蛋白质芯片检测法在过敏原特异性抗体检测中的应用

目的探讨蛋白质芯片技术诊断过敏性疾病的可行性。方法应用蛋白质芯片方法,将10种常见过敏原抗原集成到活化的玻璃芯片上,并保持蛋白质活性,通过与202例患者标本的反应,同时得到10种过敏项目的检测结果。结果蛋白质芯片法检测结果与对照方法间符合率较高,差异无统计学意义(P>0.05)。结论蛋白质芯片方法可以高通量、即时地检测过敏原血清中IgE的变化,灵敏度达0.5IU/mL,可满足临床上对变态反应性疾病的诊断要求。     

蛋白质芯片检测技术的研究进展

蛋白质芯片为快速、高效、高通量地分析和检测蛋白质提供了强有力的工具。在后基因组时代,它已成为人们研究的热点之一。本文就近年来蛋白质芯片的检测现状及新进展作一简要综述。     

蛋白质芯片的制备技术研究

蛋白质水平的研究是揭示生命现象本质的关键，新近发展起来的蛋白质 芯片技术为进行蛋白质的研究、检测提供了新的手段，本文综述了目前建立起来的包括蛋白质陈列芯片、构象型蛋白芯片、SELDI技术蛋白芯片和光学蛋白芯片等几种蛋白质芯片的制备技术研究，以及原理、特点和用途。     

蛋白质芯片的制备技术研究

蛋白质水平的研究是揭示生命现象本质的关键,新近发展起来的蛋白质芯片技术为进行蛋白质的研究、检测提供了新的手段,本文综述了目前建立起来的包括蛋白质阵列芯片、构象型蛋白芯片、SELDI技术蛋白芯片和光学蛋白芯片等几种蛋白质芯片的制备技术研究,以及原理、特点和用途。     

基于金磁微粒标记技术的可目视化蛋白质芯片检测方法的建立

目的：应用金磁微粒标记蛋白质技术,建立可目视化蛋白质芯片检测体系,比较金磁微粒和胶体金标记蛋白质技术应用于蛋白质芯片检测效果的优劣。方法：将人IgG点制于环氧基修饰的玻片上,分别与金磁微粒和胶体金标记的羊抗人IgG温育,银染显色,肉眼观察并用普通扫描仪记录结果。结果：基于金磁微粒的蛋白质芯片人IgG最佳点样浓度为0．2mg／ml,37℃温育2h,银染10～15min,检测结果信噪比高;基于胶体金的蛋白质芯片人IgG最佳点样浓度为0．1mg／ml,37℃温育1h,银染15～20min．检测结果信噪比高。结论：金磁微粒标记蛋白质技术应用于蛋白质芯片的检测,具有和胶体金一致的可目视化检测效果。且其标记技术简单,标记的蛋白质可定量。     

免疫芯片研究的现状及未来

生物科学正迅速演变为一门信息科学 ,微型化分析系统正在对 2 1世纪的生命科学形成强有力的冲击 ,其中最有代表性的是生物芯片技术[1 4]。综观生物芯片的发展 ,以微阵列技术为基础的检测用生物芯片的发展最为迅速[5 7]。如基因微阵列检测芯片和蛋白质微阵列检测芯片[8 10 ]。基因芯片已广泛应用于生物基础研究及临床医学各领域。随着人类基因组计划测序工作的完成 ,即将进入后基因组时代 ,对更加复杂的蛋白质功能研究 ,迫切需要蛋白质芯片技术。免疫芯片 (immunochip)是一种特殊的蛋白质芯片 ,芯片上固定的蛋白质是特异性的抗体 (或抗原 ) …     

光学蛋白质芯片法定量检测C-反应蛋白的研究

目的本研究利用光学蛋白质芯片系统定量检测心肌梗死早期标志物C-反应蛋白（CRP）,探讨光学蛋白质芯片在医学检验诊断中的应用。方法实验采用椭偏光学生物显微成像系统、光学蛋白质芯片分析系统及软件、芯片装置、微流控芯片加样系统等,在4×6点芯片上装配生物探针,然后用人血清蛋白（HAS）封闭检测位点,利用抗原、抗体特异性结合的特性定量检测CRP（选用浓度为200、100、50、20、10、5μg/ml）,并绘制了检测CRP的标准曲线。采用SPSS统计学软件10.0分析处理实验数据。结果检测结果显示,CRP浓度与检测位点具有高度相关性,具有浓度-灰度的一致性,可以绘制出定量检测标准曲线,检测灵敏度为5μg/ml,符合临床检测CRP的灵敏度要求。各浓度（5、10、20、50、100、200μg/ml）的组内变异系数（CV%）分别为：2.47%、1.15%、2.06%、4.32%、1.39%、0.36%,皮尔逊相关系数为95.3%。结论光学蛋白质芯片可以定量检测CRP,灵敏度为5μg/ml,符合临床检测CRP的灵敏度和实用要求,具有临床检测CRP的潜在应用前景。此外,利用椭偏光显微成像技术的光学蛋白质芯片不需要标记试剂,被测样品不需要任何处理,样品需要量少,操作简单。     

蛋白质芯片技术在蛋白质组研究领域的应用

蛋白质芯片具有高通量、微型化、集成化、平行性检测等特点，逐渐应用于疾病检测、新药筛选等诸多领域。近几年，与色谱、质谱、凝胶电泳等联合应用于蛋白质组研究领域，成为检测蛋白质存在和变化的高效工具，为蛋白质组学研究提供了新的有力手段。现简要综述了蛋白质组、蛋白质组学及蛋白质芯片技术的概况、基本原理及其在蛋白质组学研究中的应用，提出了该技术存在的问题，并对该技术的前景进行了展望。     

蛋白质芯片技术在蛋白质组研究领域的应用

蛋白质芯片具有高通量、微型化、集成化、平行性检测等特点 ,逐渐应用于疾病检测、新药筛选等诸多领域。近几年 ,与色谱、质谱、凝胶电泳等联合应用于蛋白质组研究领域 ,成为检测蛋白质存在和变化的高效工具 ,为蛋白质组学研究提供了新的有力手段。现简要综述了蛋白质组、蛋白质组学及蛋白质芯片技术的概况、基本原理及其在蛋白质组学研究中的应用 ,提出了该技术存在的问题 ,并对该技术的前景进行了展望。     

伤寒、副伤寒分型诊断蛋白质芯片法的建立和应用

目的 探讨应用蛋白质芯片技术诊断伤寒、副伤寒的可行性.方法 利用蛋白质芯片方法,将伤寒抗原(To、Th)和副伤寒抗原(Ta、Tb、Tc)及伤寒Vi荚膜多糖抗原集成到已经活化处理的玻璃芯片上,使其保持蛋白质活性和立体结构不变.对86例经血培养确认的已知标本和100例健康体检标本进行检测,并与肥达氏反应作比较.结果 蛋白质芯片法检测结果与血培养结果符合率高,灵敏度为97.6%,特异度为98.0%,而肥达氏反应灵敏度为60.4%,特异度98.0%,两方法之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 蛋白质芯片法具有高通量、可并行检测伤寒、副伤寒多种抗体的优势,为伤寒、副伤寒的诊断提供了有效手段.     

SELDI技术对肝硬化相关血浆差异蛋白的鉴定

目的建立基于SELDI-TOF-MS技术的蛋白质分离、纯化、鉴定技术,用于鉴定运用SELDI技术发现的肝硬化相关血浆差异蛋白。方法采用尿素预处理血液样本,结合离子交换层析、SELDI芯片检测及芯片上酶解、质谱鉴定等多种技术手段,对肝硬化相关的差异蛋白质进行了分离、纯化和鉴定。结果选用阳离子交换剂对血浆样品进行分离,并对分离的各组分进行芯片检测,在300 mM NaCl洗脱组分中,含有与目标蛋白荷质比相同、理化性质相同的蛋白质峰,并且该目标蛋白得到富集。采取芯片原位酶解的方法对目标蛋白进行快速酶解和质谱鉴定,鉴定该差异蛋白为人血浆结合珠蛋白。结论这一技术路线可以对前期运用SELDI技术检测到的疾病相关的差异蛋白质峰进行分离、纯化和鉴定,从而开展进一步的机制研究和应用研究。     

蛋白质芯片及其在临床医学中的研究进展

人类基因组计划的测序完成后 ,另一个更加艰巨的任务就是确定基因组编码的所有蛋白质结构和生物学功能。由于蛋白表达水平未完全与ｍＲＮＡ表达水平相一致 ,得到表达的蛋白要经过翻译后修饰 ,因此仅用基因芯片研究基因功能是不全面的。虽然 ,传统生物化学方法在单个蛋白功能研究方面功不可没 ,但不适用于细胞、组织、微生物中每个蛋白的研究 ,更不能满足全基因组范围内大规模检测分析的要求。于是 ,作为一种高通量、高灵敏度、高特异性且微型化的蛋白质分析技术 ,蛋白质芯片在众多蛋白质测定方法中脱颖而出。一、蛋白质芯片蛋白质芯片又名蛋…     

微流控芯片用于分离蛋白质的影响因素及临床应用

目的建立微流控芯片电泳分离蛋白质的方法，并探讨微流控芯片电泳在分离临床尿液蛋白组份中的初步应用价值。方法①利用自制的微流控电泳分析仪和自制的石英芯片对电泳条件进行摸索，进行微流控芯片电泳分离蛋白质的方法学重复性、检测限及抗干扰实验；②利用全自动琼脂糖电泳仪与微流控芯片电泳仪对临床尿液标本进行电泳分离，对尿液中的蛋白质进行初步定性，判断尿液中蛋白质的来源。结果①在75mmol／L硼酸盐（pH10．5）含1％（v／v）乙胺电泳缓冲液中，进样电压500V，15s时电泳蛋白可得到基线分离；②在36例尿蛋白阳性患者中，用该法检测发现溢出性蛋白尿2例、选择性蛋白尿16例、非选择性蛋白尿18例，20例健康对照未检出蛋白峰。结论该法快速、简便，检测成本极低，有利于临床的诊断和预后判断，有较好的应用前景。     

微流控芯片用于分离蛋白质的影响因素及临床应用

目的建立微流控芯片电泳分离蛋白质的方法,并探讨微流控芯片电泳在分离临床尿液蛋白组份中的初步应用价值。方法①利用自制的微流控电泳分析仪和自制的石英芯片对电泳条件进行摸索,进行微流控芯片电泳分离蛋白质的方法学重复性、检测限及抗干扰实验;②利用全自动琼脂糖电泳仪与微流控芯片电泳仪对临床尿液标本进行电泳分离,对尿液中的蛋白质进行初步定性,判断尿液中蛋白质的来源。结果①在75 mmol/L硼酸盐(pH 10.5)含1%(v/v)乙胺电泳缓冲液中,进样电压500 V,15 s时电泳蛋白可得到基线分离;②在36例尿蛋白阳性患者中,用该法检测发现溢出性蛋白尿2例、选择性蛋白尿16例、非选择性蛋白尿18例,20例健康对照未检出蛋白峰。结论该法快速、简便,检测成本极低,有利于临床的诊断和预后判断,有较好的应用前景。     

控制微流控芯片电泳中的蛋白质吸附

目的探讨抑制微流控芯片电泳中蛋白质的吸附,以提高芯片电泳蛋白质的分离效率及重现性。方法以蛋白质标准品、临床尿液标本为实验对象,通过提高缓冲液的pH值、在缓冲液中加入适当的添加剂等方法,进行芯片蛋白电泳,并与常规琼脂糖电泳结果进行比较。结果使用pH值10.5硼酸缓冲液,转铁蛋白连续进样出峰时间的变异系数(CV)为5.22%;在pH值10.5硼酸缓冲液中加入1%的乙胺,能提高芯片电泳检测尿液蛋白的分离度、重现性,电泳结果与REP全自动电泳仪结果一致。结论使用该方法可有效地抑制芯片泳道壁对蛋白质的吸附,分离效率大为提高。     

基于凝集素芯片的蛋白质糖基化修饰检测方法

目的:建立针对组织和血清样本中蛋白质糖基化的凝集素芯片检测方法 ,并结合凝集素印迹法验证,以实现样品间糖基化修饰差异的高通量筛选。方法:采用包含91种凝集素的凝集素芯片,利用生物素标记的组织总蛋白质样品,比较实验的重复性及不同上样量的芯片实验效果。利用生物素标记的去高丰度蛋白质血清和全血清样品,比较两者芯片实验的检出情况及全血清样品不同上样量的芯片实验效果。以最优条件筛选癌组织与癌旁组织样品之间及不同疾病患者血清样品之间的糖基化修饰差异,采用凝集素印迹法验证凝集素芯片实验结果。结果:芯片重复性良好(r>0.94),组织样品在0.625~1.250μg/m L时实验效果较佳;去高丰度蛋白质血清和全血清样品以高浓度上样时(≥20μg/m L),两者检出相近。标记后的全血清样品取2μL稀释至150μL时,实验效果最佳。筛选出检测信号有差异的凝集素经凝集素印迹法验证,结果与芯片检测一致。结论:该凝集素芯片实验体系稳定、可靠,可用于筛选临床样本间的糖基化修饰差异,有助于发现疾病相关的糖蛋白生物标志物。     

大鼠机械性脑损伤蛋白质表达谱的变化及意义

目的研究大鼠脑损伤后血清和脑干中蛋白质表达的特点。方法采用弱阳离子交换芯片（WCX-2）和金属亲和吸附芯片（IMAC-Cu）结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠闭合性脑损伤后4h、8h、12h、24h、48h血清和脑干中蛋白质表达谱的改变。结果（1）在WCX-2芯片上,血清中共捕获436个蛋白质峰;脑干中共捕获495个蛋白质峰;血清和脑干都能捕获的蛋白质数是33个。在IMAC—Cu芯片上,血清中共捕获229个蛋白质峰;脑干中共捕获107个蛋白质峰;血清和脑干在IMAC—Cu芯片上都能捕获的蛋白质数是3个。（2）与手术对照组相比,血清在WCX-2芯片上损伤组共有53个蛋白质峰的相对强度有显著性差异（P〈0．05）;在IMAC-Cu芯片上损伤组共有16个蛋白质峰的相对强度有显著性差异（P〈0．05）。脑干在WCX-2芯片上损伤组共有25个蛋白质峰的相对强度有显著性差异（P〈0．05）;在IMAC．Cu芯片上损伤组共有2个蛋白质峰的相对强度有显著性差异（P〈0．05）。结论（1）脑损伤可引起血清和脑干蛋白质表达谱变化,提示血清中出现的部分蛋白质可能为脑损伤诱导的血细胞基因表达产物。（2）血清和脑干蛋白质表达谱存在差异。（3）在血清和脑干中检测到的差异蛋白质以及损伤后新出现的蛋白质峰,可能是脑损伤生物标志蛋白,对其进行进一步研究,有望深人了解脑损伤的分子机制,并用于脑损伤的诊断和治疗。     

控制微流控芯片电泳中的蛋白质吸附

目的 探讨抑制微流控芯片电泳中蛋白质的吸附，以提高芯片电泳蛋白质的分离效率及重现性。方法 以蛋白质标准品、临床尿液标本为实验对象，通过提高缓冲液的pH值、在缓冲液中加入适当的添加剂等方法，进行芯片蛋白电泳，并与常规琼脂糖电泳结果进行比较。结果 使用pH值10．5硼酸缓冲液，转铁蛋白连续进样出峰时间的变异系数（CV）为5．22％；在pH值10．5硼酸缓冲液中加入1％的乙胺，能提高芯片电泳检测尿液蛋白的分离度、重现性，电泳结果与REP全自动电泳仪结果一致。结论 使用该方法可有效地抑制芯片泳道壁对蛋白质的吸附，分离效率大为提高。     

蛋白质组学新技术在白血病中的应用

蛋白质组学(proteomes)是当今生物领域中极其活跃的学科,主要以生物质谱技术为支撑平台,并结合生物信息学对蛋白质进行研究。此外,发展高通量和高精度的蛋白质相互作用检测技术已受到密切关注,如蛋白质芯片、抗体芯片、荧光能量传递技术等。在白血病的发病机制、早期诊断、指导治疗、寻找药物靶分子及预后判断等方面,蛋白质组学技术发挥了积极作用。     

蛋白质组学新技术在白血病中的应用

蛋白质组学(proteomes)是当今生物领域中极其活跃的学科，主要以生物质谱技术为支撑平台，并结合生物信息学对蛋白质进行研究。此外，发展高通量和高精度的蛋白质相互作用检测技术已受到密切关注，如蛋白质芯片、抗体芯片、荧光能量传递技术等。在白血病的发病机制、早期诊断、指导治疗、寻找药物靶分子及预后判断等方面，蛋白质组学技术发挥了积极作用。