阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤的抑制作用及机制研究

目的探讨抗血管生成药物阿帕替尼与常用化疗药物阿霉素联合应用对外周T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的抑制作用以及相关分子作用机制,为开发外周T细胞淋巴瘤治疗新方法提供实验依据。方法将Hut78细胞分为不同浓度药物处理组:阿帕替尼单药(10、20、40、60μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2、4μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1],分别作用72 h,采用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后对Hut78细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度阿帕替尼(10、20、40μmol·L^-1)作用24 h后对Hut78细胞周期的影响。采用蛋白印迹法检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后,Hut78细胞中PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bcl-2、Casepase-3、Bax的表达变化。结果不同浓度(10、20、40、60μmol·L^-1)的阿帕替尼作用72 h后,细胞抑制率分别为(13.42±2.19)%、(19.52±4.16)%、(31.49±3.16)%、(52.88±3.37)%,72 h的IC₅₀值为(59.34±0.31)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.116,P=0.018);不同浓度(1、2、4μmol·L^-1)的阿霉素分别作用72 h后,细胞抑制率分别为(15.82±3.23)%、(31.70±4.79)%、(42.34±5.23)%,72 h的IC₅₀值为(5.52±0.18)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.532,P=0.015);阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1]作用72 h的细胞抑制率分别为(51.70±2.09)%、(56.62±4.83)%、(61.35±1.79)%、(65.13±3.88)%。两药的联合指数(CI)<1,说明二者具有药物协同作用。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)作用24 h的细胞凋亡率分别为(15.65±0.75)%、(13.85±2.15)%、(23.60±1.30)%,阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24h的细胞凋亡率分别为(27.00±1.90)%、(33.20±2.30)%,各药物处理组与对照组[(6.10±0.90)%]比较,差异有统计学意义(χ²=16.251,P=0.006)。不同浓度(10、20、40μmol·L^-1)的阿帕替尼作用24 h后,G₀/G₁期细胞比例随浓度升高而升高[(49.27±0.45)%、(50.34±1.24)%、(59.16±1.23)%],S期细胞比例随浓度升高而降低[(42.81±2.22)%、(39.19±2.71)%、(34.08±1.01)%],各药物处理组与空白对照组[G₀/G₁期(39.26±0.65)%,S期(49.40±2.52)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)以及阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24 h后,PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、p-Akt和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平呈下降趋势,促凋亡蛋白Casepase-3和Bax的表达水平呈上升趋势,Akt蛋白的表达水平无明显变化,各药物处理组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2、Casepase-3及Bax蛋白表达水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿帕替尼可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,同时具有细胞周期阻滞作用,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活实现的。阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤细胞具有协同抑制作用。     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

黄芪多糖对肺癌A549细胞自噬的作用及机制研究

目的 探讨黄芪多糖（APS）对黄嘌呤氧化酶（XOD）诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组：正常组、模型组(20 U·L^-1 XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L^-1 APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L^-1 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白,以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×10⁴±224.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1（P62）的蛋白荧光强度分别为2.86×10⁴     

戈米辛G抑制HepG2细胞生长的机制研究

目的 探讨戈米辛G对HepG2细胞生长的抑制作用。方法 将WRL68细胞和HepG2细胞分别分为3组：WRL68-1组（DMSO 10μL）、WRL68-2组(5μmol·L^-1Gomisin G 10μL)、WRL68-3组(10μmol·L^-1Gomisin G 10μL)和HepG2-1组（DMSO 10μL）、HepG2-2组(5μmol·L^-1Gomisin G 10μL)、HepG2-3组(10μmol·L^-1Gomisin G 10μL)。用MTT法检测WRL68细胞和HepG2细胞的增殖情况,并计算戈米辛G对于HepG2细胞的IC₅₀;用流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡情况;用蛋白质印迹法检测HepG2细胞Cyclin D1、bcl-2蛋白、Akt^p-Ser473和Akt蛋白的表达情况。结果 WRL68-1组、WRL68-2组、WRL68-3组细胞24 h时的增殖率分别为（45.00±0.12）%,（42.55±4.85）%和（44.02...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制

目的 观察并探讨姜黄素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制。方法 将A549细胞分为空白组(正常培养)和低、高剂量实验组(分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)及激动药+低、高剂量实验组(先用50μmol·L^-1 Recilisib Sodium干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)、抑制药+低、高剂量实验组(先用25μmol·L^-1 PI3K-IN-1干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)。用MTT法测定细胞增值率；用流式细胞术测定细胞凋亡情况；用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)mRNA的相对表达水平；用蛋白质印迹法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 空白组、低剂量实验组、高剂量实验组、激动药+低剂量实验组、抑制药+低剂量实验组、激动药+高剂量实验组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100...     

灵芝酸D通过调控p53/Bax通路对人结直肠肿瘤细胞的作用机制研究

目的 探究灵芝酸D（GAD）对人结直肠肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将直肠癌细胞系SW620分为6组：空白对照组（完全培养基）、低(5μmol·L^-1 GAD)、中(10μmol·L^-1 GAD)、高(20μmol·L^-1 GAD)3个剂量实验组、Pifithrin-α组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α)和联合组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α+20μmol·L^-1 GAD)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力,用Caspase-3/Caspase-8/Caspase-9检测试剂盒检测相应蛋白活性,用蛋白质印迹法检测抑癌蛋白p53（p53）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白质的表达水平。结果 空白对照组和低、中、高3个浓度实验组细胞增殖活性分别为（96.33±2.62）%,（95.00±1.63）%,（70.33±5.91）%和（49.00±3.56）%;4组Caspase-...     

藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其机制研究

目的 研究藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其作用机制。方法 取对数生长期的SK-N-SH细胞使用200μmol·L^-1的MPP⁺处理48 h,构建帕金森病细胞模型；以正常培养基培养的细胞作为对照组。藁本内酯组加入终浓度为30.0μmol·L^-1藁本内酯进行培养；P79350组加入30.0μmol·L^-1的藁本内酯后，实验结束前1 h加入50μmol·L^-1的P79350处理细胞；对照组和MPP⁺组加入不含药物的培养基培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力；以流式细胞术检测细胞周期情况和细胞凋亡率；以蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(p38 MAPK/JNK)信号通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达水平。结果 对照组、MPP⁺组和10.0、20.0、30.0、50.0、100.0和200.0μmol·L^-1藁本内酯组的细胞存活率分别为(100.00±1.91)%、(35...     

谷氨酰胺对脂多糖诱导结肠上皮细胞炎症损伤的保护作用

目的 探讨谷氨酰胺（Gln）对脂多糖（LPS）诱导结肠上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法 培养结肠上皮细胞Caco-2,并随机分为Control组,LPS组和0.5,1,2 mmol·L^-1 Gln组。Control组细胞正常培养,其余组细胞用10μg·mL^-1 LPS处理24 h后加入0.5,1,2 mmol·L^-1 Gln处理。2 mmol·L^-1 Gln组再加入西罗莫司（RAPA）处理,为2 mmol·L^-1 Gln+RAPA组。用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;以流式细胞术检测谷氨酰胺对LPS诱导Caco-2细胞凋亡的影响以及激活雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路逆转谷氨酰胺对LPS诱导Caco-2细胞功能的影响;以酶联免疫吸附（ELISA）法检测谷氨酰胺对LPS诱导的Caco-2细胞白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-8（IL-8）影响;以蛋白质印迹法检测谷氨酰胺对LPS诱导Caco-2细胞mTOR信号通路的影响。结果 不同浓度的Gln能够促进正常结肠上皮细胞...     

芸香苷改善椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的研究

目的 从细胞水平探究芸香苷对椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的影响及作用机制。方法 将大鼠椎间盘髓核细胞随机分为对照组、模型组[白细胞介素-1β(IL-1β)诱导]、低剂量实验组(25μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、中剂量实验组(50μmol·L^-1芸香苷+10ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量实验组(100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量+SIRT1激动药组[100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β+1μmol·L^-1沉默信息调节因子1(SIRT1)激动药SRT1720]。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验、蛋白质印迹法检测相关基因和蛋白的表达水平,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子的表达水平。结果 对照组、模型组、高剂量实验组、高剂量+...     

红景天苷通过AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究红景天苷(salidroside, SAL)对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用0、25、50、100μmol·L^-1剂量红景天苷处理SW480细胞,将细胞随机分为4组：SAL 0μmol·L^-1组、SAL 25μmol·L^-1组、SAL 50μmol·L^-1组和SAL 100μmol·L^-1组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分为2组：Control组和Salidroside 50 mg·kg^-1组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测裸鼠肿瘤细胞凋亡率,免疫组化染色检测Ki67、Caspase-3阳性细胞数。结果 体外实验中,与SAL 0μmol·L^-1组相比较,SAL...     

β-榄香烯对结肠癌SW480细胞放疗增敏作用

目的研究β-榄香烯对结肠癌细胞系SW480的放疗增敏作用,并分析其对磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法将细胞分为6组:空白对照组、辐照组(进行4 Gy辐照)、药物组(10μmol·L^-1β-榄香烯)、抑制剂组(50μmol·L^-1PI3K抑制剂,LY294002)、联合1组(4 Gy辐照+10μmol·L^-1β-榄香烯)、联合2组(4 Gy辐照+50μmol·L^-1LY294002)。用噻唑蓝法检测细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,用免疫印迹法测定相关蛋白表达。结果抑制剂组、药物组、辐照组、联合2组和联合1组细胞凋亡率分别为(20. 39±1. 34)%,(21. 62±1. 23)%,(8. 94±1. 16)%,(31. 76±4. 22)%和(32. 83±4. 17)%;这5组的G0/G1期DNA含量分别为52. 68±4. 13,54. 36±4. 68,49. 20±4. 77,74. 63±6. 29和74. 92±6. 34;这5组的细胞集落形成数目分别为111. 19±15. 33,108. 74±15. 28,116. 67±14. 39,45. 32±9. 06和40. 08±8. 43;这5组的细胞内p Akt蛋白表达水平分别为0. 86±0. 04,0. 85±0. 04,0. 87±0. 05,0. 42±0. 03和0. 41±0. 03。上述指标,联合2组、联合1组与抑制剂组、药物组和辐照组相比,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论β-榄香烯能够通过抑制PI3K/Akt信号通路激活,抑制周期相关蛋白表达引起G2/M期阻滞以抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡相关蛋白表达诱导细胞凋亡,从而提高SW480细胞的放射敏感性。     

野黄芩苷调控Wnt/β-catenin信号通路对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 观察野黄芩苷(Scu)对人结肠癌细胞迁移和侵袭的影响及相关作用机制。方法 采用CCK8法检测40、80、120、160、200、240、280μmol·L^-1 Scu对人结肠癌SW480和HCT116细胞以及人肾皮质近曲小管上皮HK-2细胞活力的影响，计算半数抑制浓度(IC50)值。采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移和小室侵袭实验检测Scu对SW480和HCT116细胞迁移和侵袭的影响，Western blot法检测50、100、150μmol·L^-1 Scu对SW480细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果 120、160、200、240、280μmol·L^-1Scu显著抑制SW480和HCT116细胞的活力(P <0.01)，作用24 h后的IC50值分别为157.7和179.2μmol·L^-1。与空白组比较，50、100、150μmol·L^-1 Scu组SW480和HCT116细胞划痕宽度...     

黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响

目的 研究黄芪甲苷对食管鳞癌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法 体外培养Eca109细胞,用不同浓度(0、20、60和120μmol·L^-1)的黄芪甲苷处理细胞,并把细胞随机分为4组：Control组、AST组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理)、AST+pcDNA-NC组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-NC)、AST+pcDNA-SATB1组(120μmol·L^-1黄芪甲苷处理+转染pcDNA-SATB1)。用细胞计数法-8（CCK-8）检测各组细胞增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测各组细胞SATB1、Bcl-2、Bax和Cl-caspase-3蛋白表达量。结果 Control组、AST组、AST+pcDNA-NC组、AST+pcDNA-SATB1组的SATB1的蛋白表达量分别为0.89±0.11,0.34±0.06,0.38±0.06,0.76±0.09,72 h OD值分别为1.16±0.14,0.57±0.08,0.64±0.08,0.89±...     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

白藜芦醇对膜性肾病大鼠的肾保护作用

目的研究白藜芦醇对膜性肾病大鼠的肾保护作用及可能的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组及实验组,各20只。用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)构建膜性肾病大鼠,正常组给予等量生理盐水。建模后实验组灌胃白藜芦醇(30 mg·kg-1),模型组及正常组灌胃等量生理盐水,每天1次,连续干预4周。用分光光度计检测24 h尿蛋白定量(UTP),用试剂盒检测血清中肌酸酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)指标水平,以免疫组化法检测大鼠肾组织synaptopodin蛋白表达情况,以蛋白质印迹(WB)法检测大鼠肾组织中p-Akt、mTOR、PI3K蛋白表达。结果正常组、模型组和实验组大鼠血清中Scr分别为(29.16±1.77),(52.64±2.78)和(40.55±2.65)μmol·L^-1,BUN分别为(5.86±1.35),(13.54±2.36)和(7.66±3.45)mmol·L^-1,24 h UTP分别为(6.85±1.26),(39.52±1.24)和(25.36±1.42)mg,ALB分别为(32.15±3.49),(19.63±2.48)和(26.34±2.58)g·L^-1,TC分别为(1.26±0.52),(4.02±0.36)和(2.36±0.52)mmol·L^-1,肾组织synaptopodin蛋白表达量分别为(45.36±2.18)%,(12.63±3.85)%,(23.26±3.09)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组肾组织中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)相对表达量较正常组升高,而实验组低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论白藜芦醇可减少膜性肾病大鼠尿蛋白程度,防止synaptopodin降解,降低PI3K/Akt/mTOR信号通路中蛋白表达,从而发挥对膜性肾病的肾保护作用。     

核因子-κB抑制剂联合核因子E2相关因子2抑制剂对人结肠癌HCT116细胞凋亡的作用机制研究

目的探究核因子κB（NF-κB）抑制剂（BAY11-7082）联合核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）对人结肠癌细胞HCT116的作用机制。方法体外培养人结肠癌细胞HCT116,将细胞分为4组:空白对照组、NF-κB抑制剂组、Nrf2抑制剂和联合组。空白对照组以RPMI-1640培养基进行培养,NF-κB抑制剂组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082干预,Nrf2抑制剂组以5μmol·L^-1 ML385干预,联合组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082+5μmol·L^-1 ML385干预,干预时间为24 h。MTT法检测人结肠癌细胞HCT116增殖抑制率,以流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡状况,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及Nrf2、NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果 ML385、BAY 11-7082均能显著抑制人结肠癌细胞HCT116增殖（均P<0.05）;干预24 h,空白对照组、Nrf2抑制剂组、NF-κB抑制剂组和联合组的细...     

黄芪对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究黄芪在高糖诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移中的作用及其机制。方法 取VSMCs随机分为对照组（普通培养）、高糖组(25mmol·L^-1葡萄糖)、实验组(25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)、第1转染组(转染阴性对照寡核苷酸+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·ml^-1黄芪)、第2转染组(转染miR-18a-5p模拟物+25 mmol·L^-1葡萄糖+40μg·m L^-1黄芪)。以细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞的存活率;以划痕实验检测细胞迁移情况;以实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-18a-5p的表达;以蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2 （MFN2）蛋白的表达。结果 对照组、高糖组和实验组VSMCs存活率分别为（100.00±10.00）%,（188.24±18.17）%和（123.52±12.66）%;VSMCs迁移率分别为（15.16±1.64）%,（53...     

达格列净对高糖诱导的人近端肾小管细胞损伤的保护作用

目的 研究达格列净对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用。方法 将HK-2细胞随机分为空白组、对照组、模型组和实验组。空白组不进行任何干预;对照组加入5μmol·L^-1达格列净;模型组加入25 mmol·L^-1葡萄糖;实验组加入25 mmol·L^-1葡萄糖和5μmol·L^-1达格列净,各组细胞培养24 h后进行后续检测。用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖情况,用酶生化法和荧光显微镜法检测各组细胞内丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）水平,用酶联免疫吸附法检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和转化生长因子-β1（TGF-β1）、肝细胞生长因子（HGF）水平。结果 空白组、对照组、模型组和实验组HK-2细胞的凋亡率分别为（4.73±0.46）%,（4.46±0.61）%,（35.42±2.37）%和（19.55±1.87）%;细胞增殖光密度值分别为0.52±0.09,0.49±0.07,0.13±0.03和0.29±0.05;细胞内MDA水平分别为...     

大麻二酚对人子宫内膜癌细胞活性的影响

目的 研究大麻二酚对子宫内膜癌Ishikawa细胞的活性、增殖、迁移生物学作用以及促凋亡的作用机制。方法 用0,5,10,20μmol·L^-1的大麻二酚处理Ishikawa细胞24 h。用细胞计数法-8（CCK-8）、集落形成实验和Transwell实验分别测定细胞增殖和迁移情况;用Hoechst 33258染色及AnnexinⅤ-FITC/PI双重染色方法检测Ishilawa细胞凋亡情况;用DCFH-DA荧光染料对细胞活性氧进行检测;以蛋白质印迹（Western blot）法检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyto C）抗体、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved caspase 3）的蛋白表达情况。结果 CCK-8检测显示,5,10,20μmol·L^-1大麻二酚组的细胞增殖率分别为（82.38±9.63）%,（47.38±5.32）%,（36.06±4.14）%,具有浓度依赖性。与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1大麻二酚组细胞克隆形成率分别为（78.22±8...