GW843682X对鼻咽癌细胞中PLK1和p53表达的影响

[目的]研究Polo样激酶（PLK）抑制剂GW843682X对鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53表达水平的影响。[方法]用不同浓度的GW843682X处理鼻咽癌5-8F细胞,在不同时间点倒置显微镜下观察细胞形态,RT-PCR及Western blot分别检测PLK1和p53的mRNA和蛋白表达水平的变化。[结果]GW843682X能够显著抑制5-8F细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。RT-PCR结果表明GW843682X可下调PLK1和p53的mRNA表达水平。Western blot结果显示GW843682X降低PLK1和p53的蛋白表达水平。[结论]GW843682X抑制鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53的表达。     

GW843682X增加肺癌A549细胞对紫杉醇化疗敏感性的体外研究

[目的]研究GW843682X对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响。[方法]培养肺癌A549细胞,均等浓度接种于6孔板,分四组：1空白对照组;2紫杉醇处理组：48μg/ml紫杉醇处理48h;3GW843682X处理组：0.5μmol/L GW843682X处理48h;4联合用药组：48μg/ml紫杉醇联合0.5μmol/L GW843682X处理48h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。RT-PCR检测plk1在mRNA水平的变化。Western blot检测plk1在蛋白质水平的变化。[结果]紫杉醇或GW843682X均能够抑制A549细胞的增殖,倒置显微镜下发现细胞形态变化明显,联合用药组变化更明显。流式细胞仪检测结果发现各组细胞凋亡率分别是2.5%,9.4%,5.8%和22.1%。RT-PCR结果显示紫杉醇或GW843682X均能下调plk1mRNA表达水平,联合用药组下调最明显。Western blot结果显示紫杉醇或GW843682X抑制了plk1蛋白表达水平,联合用药组下调最明显。[结论]GW843682X能够通过抑制plk1的表达增加肺癌A549细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

盐霉素增加鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的实验研究

目的:探讨盐霉素（Sal）对鼻咽癌CNE-2细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。方法:CCK8测定不同浓度盐霉素、不同剂量放疗及联合应用对CNE-2细胞增殖的抑制作用;平板克隆实验观察盐霉素联合放疗后细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化情况。结果:CCK8结果显示,盐霉素和放疗对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有显著的抑制作用,呈浓度和剂量依赖性,且联合组抑制作用强于单纯药物组或放疗组。平板克隆实验显示盐霉素联合放疗后能显著降低细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色显示盐霉素联合放疗治疗后细胞凋亡现象更明显;细胞流式术检测显示联合组较单纯药物组或放疗组凋亡率增加,盐霉素对放疗具有增敏作用。药物组和放疗组均能使G2/M期细胞比例增加,两者联合效果更明显。结论:盐霉素能增加人鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与周期阻滞及其凋亡诱导相关。     

紫杉醇对p53突变型肺癌细胞株H322的生长抑制作用

目的:通过体外实验评价紫杉醇对p53突变型肺癌细胞株H322的生长抑制作用. 方法: 紫杉醇不同作用浓度不同作用时间处理H322细胞后,应用MTT法检测紫杉醇对肺癌细胞生长抑制作用,通过流式细胞术分析细胞周期及凋亡的变化,荧光显微镜观察细胞核形态的变化. 结果: 紫杉醇对H322的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),(10-1000)nmol/L的浓度对H322生长抑制差异不显著(P>0.05).浓度≤100nmol/L时,G2-M期比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡比例在低浓度范围内(0.1-10)nmol/L呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低.时间依赖性实验中,10nmol/L作用时,凋亡发生呈时间效应;G2-M期所占比例在12h达最高.1000nmol/L作用时,G2-M期阻滞程度和持续时间均高于10nmol/L,但不如低浓度诱导凋亡出现得早.典型凋亡细胞出现浓缩、成片的染色质.紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05).结论: 体外实验中,紫杉醇对H322细胞有明显生长抑制作用,并且这种作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞影响较小,却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的.     

PS-341对人类宫颈癌SiHa细胞凋亡作用的研究

目的研究PS-341对宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响。方法对宫颈癌SiHa细胞进行常规体外培养,将处于对数生长期的细胞,按照24、48、72 h随机分为3个作用时间相,用不同浓度PS-341作用。荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）测定细胞凋亡率;FCM法测定细胞周期变化。结果荧光显微镜下观察Hoechst染色的细胞核形态,可见对照组细胞核稀疏淡染,随着PS-341的作用时间延长及作用浓度的增高,各组细胞胞核形态发生变化,染色质固缩,细胞核致密深染,且数量逐渐增加,60 nmol/L PS-341作用72 h时,细胞核呈碎块状致密浓染。FCM法检测细胞凋亡率结果显示：随着PS-341作用时间延长及作用浓度的增高,细胞凋亡率显著增高（P〈0.01）。FCM分析结果显示：各组细胞与对照组比较,G0/G1期细胞比例明显增高（P〈0.01）,S期细胞比例明显下降（P〈0.01）。细胞生长阻滞于G0/G1期,各组间差异显著（P〈0.01）。结论 20 nmol/L PS-341可诱导人类宫颈癌SiHa细胞凋亡,并随着作用时间的延长和浓度增加,治疗效果逐渐加强,其中60 nmol/L PS-341作用72 h效果最强。     

ZD6474对鼻咽癌细胞株CNE2抑制作用及其机制的探讨

目的:研究ZD6474对鼻咽癌细胞株CNE2的抑制作用.方法: 采用MTT 法测定ZD6474的抑制浓度(IC50) ,流式细胞仪检测ZD6474的凋亡率及细胞周期分布.结果: MTT数据显示,CNE2细胞的抑制率与ZD6474浓度成正相关,随ZD6474浓度升高,抑制作用越明显,IC50=2.531 μmol/L;流式细胞术分析显示,ZD6474处理48 h使CNE2细胞凋亡率明显升高[(24.02±5.90)%],且随浓度升高凋亡率升高越明显,P<0.001.细胞周期结果显示,ZD6474使细胞周期S期[(34.96±5.37)%]比例下降,G0/G1期[(56.25±1.45)%]和G2/M期[(17.36±5.73)%]比例升高.结论: ZD6474能明显抑制CNE2细胞的增殖,促进其凋亡并改变其细胞周期的分布.     

蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡与胞浆内[Ca2+]变化的关系

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(Bortezomib)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对其胞浆内[Ca2 ]([Ca2 ]i)的影响。方法以浓度梯度的PS-341干预U266细胞4h后收集,荧光显微镜观察细胞凋亡,AnnexinV-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光素标记FCM检测[Ca2 ]i。结果(1)PS-341作用U266细胞4h后荧光显微镜观察到凋亡细胞数随浓度增加而增多;(2)FCM检测凋亡细胞的比例分别为0.56%、7.71%、19.84%、31.10%、40.72%,与PS-341浓度成正比;(3)PS-341作用后U266细胞[Ca2 ]i均值分别为403.65nmol/L、418.20nmol/L、378.65nmol/L、356.36nmol/L、349.21nmol/L;(4)PS-341诱导U266细胞凋亡时伴随[Ca2 ]i的改变,浓度>50nmol/L时诱导的细胞凋亡伴随[Ca2 ]i下降。结论蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡呈浓度依赖性;PS-341浓度>50nmol/L时下调[Ca2 ]i,并由此发挥抗骨髓瘤细胞作用。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制.[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌FJ细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml),与对照组相比各组FJ细胞增长速度减慢.与对照组相比,不同浓度的各组5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml)可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数(P＜0.05),且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P＜0.05);不同浓度的5-Aza-CdR作用FJ细胞后G0/G1期细胞明显增加(P＜0.05).[结论]5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌FJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制膀胱癌FJ细胞的增殖.     

单抗C225致人肺鳞癌H-520细胞生长抑制和凋亡增加的研究

目的：观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225对人肺鳞癌细胞系（H-520）生长、凋亡和周期分布的影响。方法：流式细胞检测H-520细胞EGFR表达比例,将鼠抗人EGFR一抗和FITC标记的羊抗鼠二抗加入细胞悬液中,孵育、漂洗重悬细胞后流式检测。MTT法测定C225抑制H-520细胞生长最佳浓度和最佳时间,将不同浓度C225加入指数生长的细胞培养液中,继续培养一定时间（48h）,检测细胞生长抑制率。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期。结果：H-520细胞中EGFR表达比例高达82.25%。C225抑制H-520细胞生长的最佳浓度是40nmol/L,最佳作用时间是72h。细胞凋亡实验结果显示,H-520细胞自然凋亡率为5.56%±0.62%,C225可使其凋亡百分率上升到13.75%±0.83%（P〈0.05）。细胞周期分布显示40nmol/L C225可使细胞阻滞于G0＋G1期,S期细胞比例下降。结论：C225对H-520细胞生长抑制作用,可能与细胞G0＋G1期阻滞后凋亡有关。     

塞来昔布对人肝癌细胞株增殖及凋亡的影响

[目的]探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对体外培养的肝癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用。[方法]培养肝癌细胞株hepG2,用不同浓度的塞来昔布进行干预,MTT法检测对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比,随着塞来昔布剂量和作用时间的增加,MTT显示细胞的吸光度值逐渐降低,塞来昔布作用24、36、48h,对hepG2细胞的中效抑制浓度(IC50)分别为94.2μmol/L、78.3μmol/L和55.7μmol/L,相关系数分别为0.97、0.94和0.99;随着塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,细胞的凋亡率升高;塞来昔布作用48h后,随着药物浓度的增加G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例下降。[结论]塞来昔布能抑制hepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27~（Kip1）表达的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）丁酸钠（NaB）及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达。结果：NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P〈0.05;20μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用（P〈0.05）,但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P〉0.05。Trastuzumab可协助NaB增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P〈0.05。结论：Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现。     

解毒消癥饮对BGC-823胃腺癌细胞线粒体膜电位与细胞凋亡的影响

[目的]探讨中药复方解毒消癥饮含药血清对胃腺癌细胞BGC-823增殖与凋亡的影响。[方法]低、中、高剂量（0.28g/ml,1.41g/ml,2.83g/ml）含药血清干预体外培养的胃腺癌细胞BGC-823,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡率、细胞周期及线粒体膜电位的变化。[结果]与对照组比较,随时间延长（24、48、72h）,含药血清组可以显著抑制胃腺癌细胞的生长,且呈剂量依赖性（r=0.951,P〈0.05）;含药血清与细胞共培养24h后,低、中、高剂量组的细胞凋亡率分别为2.392%±0.188%,3.960%±0.568%,6.350%±0.065%,较对照组1.357%±0.335%增加;细胞周期显示出典型的S期阻滞;含药血清低、中、高剂量组线粒体膜电位下降的细胞百分率为5.095%±0.971%、8.593%±0.944%、16.217%±2.358%,较对照组1.610%±1.067%明显降低。[结论]解毒消癥饮能抑制胃腺癌细胞生长并促其凋亡。     

川楝素对乳腺癌细胞的生长抑制作用

[目的]探讨川楝素对人乳腺癌MDA—MB-453细胞作用及其机制。[方法]取对数生长期的MDA—MB-453细胞,0、6．25、12．50、25．00、50．00、100．00nmol／L川楝素处理,绘制生长曲线。川楝素0、12．5、50nmol／L处理72h后,MTS法检测川楝素对乳腺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测川楝素对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]川楝素对乳腺癌细胞有增殖抑制作用．并呈时间剂量依赖性（P〈0．01）。MDA—MB453细胞48h、72h、96h的IC50分别为17．25、22．20和135．69nmol／L。流式细胞分析表明,川楝素诱导乳腺癌细胞的凋亡呈浓度依赖性（P〈0．01）,且阻滞细胞在S期（P〈0．01）,以0、12．50、50．00nmol／L川楝素处理乳腺癌细胞72h后,MDA—MB-453细胞早期凋亡率分别为3．21％、9．64％和20．19％,MDA—MB-453细胞处于细胞周期S期细胞占20．98％、35．92％和45．02％。[结论]川楝素对乳腺癌MDA—MB-453细胞增殖具有抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和引起S期阻滞有关。     

不同浓度洋地黄对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度洋地黄对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,不同浓度洋地黄处理,MTT法观察洋地黄对MDA-MB-231细胞活性、增殖的影响;Hoechst 33342染色观察洋地黄促细胞凋亡作用,细胞色素C含量及caspase 9活性变化检测线粒体损伤程度;生长曲线法观测洋地黄对细胞增殖的影响,Western blot检测细胞周期蛋白表达。结果:高浓度的洋地黄（≥100nmol/L）引起MDA-MB-231细胞凋亡,促进细胞色素C释放,增加caspase 9活性。低浓度洋地黄（30nmol/L）不引起肿瘤细胞凋亡,但是抑制细胞增殖,抑制细胞周期素D1和细胞增殖抗原PCNA的表达,增强p21cip1蛋白的表达。结论:高浓度洋地黄通过线粒体损伤通路促进乳腺癌细胞凋亡,低浓度洋地黄通过干扰细胞周期抑制乳腺癌细胞的生长。     

纳米金对SPC-A1肺癌细胞体外放射增敏作用的研究

目的 研究纳米金联合兆伏级射线对肺腺癌SPC-A1细胞的体外放射增敏作用,并从细胞周期、细胞凋亡角度探讨纳米金的放射增敏机制。方法 选用肺腺癌SPC-A1细胞进行体外培养,采用CCK-8法检测不同浓度纳米金（0、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol／L）处理SPC-A1细胞24、48、72 h后的细胞毒性,确定纳米金溶液的实验浓度;经纳米金溶液培养的SPC-A1细胞株分别给予6 MV X线和4 MeV电子线照射0、1、2、4、6、8 Gy后,体外细胞培养克隆法研究纳米金的放射增敏作用,计算存活分数。使用单击多靶模型公式拟合,计算出Dq、D0等放射生物学参数和放射增敏比（SER）;流式细胞仪检测纳米金处理SPC-A1细胞24 h后各组的细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 不同浓度纳米金处理不同时间后,对SPC-A1细胞的增殖无明显抑制,确定以纳米金溶液初始浓度（0.25 mmol／L）作为实验浓度。直径25 nm、0.25 mmol／L的纳米金粒子联合6 MV X线和4 MeV 电子线照射SPC-A1细胞的SER分别是1.111和1.214。流式细胞仪检测显示,纳米金不增加细胞的凋亡,但能明显增加射线对细胞的凋亡作用。细胞周期显示纳米金能加速细胞的G0／G1期,使细胞周期阻滞在G2／M期。结论 纳米金联合6 MV X线或4 MeV 电子线对SPC-A1细胞有放射增敏作用,其机制可能与增加射线对细胞的凋亡和细胞周期同步化有关。     

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的：观察曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT—PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达。结果：TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高（F〈0．05）。RT—PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达水平上调。结论：不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。     

RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖的影响研究

[目的]研究RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖和细胞周期的影响。[方法]采用PCR法扩增人RIN1基因,并构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-RIN1。采用脂质体转染法将pcDNA3.1（＋）-RIN1及空载体pcDNA3.1（＋）转染至人胃癌MKN28细胞,G418法筛选阳性克隆;Western blot法和免疫荧光法鉴定RIN1的高表达。CCK-8法和平板克隆实验检测RIN1高表达对MKN28细胞增殖的影响。流式细胞术检测RIN1高表达对MKN28细胞周期的影响。[结果]成功构建RIN1真核表达载体,RIN1基因全长为2 353bp。G418法筛选获得高表达RIN1的MKN28克隆细胞株MKN28/RIN1-1和MKN28/RIN1-2,Western blot结果显示这两株细胞分别为MKN28/3.1的3.21倍和3.17倍。过表达RIN1基因后,MKN28细胞增殖显著性加快,克隆数显著性增加;细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加。[结论]RIN1基因过表达加速MKN28细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖;RIN1可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。