实验性铅中毒对睾丸神经生长因子基因表达的影响

目的 探讨实验性铅中毒对睾丸组织神经生长因子（ＮＧＦ）基因表达的影响。方法 小鼠以０．５％醋酸铅自由饮服８周,测定血铅和睾丸铅含量。采用原位杂交法（以地高辛标记ＮＦＧ ＤＮＡ为探针）和ＲＴ－ＰＣＲ方法,观察睾丸组织ＮＧＦ ｍＲＮＡ含量的变化。结果 铅染毒小鼠血铅和睾丸组织铅含量明显升高;原位杂交结果显示,铅染毒小鼠睾丸杂交信号明显减少,ＲＴ－ＰＣＲ结果表明,铅染毒小鼠睾丸组织ＮＧＦ ｍＲＮＡ表达量     

高亲和性神经生长因子受体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤 …

观察人神经母细胞瘤细胞系ＩＭＲ－３２细胞在恢复高亲和性神经生长因子受体基因ｔｒｋＡ表达后对神经生长因子（ＮＧＦ）诱导分化的反应。方法应用基因重组技术构建含外源ｔｒｋＡ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体,经ＰＡ３１７细胞包装后感染靶细胞系ＩＭＲ－３２细胞,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交,逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）证实转化细胞系中含有外源基因的整合及稳定表达后,进行神经生长因子诱导分化实验。结果转     

成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因在正常小鼠心脏组织中的变化

自人肺成纤维细胞以逆转录－ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）钓取了人成纤维细胞生长因子受体１（ＦＧＦＲ１）细胞外段（含第２和第３免疫球蛋白结构域）ｃＤＮＡ。将此片段标记成非同位素探针，用其与ＳａｌⅠ消化的小鼠心脏等组织的基因组ＤＮＡ进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。结果表明：与其它组织相比，成年小鼠心脏组织显示ＦＧＦＲ１基因Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹的带型发生了变化。经过分析，提出了产生这种变化的３种模式。     

成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）基因在正常小鼠心脏组织中变化

自人肺成纤维细胞以逆转录－ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）钓取了人成纤维细胞生称因子受体１（ＦＧＦＲ１）细胞外段（含第２和第３免疫球蛋白结构域）ｃＤＮＡ。将此片段标记非同位素探针，用其与Ｓａｌ１消化的小鼠心脏等组织的基因组ＤＮＡ进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术，结果表明：与其它组织相比，成年小鼠心脏组织显示ＦＧＦＲ１基因Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹的带型发生了变化，经过分析，提出了产生这种变化的３种模式     

反义GFAP逆转录病毒表达载体的构建及其对反应性星形胶质 …

目的 构建反义ＧＦＡＰ逆转录病毒表达载体,评价其对２正常及损僵星形胶质细胞（Ａｓｔ）形态及ＧＦＡＰ基因表达的影响。方法 用定向克隆,将１．１ｋｂ的ＧＦＡＰ基因片段反向插入逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ上,获得重组体ＰＬＢｓｋＧ,经病毒包装,抗性克隆筛选、滴度测定等,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩展培养,收获病毒上清液感染体外培养的Ａｓｔ,通过免疫组织化学、原位杂交、ＲＴ－ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ     

H—2K^b基因导入小鼠造血细胞的研究

本研究应用分子克隆技术，用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）将ＭＨＣ－Ｉ类基因（即小鼠Ｈ－２Ｋ＾ｂ基因）导入包装细胞ＰＡ３１７。用培养的病毒上清进一步感染ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的造血细胞，且形成了抗Ｇ４１８的ＣＦＵ－ＧＭ。通过多聚酶链式反应（ＰＣＲ）和反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），表明病毒上清感染后小鼠造血细胞及其形成的ＣＦＵ－ＧＭ中均整合了ＭＨＣ－Ｉ类基因，且已转录为ｍＲＮＡ，流式细胞仪（ＦＡＣＳ     

小鼠淋巴细胞趋化因子重组腺病毒载体的构建及其在骨髓树突状细胞中的表达

经ＲＴ－ＰＣＲ克隆小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ，Ｌｔｎ）的全长编码ｃＤＮＡ，将其置于ＣＭＶ启动子下游，插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ。Ｌｔｎ重组腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ．ＣＩｍＬｔｎ与经ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ－末端肽复合物共转染２９３细胞，制备Ｌｔｎ重组腺病毒，扩增到的病毒滴度为３．６×１０９ｐｆｕ／ｍｌ。用重组ＧＭ－ＣＳＦ从小鼠骨髓中扩增到的树突状细胞本身并不表达Ｌｔｎ；体外感染Ｌｔｎ重组腺病毒后４ｈ即可经ＲＴ－ＰＣＲ检测到Ｌｔｎ的表达，其２４ｈ的细胞培养上清体外对ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ８＋细胞具有显著的趋化活性，表明所制备的Ｌｔｎ重组腺病毒能有效介导Ｌｔｎ在树突状细胞中的表达，为研究Ｌｔｎ基因修饰的树突状细胞诱导Ｔ细胞免疫应答奠定基础。     

抗菌肽MagaininⅡ单链抗体基因的构建及其表达

目的 将克隆的抗体轻重链可变区基因拼接成单链抗体基因并将其在大肠杆菌中表达。方法 通过ＲＴ－ＰＣＲ从两株抗ＭａｇａｉｎｉｎⅡ杂交瘤细胞株（２Ｄ１,３Ｆ８）中克隆出ＶＨ和ＶＬ基因,然后利用重组ＰＣＲ技术,将ＶＨ和ＶＬ基因通过柔性肽段（ＧＬＹ４Ｓｅｒ）３的Ｌｉｎｋｅｒ拼接成单链抗体基因（ＳｃＦｖ）,将ＳｃＦｖ克隆到表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ上并将其分别在大肠杆菌Ｅ．ｃｏｋｉ ＨＢ２１５１及ＴＧ１中进行     

018 γ干扰素及淋巴细胞可阻碍肿瘤的早期发育及其免疫原性的形成

由于裸鼠与同品系野生型小鼠的肿瘤早期发育并无差别 ,所以降低了人们对淋巴细胞具有免疫监视功能的认识 ,但后来的研究发现 ,裸鼠体内的功能性Ｔ细胞并未完全缺如 ,γ干扰素 (ＩＦＮ γ)与穿孔素可作为肿瘤抑制因子发挥作用。因此有必要重新认识一下ＩＦＮ γ与淋巴细胞在肿瘤发生发展过程中的作用。方法 :实验动物包括 12 9/ＳｖＥｖ品系野生型小鼠、同品系重组活化基因 2 (ＲＡＧ2 )定向损伤的免疫缺陷小鼠(ＲＡＧ2 / )、缺乏ＩＦＮ γ受体 (ＩＦＮＧＲ1)和缺失转录因子ＳＴＡＴ1的ＩＦＮ γ非敏感性小鼠、ＲＡＧ2 / ×ＳＴＡＴ1 / …     

血吸虫虫卵抗原诱导的日本血吸虫感染小鼠IFN－γ及IL－4基因转录的研究

本研究调查了日本血吸虫感染的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞的ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录。于感染后０，３，５，８，１０和１２周摘取小鼠脾脏，将脾细胞置于含ＳＥＡ或ＣｏｎＡ的培养基中培养，然后提取脾细胞总ＲＮＡ，通过逆转录后ｃＤＮＡ的扩增，分析ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的ｍＲＮＡ水平。ＲＮＡ模板同时进行β－ａｃｔｉｎ的逆转录和扩增，扩增产物被用作ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４扩增的标准对照。在ＳＥＡ或ＣｏｎＡ诱导的未感染或感染３周小鼠脾细胞未检测到ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ逆转录ＰＣＲ产物，感染５周和８周的小鼠脾细胞则可以观察到ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ的表达。与感染５周时相比，ＳＥＡ刺激的感染８周小鼠脾细胞的ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录显著增强。然而，在感染１０周和１２周小鼠，无论ＣｏｎＡ或ＳＥＡ都不能诱导ＩＦＮ－γ或ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录，显示这两种淋巴因子表达受到抑制。结果表明，ＳＥＡ诱导的日本血吸虫感染小鼠脾细胞ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４基因转录存在着调节，这种调节可能与感染从急性期到慢性期的对血吸虫虫卵抗原的全身性免疫反应包括对肉芽肿形成的调控有关。     

pEGFP-mINF-γ转染人卵巢癌细胞SKOV3及其对细胞生长的抑制作用

目的构建绿色荧光蛋白联合γ干扰素（pEGFP-mINF-γ）真核表达质粒,探讨γ-干扰素对卵巢癌细胞系skov3细胞生长的影响。方法将重组质粒转染入卵巢癌细胞株skov3中,获得稳定表达INF-γ细胞株,设空质粒转染组（skov3-pEGFP组）和空白对照组（skov3组）;逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）法检测目的基因的表达,双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）方法测定INF-γ的分泌量;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和荧光显微镜下细胞染色法检测INF-γ对skov3细胞体外生长和凋亡等生物学行为的影响。结果RT-PCR和ELISA法证实重组质粒已整合到skov3细胞并获稳定表达;MTT法检测细胞的增值速度及细胞抑制率,pEGFP-mINF-γ组第5天的细胞抑制率为21.67%,明显高于skov3-pEGFP和skov3组,P〈0.005;Hoechst染色检测结果显示skov3-mINF-γ组细胞凋亡,荧光显微镜下skov3-mINF-γ组凋亡细胞明显多于skov3-pEGFP组和skov3-nul组,差异有统计学意义（P〈0.05）,skov3-pEGFP组和skov3组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论成功构建真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,该质粒转染人卵巢癌细胞sk-ov3可抑制其生长,并不影响INF-γ的分泌量,异种INF-γ基因可能对人上皮性卵巢癌起重要作用。     

F9细胞的培养和全细胞抽提物获取方法的比较

目的对F9小鼠畸胎瘤细胞进行培养,探索理想的获取全细胞抽提物的方法。方法应用蛋白质抽提试剂盒、反复冻融循环和超声波裂解法进行F9全细胞抽提物的获取。结果通过蛋白质抽提试剂盒和反复细胞冻融循环的方法所获取的细胞抽提物渗透压和浓度偏低,而选用超声波裂解法所获取的细胞抽提物,无论从pH,渗透压,还是蛋白浓度方面分析均与理想值接近。结论选择超声波裂解法作为获取F9小鼠畸胎瘤全细胞抽提物的理想方法 。     

Magnetic resonance imaging for detection and analysis of mouse phenotypes

With the enormous and growing number of experimental and genetic mouse models of human disease, there is a need for efficient means of characterizing abnormalities in mouse anatomy and physiology. Adaptation of magnetic resonance imaging (MRI) to the scale of the mouse promises to address this challenge and make major contributions to biomedical research by non-invasive assessment in the mouse. MRI is already emerging as an enabling technology providing informative and meaningful measures in a range of mouse models. In this review, recent progress in both in vivo and post mortem imaging is reported. Challenges unique to mouse MRI are also identified. In particular, the needs for high-throughput imaging and comparative anatomical analyses in large biological studies are described and current efforts at handling these issues are presented.     

裸鼠尾的一般形态结构及淋巴管

裸鼠尾的一般形态结构和淋巴管的资料对多种裸鼠尾动物模型的建立具有重要意义。本文应用光镜、透射电镜及透明标本对10只雄性裸鼠尾进行了有关研究,获得了裸鼠尾的一般形态结构和淋巴管的有关资料。裸鼠尾的中央是一条29节尾椎组成的骨链。尾椎链的外面覆以三层结构,即皮肤、皮下组织和肌层。裸鼠尾的淋巴管网有浅、深两层。深淋巴管位于皮下组织内。浅淋巴管位于真皮内,呈网格状。浅淋巴管网的构型与皮肤纹理的构型具有相似性。     

灵芝活性多糖GLIS对正常和荷瘤小鼠骨髓巨噬细胞的激活作用

为研究灵芝活性多糖GLIS对正常和荷瘤小鼠巨噬细胞的激活作用,用灵芝活性多糖GLIS刺激体外培养的正常和荷瘤小鼠的巨噬细胞,检测GLIS刺激后巨噬细胞分泌至培养基中的TNF-α、IL-1β和NO的含量,以及小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬率的变化,并检测GLIS刺激的巨噬细胞对肿瘤细胞的抑制作用,同时研究灵芝活性多糖GLIS组成的糖和蛋白部分对活性的影响。结果显示经灵芝活性多糖GLIS刺激后,能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β,并产生大量的NO。小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬功能也明显的增强,且荷瘤小鼠的巨噬细胞对GLIS的敏感度要优于正常小鼠,GLIS中的糖部分对它的活性作用起主要作用。该研究表明,灵芝活性多糖GLIS对正常和荷瘤小鼠巨噬细胞均具有明显的激活作用。     

丙酸睾丸酮和己烯雌酚对小鼠睾丸减数分裂粗线期的影响

本研究采用本室改良的Evens哺乳动物睾丸生殖细胞减数分裂空气干燥法制片技术,观察了丙酸睾丸酮(TES)和已烯雌酚(STI)处理的小鼠第一次减数分裂前期粗线期分裂相的动力学变化。结果表明,(1)TES对减数分裂粗线期生殖细胞具有促进细胞分化和成熟的作用,STI则起抑制作用;(2)TES和STI在小鼠体内最大有效效应分裂持续约计70和50个小时。     

Generation of genetically altered mouse models for aging studies.

A number of mouse models have been identified and are being used for aging and age-associated disease research. However, the use of the genetically manipulated mouse model is still a relatively untapped resource for the study of the biology of aging. Genetically altered mice can be powerful tools for biology of aging research because gene expression can be controlled and correlated with established biomarkers. Standard transgene overexpression and gene targeting techniques were modified and used to generate 30 mouse lines during a 4-year period. These lines include models of Werner's syndrome (premature aging or progeria), Alzheimer's disease, other neurodegenerative condition, atherosclerosis, diabetes, immune dysfunction, musculoskeletal disorders, and oxidative stress. These new mouse models are providing additional insights into aging processes and will be useful for developing intervention strategies and collaborative interactions.     

不同浓度异氟醚对小鼠肺表面活性蛋白A表达的影响

目的 探讨异氟醚对小鼠肺表面活性蛋白A表达的影响。方法 将雄性昆明小鼠随机分为5组,吸入空气组、吸入1.0MAC异氟醚5min组、吸入3.0MAC异氟醚5min组、吸入1.0MAC异氟醚2h组、吸入3.0MAC异氟醚2h组;RT-PCR方法检测小鼠肺内SP-A mRNA的表达;免疫组化方法检测小鼠肺内SP-A蛋白的表达。结果 吸入异氟醚5min对小鼠肺内SP-A表达无影响,吸入异氟醚2h能降低小鼠肺内SP-A表达,而且随吸入浓度升高,SP-A表达呈负相关。结论 吸入高浓度异氟醚长时间能够降低小鼠肺内SP-A的表达。     

慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立

目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系，以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒（携带EGFP基因）包装（脂质体介导的瞬时转染）、超速离心浓缩和保存等，随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞，24—48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产；将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FF细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内，感染6—12h后，用相应培养基替换感染液，数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒（病毒上清或浓缩后的病毒）成功高效率感染293FF细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞；用浓缩后的病毒（携带EGFP基因）感染小鼠ES细胞，亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术，同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统，这些为相关后续研究打下了良好的基础。     

不同选择剪接形式的小鼠Era在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础。方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Westernblot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性。结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Westernblot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测。结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础。