光动力疗法对输入的NK细胞在荷Heps肝癌鼠瘤内分布的影响

目的探讨NK细胞输入后在荷Heps肝癌小鼠体内的分布规律,光动力疗法（PDT）对输入的NK细胞在肿瘤组织内分布的影响。方法 96只KM小鼠建立Heps肝癌移植瘤模型后随机分为对照组、细胞组（NK组）和光免疫组（PIT组）,每组32只。对照组小鼠尾静脉输入生理盐水,NK组小鼠尾静脉输入4,＇6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记的NK细胞,PIT组小鼠PDT处理后即刻输入DAPI标记的NK细胞。治疗后1、2、4、6和8 d摘取小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织,在荧光显微镜下观察NK细胞在上述脏器的动态分布情况;治疗后2 d观察瘤组织的病理学变化;治疗后1、2、4、6和8 d摘除小鼠眼球取血以流式细胞仪检测外周血NK细胞百分率;治疗后6 d LDH释放法检测小鼠脾细胞杀伤活性。结果 （1）各治疗组,输入后1、2、4、6和8 d,NK细胞在小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织中均有分布,其中以肿瘤组织内最多;NK细胞在瘤内浸润密度：以输入后2 d最高,而各时间点PIT组又显著高于NK组（P〈0.05）;（2）外周血中NK细胞含量：在治疗后1、2、4和6 d,PIT组较对照组明显增高（P〈0.01）;治疗后1、2和4 d,NK组较PIT组和对照组增高（与PIT组相比,P〈0.05;与对照组相比,P〈0.01）;（3）效靶比为10∶1、20∶1和50∶1时,NK组和PIT组脾细胞杀伤活性均显著高于对照组,其中PIT组又显著高于NK组（P〈0.01）。结论 NK细胞输入荷瘤小鼠体内后能选择性聚集于肿瘤组织内;PDT可增加输入的NK细胞在瘤内的浸润密度,增强小鼠脾细胞对Heps肝癌的杀伤活性。     

光动力联合DC对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究

目的：探讨光动力（photodynamic therapy,PDT）联合瘤体内输注树突状细胞（dendritic cell,DC）的光免疫疗法（photodynamic immuno-therapy,PIT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应的研究。     

CpG ODN联合光动力疗法对肝癌移植瘤生长及局部CD8+细胞毒性T细胞的影响

目的 探讨以CpG寡脱氧核苷酸(ODN)为免疫佐剂联合光动力疗法(PDT)的光免疫疗法(PIT)对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.方法 92只ICR小鼠皮下接种肝癌Heps细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、PDT组、CpG ODN组和PIT组,治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率.免疫组化法计数肿瘤局部CD8+细胞毒性T细胞(CD8+CTLs).结果 (1)与埘照组相比,PDT组、CpG ODN组和PlT组治疗后16d肿瘤体积均明显缩小(P<0.01),抑瘤率分别为73.88%、20.09%、84.47%.PIT组肿痛体积较单纯PDT组明显缩小(P<0.05).(2)免疫组化染色结果显示,PDT组、CpG ODN组和PIT组治疗后2、24h肿瘤局部CD8+CTLs数量较对照组无明显变化(P>0.05),治疗后72h肿瘤局部CD8+CTLs数量,均明显高于对照组(P<0.05);PIT组肿瘤局部CD8+CTLs数量明显高于单纯PDT组(P<0.01).结论 CpG ODN能激活宿主免疫应答而有效增强PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.     

光动力疗法对荷瘤小鼠血清中TNF-α含量影响的实验研究

目的探讨光动力疗法（PDT）抑瘤效应的免疫机制,以及PDT联合肿瘤局部注射卡介苗（BCG）的治疗效果。方法建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型72只,随机分为对照组、PDT组、BCG组和联合组,每组18只。观测各组移植瘤体积的变化。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）,测定各组PDT治疗后2、24 h和7 d荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α的变化。结果 1.各治疗组治疗后7 d的移植瘤体积较对照组均明显缩小（P〈0.01）。治疗后7 d联合组的肿瘤体积较PDT组明显缩小（P〈0.05）。2.ELISA结果显示,治疗后2、24 h和7 dPDT组和联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量均明显高于对照组和BCG组（P〈0.01）,联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量明显高于PDT组（P〈0.05）。结论 PDT可增强荷瘤小鼠全身的免疫力,肝癌移植瘤体积明显缩小。PDT联合局部注射BCG的疗效优于单用PDT和单用BCG。     

不同光照剂量的光动力疗法对小鼠肝癌移植瘤增殖及局部免疫细胞的影响

目的探讨不同光照剂量的光动力疗法（PDT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤作用及局部免疫效应。方法 69只ICR小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、光照低剂量PDT组（能量密度135 J/cm2）和光照高剂量PDT组（能量密度215～225 J/cm2）。治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率。观察HE染色的瘤组织病理学改变,免疫组化法检测肿瘤组织的CD8＋细胞毒性T淋巴细胞（CD8＋CTLs）。结果 （1）光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组抑瘤率分别为73.9%、96.3%;光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低剂量PDT组（P〈0.01）。（2）PDT后2、24和72 h肿瘤组织先后出现肿瘤细胞空泡样变性、广泛核固缩及凝固性坏死;肿瘤中微血管淤血扩张、出血和管壁破坏,上述病理改变光照高剂量PDT组更为显著。（3）治疗后72 h光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量均明显高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）;而光照低剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量又显著高于光照高剂量PDT组（P〈0.05）。结论光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低能剂量PDT组;PDT可引起细胞毒性T淋巴细胞在肿瘤局部浸润增加,光照低剂量PDT组对肿瘤局部CD8＋CTLs的免疫增强效应优于光照高剂量PDT组。     

光动力疗法及其联合注射卡介苗对小鼠肝癌移植瘤的抑瘤作用与免疫反应

目的探讨光动力疗法(PDT)联合肿瘤局部注射卡介苗(BCG)的局部免疫反应及抑瘤效应。方法建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型96只,随机分为对照组、PDT组、BCG组和PDT+BCG联合组。观测各组移植瘤体积的变化。以F4/80抗体为标记,采用免疫组化法计数肿瘤局部巨噬细胞(MΦ)数量。结果 1.各治疗组治疗后7 d的移植瘤体积较对照组均明显缩小(P<0.01)。联合组治疗后7 d的肿瘤体积较单纯PDT组明显缩小(P<0.05)。2.免疫组化染色结果显示,PDT组和联合组治疗后2、24 h和7 d肿瘤局部MΦ数量均明显高于对照组和BCG组(P<0.01)。上述时间点联合组肿瘤局部MΦ数量明显高于PDT组(P<0.05)。结论 PDT使小鼠肝癌移植瘤体积缩小,增强荷瘤宿主治疗局部的免疫力。PDT联合局部注射BCG的治疗方法的疗效优于单纯PDT和单纯BCG。     

不同光照能量的光动力疗法对小鼠肝癌移植瘤增殖及局部CD8+细胞毒性T细胞的影响

##正##目的:探讨不同光照剂量的光动力疗法(PDT)对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤作用及局部免疫效应。方法:92只ICR小鼠皮下接种肝癌Heps细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、低能量光照PDT组(功率密度15mW/cm2,能量密度135J/cm2)和高能量光照PDT组(功率密度240～250mW/cm2,能量密度215～225J/cm2)     

藻蓝蛋白-光动力疗法治疗小鼠HeLa细胞瘤的免疫和凋亡机制研究

目的探讨藻蓝蛋白介导的光动力疗法治疗小鼠HeLa细胞瘤的免疫和凋亡机制。方法将HeLa细胞接种于小鼠肋缘皮下脾区构建荷瘤小鼠模型。实验分成3组：对照组、激光照射组、光动力治疗组（PDT组）。PDT组：肿瘤局部皮下注射藻蓝蛋白液0.25ml（约2g）2h后以He-Ne激光照射。实验第7d测瘤块重量,取胸腺、脾脏检测NK细胞活性和T细胞增殖活性。取瘤块制成石蜡包埋切片,采用原位核酸杂交技术、免疫组织化学技术检测肿瘤细胞内CD44、P53、NFκB、Fas基因的表达。结果与对照组相比,激光照射组NK细胞和免疫T细胞的增殖活性有所增强,肿瘤细胞内抗凋亡基因（Fas）表达量显著增多,而瘤块的重量、肿瘤形成率和抗凋亡基因（P53、NFκB、CD44）明显减少。以上各项指标PDT组与激光组比较,差异亦具有显著或非常显著意义（P〉0.05或P〈0.01）。结论藻蓝蛋白介导的光动力疗法通过增强机体的免疫力同时启动HeLa细胞内的凋亡信号转导通路诱导细胞凋亡,从而达到杀死肿瘤的目的。     

顺铂联合光动力疗法增加肝癌细胞敏感性的研究

正目的:探讨顺铂联合光动力疗法(PDT)对小鼠H22肝癌移植瘤抑制的增敏作用及其机制。方法:将皮下种植H22肝癌细胞的小鼠随机分为对照组、DDP组、PDT组、DDP+PDT组。观察治疗后各组荷瘤小鼠生活状态、移植瘤形态及体积变化;治疗第14d后各组处死4只小鼠,计算肿瘤抑制率及脾脏指数;行常规HE染色观察病理形态;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及周期     

新城疫病毒感染瘤细胞的抗瘤作用

目的 探讨了新城疫病毒感染小鼠肝癌细胞H_(22)后,制备的癌细胞瘤苗对小鼠的抗肿瘤保护作用,并检测细胞免疫原性的影响。方法 将经新城设病毒感染的小鼠肝癌细胞H_(22)为瘤苗进行免疫接种,同对照比较其对小鼠抗瘤保护作用和小鼠NK细胞活性与小鼠淋巴细胞敏感性。结果 新城疫病毒感染并杀伤的癌细胞制备的瘤苗可完全排斥再次接种未经病毒处理瘤细胞的攻击和生长,瘤苗能增强小鼠的免疫功能,免设组与对照组的NK细胞活性同淋巴细胞敏感性具有显著差异(P<0.01)。结论 新城疫病毒感染小鼠肝癌细胞后制备的癌细胞瘤苗能直接使小鼠排斥接种的癌细胞攻击,并能提高小鼠NK细胞活性和小鼠淋巴细胞敏感性。     

激光免疫疗法对小鼠H22肝癌的长期抗瘤效应

目的观察激光免疫疗法对小鼠H22肝癌的抗瘤效应。方法昆明种小鼠240只,随机分为4组,每组60只。光动力学组：小鼠腹腔内注射HpD10 mg／kg后48 h行激光照射（功率320 W,时间400 s,能量130 J）;激光免疫组：处理同前组,另于照光前12 h小鼠瘤内及瘤周注射糖基化氨基葡糖（GC） 0．2 ml／只;单纯GC组：仅于瘤内及瘤周注射GC;对照组：不做任何处理。比较前3个实验组的抑瘤率、生存率。结果3实验组小鼠均有显著抑瘤效果,激光免疫组的抑瘤率、生存率较单纯免疫佐剂治疗组和光动力学治疗组有显著提高,激光免疫组23．3％肿瘤治愈小鼠长期存活。结论激光免疫疗法对小鼠H22肝癌显示出长期抗瘤效应,该疗法可能成为一种长期有效的综合治疗肿瘤新方法。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对多器官功能障碍综合征模型小鼠肺树突细胞损伤的保护作用

目的 探讨抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对酵母多糖诱导的多器官功能障碍综合征(MODS)模型肺树突细胞(DCs)损伤的保护作用.方法 健康雄性BALB/c小鼠腹腔注射酵母多糖复制MODS模型,随机分为对照组、酵母多糖组、酵母多糖+NAC组(n=20).建模后48h处死动物,采用生化法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;光镜下观察肺组织病理学变化;采用密度梯度离心及CDllc+免疫磁珠分离肺DCs,流式细胞术检测DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad分子及共刺激分子CD86的表达;Annexin V/7-AAD双染色流式细胞术检测DCs凋亡情况.结果 与对照组比较,酵母多糖组肺组织MPO活性显著升高(P＜0.05),肺组织损伤明显,可见大量中性粒细胞浸润,肺DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad、CD86阳性表达及细胞凋亡比例均显著增高(P＜0.05).与酵母多糖组比较,酵母多糖+NAC组肺组织MPO活性明显下降(P＜0.05),肺损伤程度减轻,中性粒细胞浸润减少,肺DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad、CD86阳性表达及细胞凋亡比例显著下降(P＜0.05).结论 NAC可以减轻MODS模型小鼠的肺损伤,抑制肺DCs活化诱导的细胞凋亡,对肺DCs损伤具有保护作用.     

鼠移植胶质瘤手术加光敏治疗的实验研究

为探讨提高肿瘤手术疗效的方法，通过对昆明小鼠移植的传代Ｇ－４２２胶质瘤，进行手术切除加瘤床光动力学治疗的生存观察。实验研究证实：手术切除加瘤床光动力学治疗组的小鼠生存时间明显长于单纯手术切除组和带瘤自然生存组。说明Ｈｅ－Ｎｅ激光作实验光源的光动力学治疗能杀伤切除后残留术野的瘤细胞，导致术后复发率降低和生存期延长，为光动力学疗法用于脑胶质瘤手术的辅助治疗提供依据     

高压氧对荷瘤鼠淋巴细胞功能的影响

目的探讨高压氧（HBO）暴露对淋巴细胞功能的影响。方法将Balb／c小鼠随机分成正常对照组、HBO组、肿瘤组、肿瘤HBO组。用接种S-180腹水癌细胞的方法制成免疫功能低下动物模型。经HBO暴露，取血标本观察淋巴细胞一肿瘤细胞花环率、淋巴细胞数、淋巴细胞百分比；用ELISA双抗夹心法测定小鼠血清IgG浓度；用^3H—TdR掺入法测定脾淋巴细胞增殖；用同位素靶细胞释放法观察NK细胞杀伤活性和LAK细胞活性；取脾脏观察小鼠脾指数的变化。结果（1）淋巴细胞一肿瘤细胞花环率肿瘤HBO组明显高于对照组（P〈0．01）。（2）淋巴细胞计数各组之间均无明显变化。（3）淋巴细胞百分比对照组分别比肿瘤HBO组和肿瘤组高（P〈0．01，P〈0．05），HBO组比肿瘤HBO组高（P〈0．01）。（4）IgG测定各组间无统计学差异。（5）淋巴细胞增殖HBO组比对照组低（P〈0．01），肿瘤HBO组比HBO组低（P〈0．01），肿瘤组比HBO组低（P〈0．01）。（6）NK细胞活性肿瘤组比对照组低（P〈0．05），肿瘤HBO组比肿瘤组高（P〈0．05），HBO组比对照组有降低的趋势（P=0．07）。（7）LAK细胞活性肿瘤组比对照组高（P〈0．05）。（8）脾指数各组之问差异无统计学意义（P〉0．05）。结论压力为0．2MPa，氧体积分数为87％的HBO暴露和／或肿瘤接种对免疫系统的作用是多方面的，有的部分增强，有的部分减弱，值得进一步研究。