5%(52/55);另检出5例存在ADV或ETV耐药相关突变,占9.1%(5/55)。结论DNA序列测定法检测HBVRT基因耐药相关突变敏感性高,重复性好,与实时荧光PCR方法的检测结果有较高的符合率,可同时检出YMDD突变以外的各种耐药相关突变,有助于临床全面了解患者对核苷(酸)类似物的耐药情况,合理地制订抗HBV治疗方案。     

乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎患者血清前S1抗原、e抗原的检测的临床应用。方法采用ELISA法检测113例HBV-DNA阳性乙型肝炎患者血清前S1抗原、e抗原的。结果前S1抗原与HBV-DNA的符合率为69.91%,e抗原与HBV-DNA的符合率为66.37%,前S1抗原与e抗原的合计阳性率为75.22%。结论前S1抗原、e抗原单独用于评价HBV在体内复制具有一定的局限性,联合使用检出率较高。     

PCR结合地高辛标记探针杂交检验乙型肝炎病毒C基因启动子

应用聚合酶链式反应结合地高辛标记探针杂交方法检测乙型肝炎病毒C基因启动(HBV,CP)。对聚合酶链反应(PCR)法扩增的HBV DNA直接测序进行DNA同源性分析。并运用探针杂交对结果进行进一步鉴定;应用PCR法扩增20份患者血清,阳性率达95％(19/20),同时运用探针杂交进行进一步检验,与PCR结果符合率达90％以上,并选择中度、重度乙肝患者血清和pGEM,7Z—HBV质粒扩增的HBV.CP各一份分别进行测序,与报告基因的同源性分别为72％、66.5％、90％。建立了特异敏感的检测乙型肝炎病毒C基因启动子(HBV.CP)的PCR方法,可用于HBV基因变异规律的研究。同时初步的研究结果表明,肝炎病人的HBV.CP区存在较多的变异,可能与病情轻重有一定的相关性。     

PCR法检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞中HBV-DNA

目的：了解慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）HBV的感染情况及其与血清HBV的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测55例慢性乙型肝炎患者PBMCs和血清中HBV。结果：PBMCsHBV－DNA检出率为69％（38例／55例），血清HBV－DNA检出蓄为36％（20例／55例），PBMCsHBV－DNA与血清HBV－DNA无一致性，P＜0．05，PCR法检测慢性乙型肝炎患者HBV－DNA、PBMCs检出率优于血清检出率，P＜0．05。结论：在慢性乙型肝炎患者中，PBMCs存在HBV－DNA。