Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β_1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用

目的:通过观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:TGF-β_1(5μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β_1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT。进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β_1(+)组、TGF-β_1(-)组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平。结果:形态学观察可见TGF-β_1(+)组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似。与TGF-β_1(-)组比较,TGF-β_1(+)组E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin蛋白表达上调(P0.05);各组间Akt和GSK-3β的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β_1(+)组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β_1(-)组明显增强(P0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β_1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β_1(+)组下调(P0.05)。结论:TGF-β_1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT。     

激活法尼酯X受体上调核心蛋白聚糖表达对肾小管上皮细胞转分化的作用

目的研究激活法尼酯X受体(FXR)对核心蛋白聚糖(decorin)表达的变化及其对肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响。方法 (1)采用不同浓度的FXR特异性激动剂CDCA及拮抗剂Guggulsterones处理肾小管上皮细胞(HK-2),观察decorin的mRNA和蛋白表达的变化;(2)将HK-2细胞分为对照组,TGF-β1诱导组(20 ng/ml),TGF-β1诱导加CDCA组(100μmol/L)和TGF-β1诱导加CDCA、Guggulsterones共处理组,48 h后观察各组细胞的形态变化,检测各组decorin、E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达的情况。结果 (1)CDCA激活HK-2细胞FXR,decorin的mRNA和蛋白表达升高,且呈剂量依赖。在100μmol/L CDCA和不同浓度Guggulsterones共处理HK-2细胞,随着Guggulsterones浓度升高,decorin的mRNA和蛋白表达逐渐减低;(2)RT-PCR和Western blot显示,decorin在对照组、TGF-β1组无表达,在TGF-β1+CDCA组明显上调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著下降;E-cadherin在对照组高表达,在TGF-β1组显著下调,在TGF-β1+CDCA组显著上调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著下降;α-SMA在对照组无表达,在TGF-β1组显著上调,在TGF-β1+CDCA组显著下调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著上调。结论 CDCA激活肾小管上皮细胞FXR能够通过上调decorin的表达,从而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化。     

乙肝病毒X 蛋白结合蛋白可能通过PI3K / Akt 信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)通过调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白表达;以肝癌细胞HepG2为研究对象,MTT实验、划痕实验检测过表达HBXIP及抑制HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的影响,Western blot检测过表达HBXIP的肝癌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,分析PI3K抑制剂(LY294002)对过表达HBXIP的肝癌细胞增殖和迁移的影响。结果:与HL7702细胞比较,肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白相对表达水平均明显升高(P0.05);过表达HBXIP能够促进肝癌细胞增殖和迁移能力,促进肝癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达,而沉默HBXIP后肝癌细胞增殖和迁移能力降低;使用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路能够逆转过表达HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:HBXIP在肝癌细胞中高表达,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。     

PI3K/CTGF信号通路在TGF-β1诱导A549细胞表达collagen Ⅰ过程中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/结缔组织生长因子(PI3K/CTGF)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺腺癌A549细胞表达I型胶原蛋白(collagen I)过程中的分子机制。方法:体外培养A549细胞,予TGF-β1刺激,观察CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达及PI3K信号通路的活化;PI3K抑制剂LY294002预先处理A549细胞后,观察TGF-β1刺激下CTGF和collagen I mRNA和蛋白表达的变化;CTGF特异性si RNA干扰A549细胞中CTGF的表达后,观察TGF-β1刺激下collagen I mRNA和蛋白表达的变化和PI3K信号通路的活化。结果:TGF-β1可以诱导A549细胞中CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达以及PI3K信号通路的活化;PI3K特异性抑制剂LY294002可以部分逆转TGF-β1诱导的A549细胞中CTGF和Collagen I mRNA和蛋白表达的升高。干扰CTGF可以降低TGF-β1诱导的A549细胞collagen I mRNA和蛋白表达,而不影响PI3K信号通路的活化。结论:CTGF是TGF-β1/PI3K信号通路调控的即刻早期反应效应蛋白,参与了TGF-β1诱导的A549细胞中collagen I表达。     

Apelin-13通过PI3K/Akt信号通路抑制尼古丁诱导的H9c2细胞凋亡

目的:研究小分子活性肽apelin-13对尼古丁诱导的心肌细胞凋亡的作用,探讨其可能的调节机制。方法:建立尼古丁诱导的大鼠H9c2细胞凋亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:(1)与正常对照组相比,尼古丁组细胞凋亡率明显增加(P0.01),凋亡相关蛋白Bax和cleaved caspase-3的表达显著上调, Bcl-2、p-Akt、p-PI3K和APJ蛋白的表达显著下调(P0.01);(2)与尼古丁组相比,apelin-13+尼古丁组细胞的凋亡率明显降低(P0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达显著降低(P0.01), Bcl-2、p-Akt、p-PI3K和APJ蛋白的表达显著升高(P0.01);(3)与apelin-13+尼古丁组相比,apelin-13+尼古丁+PI3K/Akt抑制剂LY294002组细胞凋亡率明显增加(P0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达显著增加(P0.01), Bcl-2、p-Akt和p-PI3K蛋白的表达显著下调(P0.01)。结论:Apelin-13通过PI3K/Akt信号通路抑制尼古丁诱导的H9c2细胞凋亡。     

转化生长因子β1促进骨髓间充质干细胞Snail表达的信号转导通路

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)引起骨髓间充质干细胞(BMSCs)Snail表达改变中的调控作用. 方法 采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠BMSCs,用免疫荧光法对培养第3代的细胞进行鉴定.应用Western blotting检测TGF-β1对p-ERK1/2及p-Akt表达的影响,以不同浓度ERK特异性抑制剂(PD98059)或PI3K通路特异性抑制剂(Wortmannin)干预后检测BMSCs ERK、Akt磷酸化水平变化,确定PD98059和Wortmannin分别抑制Snail诱导的BMSCs ERK和Akt磷酸化的有效浓度,进而用RT-PCR、Western blotting技术证实TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞Snail mRNA及蛋白表达的影响. 结果 密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMSCs,免疫荧光检测显示,培养的细胞CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;Western blotting分析显示,TGF-β1作用6h后BMSCs p-Akt和p-ERK水平较对照组明显增高;Wortmannin和PD98059可分别以剂量依赖性抑制BMSCs p-Akt和p-ERK水平;可有效抑制TGF-β1诱导的BMSCs ERK及Akt的磷酸化,PD98059和Wortmannin相应浓度分别为30 μmol/L和40 nmol/L.PD98059(30 μmol/L)、Wortmannin(40 nmol/L)明显抑制了TGF-β1诱导的Snail mRNA及蛋白水平,而两者联合应用对骨髓间充质干细胞Snail mRNA及蛋白表达的抑制作用具有协同作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 TGF-β1能促进BMSCs的Snail的转录及蛋白的表达,且ERK1/2及PI3K转导通路的激活在此过程中具有调控作用.     

miR-140-5p靶向调控HAND2影响TGF-β1诱导肾小管上皮细胞生长

目的探讨miR-140-5p调控心脏神经脊衍生物表达转录因子2(HAND2)对转化生长因子β1(TGF-β1诱导肾小管上皮细胞生长的影响。方法实验设置TGF-β1组、对照(NC)组、miR-NC组、miR-140-5p组、anti-miRNC组、anti-miR-140-5p组、miR-NC+TGF-β1组、miR-140-5p+TGF-β1组、si-NC+TGF-β1组、si-HAND2+TGF-β1组、miR-140-5p+pcDNA-NC+TGF-β1组、miR-140-5p+pcDNA-HAND2+TGF-β1组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-140-5p和HAND2 mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测HAND2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p和HAND2的靶向关系。结果 TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞中miR-140-5p低表达,HAND2高表达。高表达miR-140-5p或低表达HAND2,TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞中CyclinD1表达水平升高,Cleaved-caspase-3表达水平降低,细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低(P0.05)。miR-140-5p靶向调控HAND2,高表达HAND2可以逆转miR-140-5p对TGF-β1处理的肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。高表达miR-140-5p,p-PI3K、p-AKT表达水平升高;而高表达HAND2逆转了miR-140-5p对PI3K/AKT信号通路的促进作用。结论过表达miR-140-5p通过靶向下调HAND2激活PI3K/AKT信号通路促进肾小管上皮细胞增殖,抑制响TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞凋亡。     

锌离子对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的研究锌离子对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:①正常对照组;②TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);③ZnSO_4作用组(30μM ZnSO_4作用24h后,加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western blotting方法检测波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原酶(collagenⅠ)蛋白表达。应用Western blotting检测p-Akt蛋白表达。结果 TGF-β1可以导致肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ和p-Akt蛋白表达增高,使E-cadherin蛋白表达降低。ZnSO_4作用后可有效降低由TGF-β1导致的肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ及p-Akt的高表达,同时使E-cadherin蛋白表达增多。结论 ZnSO_4阻抑TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用可能与PI-3K/Akt信号通路相关。     

三七总皂苷对马兜铃酸Ⅰ诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨三七总皂苷(total saponins of panax notoginseng,PNS)对马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid Ⅰ,AAI)诱导的人肾小管上皮细胞株HK-2转分化的影响.方法:应用倒置相差显微镜观察HK-2细胞形态学变化;免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,a-SMA)的表达;ELISA法测定培养细胞上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量.结果:AA I诱导组HK-2细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;胞浆内大量表达α-SMA,其积分光密度值增加(P<0.05);细胞培养上清液中TGF-β1含量均增加,且呈时间依赖性(P<0.05).不同剂量PNS治疗可减轻从Ⅰ诱导的细胞形态学改变,不同程度的抑制α-SMA的表达和TGF-β1的分泌,且呈剂量依赖性(P<0.05).PNS对照组HK-2细胞形态学、α-SMA表达和TGF-β1分泌与空白对照组比较均无明显变化.结论:AA I可通过促进TGF-β1的分泌诱导肾小管上皮细胞转分化,促进细胞外基质α-SMA的合成;PNS可抑制AA I诱导的肾小管上皮细胞转分化作用,减少α-SMA的表达,该作用可能是通过抑制TGF-β1表达实现的.     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察甲状旁腺素(PIH)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分别用不同浓度的PTH(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L)作用于HK-2细胞48 h,以及10-8 mol /L作用于HK-2细胞不同时间(12、24、48、72 h).应用RT-PCR法检测HK-2细胞内α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA阳性细胞百分数,Western blot法检测细胞内α-SMA的蛋白表达水平.结果:(1)RT-PCR结果表明,PTH呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.01),且两者之间呈正相关(P＜0.05).(2)免疫细胞化学结果表明,PTH可增加表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分数,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).(3)Western blot结果表明,PTH 可增加HK-2细胞α-SMA的蛋白表达量,也呈剂量和时间依赖性(P＜0.01).结论:PTH可通过促进肾小管上皮细胞转分化以及TGF-β1的表达促进肾小管间质纤维化.     

桔皮素对人非小细胞肺癌细胞生长及侵袭的影响

目的:探讨桔皮素(TGN)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长和侵袭的影响及其分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分别用不同浓度的TGN处理,MTT比色法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭,RT-PCR分析MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平,Western blotting检测Ki67、Cyt C、caspase-3、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9、Akt、p-Akt以及p-PI3K表达水平。结果:桔皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖(P0.05),同时伴随有增殖标记分子Ki67表达水平的下调。分析发现,桔皮素诱导细胞中Cyt C、caspase-3和cleaved caspase-3的表达上调(P0.01),加速A549细胞的凋亡。此外,桔皮素作用后,A549细胞中侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达量下降,且侵袭数目随桔皮素浓度增加而减少。进一步研究表明,桔皮素作用后A549细胞中p-Akt和p-PI3K表达水平降低(P0.05),阻断PI3K/Akt信号通路后,不同浓度TGN对细胞活性影响没有变化。结论:桔皮素能抑制A549细胞生长及侵袭,促进细胞凋亡,可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活起作用。因此,本研究将为非小细胞肺癌的防治提供新的研究方向。     

MEX3A通过PI3K/Akt信号通路促进结直肠癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨MEX3A在结直肠癌(CRC)中的表达水平,及MEX3A对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制.方法 通过TCGA数据库获取327例数据(正常组织41例,肿瘤组织286例),收集临床样本104例(癌旁组织27例,癌组织77例),进行免疫组织化学染色,分析MEX3A在结直肠癌和正常组织间表达的差异.利用Wes...     

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的 检测胰岛素样生长因子2（IGF2）对人卵巢颗粒细胞（KGN细胞）增殖的调控作用及作用机制。 方法 将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组（对照组和25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组（以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组）。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）及CYP19A1蛋白表达。 结果 随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以 100 μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高 (P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1 蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+ LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,CYP19A1在IGF2组明显升高（P<0.01）,LY294002组p-Akt及 CYP19A1蛋白明显降低（P<0.05）,IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低（P<0.01）,IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt 及CYP19A1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）。 结论 IGF2 可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt 信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。     

TGF-β1对胃癌细胞增殖、凋亡及miR-302a和AKT通路的影响

目的探究转化生长因子-β1(TGF-β1)对胃癌细胞增殖、凋亡及miR-302a和AKT通路的影响.方法在含有TGF-β1(0、1、5、10 ng/ml)的培养基培养胃癌细胞系BGC-823,MTT法检测细胞增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数量;Hoechst33258染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡以及周期阻滞情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞miR-302a表达;蛋白印迹(WB)法检测p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况.结果与Control组相比,TGF-β1处理组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高,细胞克隆数量降低,且随着TGF-β1浓度的增加,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率逐渐升高,细胞克隆数量逐渐降低(P<0.05).与Control组相比,TGF-β1处理组G1期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低,且随着TGF-β1浓度的增加,G1期细胞比例逐渐增加,G2期细胞比例逐渐降低(P<0.05).与Control组相比,TGF-β1处理组miR-302a表达升高,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著降低,且随着TGF-β1浓度的增加,miR-302a表达逐渐升高,p-PI3K、p-AKT蛋白表达逐渐降低(P<0.05).结论TGF-β1可能通过上调miR-302a表达、抑制AKT通路,使细胞G1期阻滞,从而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡.     

慢病毒短发夹RNA介导的多形性腺瘤基因样蛋白2沉默对肝癌细胞MHCC97-L增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨慢病毒短发夹RNA(shRNA)介导的多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)沉默对肝癌细胞恶性行为的影响及其机制.方法 Real-time PCR与Western blotting分别检测肝癌组织及癌旁组织中PLAGL2的表达水平;体外培养肝癌细胞MHCC97-L,构建慢病毒载体质粒PLAGL2-shRNA与...     

下调晚期糖基化终末产物受体对乳腺癌细胞 增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响*

目的：研究下调晚期糖基化终末产物受体（RAGE）对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。 方法：培养乳腺癌BT474 细胞,分为对照组（ 不做任何处理的乳腺癌BT474 细胞）、上调组（ 乳腺癌BT474 细 胞+RAGE阴性对照）、下调组（ 乳腺癌BT474 细胞+RAGE siRNA）。用四甲基偶氮唑盐法检测乳腺癌细胞增 殖、凋亡水平;用Transwell 法检测乳腺癌细胞迁移、侵袭水平;用免疫印迹法检测细胞PI3K/Akt 信号通路蛋白 PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、caspase 3、Bcl-2、Bax 表达量。结果：下调组细胞不同时间点增殖率均显著低于 上调组、对照组。下调组细胞不同时间点凋亡率均显著高于上调组、对照组。下调组细胞迁移、侵袭数均显著 低于上调组、对照组。下调组p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2 蛋白表达量低于上调组、对照组,caspase 3、 Bax 蛋白表达量高于上调组、对照组。结论：经下调RAGE作用于PI3K/Akt 信号通路,其可抑制p-PI3K、PI3K、 Akt、p-Akt、Bcl-2 表达,促进caspase 3、Bax 表达,致乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移。     

米诺环素通过调控PI3K/Akt通路抑制硝普钠诱导的PC12细胞凋亡

 目的： 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素（minocycline,MC）抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的PC12细胞分为4组：空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点（0.5、1、2、3 h）各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果：SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率（P<0.05）,抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论：MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。     

小泛素样修饰蛋白1假基因3通过蛋白激酶B信号通路影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) 小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法 用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化。在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA（siRNA）,Real-time PCR方法测定下调效果, MTT法和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖, PI单染法测定细胞周期,膜联蛋白 V-FITC（annexin V-FITC）/PI法检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测剪切的Caspase-3（c-Caspase-3）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、P27、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达。Akt信号激活剂处理转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、凋亡和周期变化。样本数均为9。 结果 SUMO1P3在非小细胞肺癌细胞中表达上调。转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞中SUMO1P3表达水平降低,细胞增殖能力下降,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中c-Caspase-3和P27蛋白水平升高,cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白水平下降。Akt信号激活剂可以逆转SUMO1P3 siRNA对H1299细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。 结论 下调SUMO1P3抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与降低Akt信号通路激活水平有关。     

PI3K/Akt信号通路在脓毒症肾脏损伤诱导的自噬中的调节作用*

 目的：研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法：对大鼠盲肠进行结扎与穿刺（CLP）,对肾脏组织切片进行HE染色,并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬,检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ/Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况;进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果：同对照组相比,CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变,血清尿素氮和肌酐均有上升。CLP肾脏损伤发生后,自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。LPS刺激HK-2细胞后,随着刺激浓度的增加,p-Akt(308)表达量逐渐提高,而LC3Ⅰ/Ⅱ及p-Akt(472)的表达量在10 mg/L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长,p-Akt(308)表达量逐渐提高;LC3Ⅰ/Ⅱ表达量同p-Akt(472)在刺激8 h时最高;使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后,LPS诱导的LC3表达显著下调,HK-2细胞凋亡明显增加。结论：CLP肾脏损伤发生时可以诱导自噬发生, PI3K／Akt信号通路在其中发挥重要调节作用。     

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。