去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑的保护作用

目的： 研究去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型新生血管形成的影响。方法：新生7 d SD大鼠建立HIE模型，模型组和治疗组建模前24 h分别用去铁胺或生理盐水注射。第1 d、3 d、7 d和14 d处死大鼠，检测缺氧缺血（左）侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管数、脑含水量、脑萎缩程度及其血管内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达。结果：治疗组左脑含水量和左脑萎缩比显著低于模型组(P<0.01)；左侧脑组织增生毛细血管数目显著高于模型组［(2.01±0.31)条/HPF vs (0.90±0.25)条/HPF ,P<0.01］。去铁胺显著上调左侧脑组织VEGF 和HIF-1α mRNA表达［12 h时VEGF：(1.41±0.07) vs (1.10±0.15)，P<0.05；HIF-1α：(1.49±0.12) vs (1.11±0.16)，P<0.05］。结论:去铁胺可能通过上调脑组织HIF-1α和VEGF表达，促进缺氧缺血脑组织新生血管形成，减轻缺氧缺血性脑损伤。     

急性心肌梗死模型大鼠经血管内皮生长因子121基因治疗后的血管新生☆

背景：血管内皮生长因子121可能是基因治疗急性心肌梗死的合适目的基因之一。 目的：观察直接心肌注射重组腺病毒人血管内皮生长因子121基因(Ad-hVEGF121)对心肌梗死大鼠心脏结构、功能及新生血管影响。 方法：将78只SD大鼠随机分为假手术组(n=18)、心肌梗死组(n=24)、Ad-hVEGF121组(n=19)和生理盐水组(n=17),后3组大鼠经结扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。Ad-hVEGF121组和生理盐水组结扎后10~15 min分别在心肌三点注射Ad-hVEGF12和生理盐水。假手术组只开胸,不结扎左冠状动脉前降支。 结果与结论：注射后2周治疗组行心脏超声检查,发现相比于假手术组,心肌梗死组、Ad-hVEGF121组和生理盐水组大鼠心肌新生毛细血管数量、体质量和左心室质量/体质量明显增加(P < 0.05或P < 0.01),且转染rAd-VEGF基因后心肌组织毛细血管密度显著高于生理盐水组和心肌梗死组。但4组大鼠的梗死面积、心脏结构和功能接近。提示直接心肌注射Ad-VEGF121能明显促进心肌内新血管形成。     

晚期缺血预适应促进低氧诱导因子的表达减轻肾脏缺血再灌注损伤

目的: 探讨晚期缺血预适应对肾脏缺血再灌注损伤的作用,以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)在其中的作用。方法: 将雄性C57/BL6N小鼠随机分为3组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)和缺血预适应组(IPC)。采用夹闭双侧肾蒂30 min后恢复灌注的方法建立肾缺血再灌注小鼠模型;缺血预适应组4 d前给予肾脏15 min预缺血。观察缺血预处理对再灌注后不同时点血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾组织形态学和细胞凋亡的影响。采用免疫组化及Western印迹法,分析HIF-1α在肾组织的表达;采用实时定量RT-PCR法,检测血管内皮生长因子(VEGF)和葡萄糖转运子-1(Glut-1)的mRNA表达。结果: 再灌注24 h后,IPC组小管间质损伤程度较IR组显著减轻,Scr、BUN水平以及小管上皮细胞凋亡明显下降。IPC组的HIF-1α核内表达显著高于IR组,且HIF-1下游靶基因VEGF和Glut-1的mRNA表达亦显著增加。结论: 晚期缺血预适应能够显著改善缺血再灌注后肾脏的形态和功能,这种保护作用可能与促进低氧诱导因子高表达有关。     

HIF-1α在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤血管生成中的作用及意义

目的: 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤血管生成中的作用及意义。方法: 采用免疫组化法检测50例人结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达情况,用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞,并计算肿瘤微血管密度(MVD),用SPSS 13.0软件分析HIF-1α与VEGF、VEGFR2及肿瘤MVD的相关性。结果: (1)50例中有39例(78%)肿瘤细胞HIF-1α阳性,27例(54%)VEGFR2阳性,与淋巴结反应性增生组织中淋巴细胞的表达情况比较均有显著差异(P<0.05);(2)HIF-1α蛋白阳性表达组VEGF和VEGFR2的阳性表达率分别为72%和64%,明显高于HIF-1α蛋白阴性表达组(P<0.05);(3)HIF-1α、VEGFR和VEGFR2蛋白表达与肿瘤MVD相关(P<0.01);(4)15例伴有血管中心性浸润的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤病例均表达HIF-1α。结论: HIF-1α可促进结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤肿瘤血管生成,其作用机制可能与VEGF/VEGFR2通路有关。     

骨髓单个核细胞移植后心肌梗死区的血管生成及细胞因子分泌

背景：干细胞移植为治疗心肌梗死带来新的希望,但研究结果不一致,存在争议。细胞移植能否长期持久地改善心脏功能、改善缺血心功能的机制这些问题均不明确。 目的：观察经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死犬心功能、血管生成和细胞因子分泌的影响。 方法：杂种犬分为骨髓单个核细胞组(n=10)和生理盐水组(n=6),前上嵴或髂后上棘穿刺分离得到骨髓单个核细胞,结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,于心肌梗死后2 h分别经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞和生理盐水,心肌梗死后2 h及6周时分别测定超声心动图指标,骨髓单个核细胞移植后6周vWF免疫组化染色检测心肌组织的毛细血管密度,RT-PCR检测血管内皮生长因子(血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164)、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶9 mRNA的表达。 结果与结论：经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植后6周,超声心动图显示,骨髓单个核细胞组射血分数和每搏输出量比生理盐水组显著升高;梗死边缘区新生血管数量明显高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达水平显著高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区基质金属蛋白酶9 mRNA 表达水平显著低于生理盐水组。结果说明自体骨髓单个核细胞经冠状动脉内注射移植,改善急性心肌梗死后心功能,促进梗死边缘区血管生成,提高促血管生长因子血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子的mRNA表达水平,减少基质金属蛋白酶9 mRNA表达水平。     

沉默HIF-1α基因表达对大鼠肝癌细胞增殖的影响

 目的： 探讨沉默缺氧诱导因子　1α（HIF-1α）基因表达对缺氧状态下肝癌细胞增殖的影响。方法：选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴（CoCl2）建立缺氧模型。制备3组特异性较强的HIF-1α siRNA-脂质体复合物,转染于肝癌细胞。利用real-time RT-PCR、Western blotting等方法分别检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、p21和cyclin D1在mRNA和（或）蛋白水平的表达。MTT及BrdU 掺入实验检测细胞增殖的变化。结果：缺氧条件下,肝癌细胞的HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达显著增多（P<0.05）。HIF-1α基因表达沉默后,HIF-1α、VEGF及cyclin D1 mRNA和（或）蛋白表达明显减少（P<0.05）,p21蛋白表达明显增加（P<0.05）。HIF-1α siRNA转染组的BrdU阳性细胞比例明显少于对照组(P<0.05)。结论：沉默HIF-1α基因表达对缺氧状态下肝癌细胞的增殖有显著抑制作用。     

重组胸腺素β4对大鼠心肌梗死心微血管及血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨重组胸腺素β4(Tβ4)对心肌梗死大鼠心微血管形成及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:SD大鼠随机分为对照组、低剂量Tβ4组(0.08μg/100g)和高剂量Tβ4组(0.8μg/100g),结扎大鼠左冠状动脉前降支,造成永久心肌梗死模型.对照组予PBS,低剂量组和高剂量组予Tβ4腹腔注射,1、5、10d在结扎线以下的部位取材,行碱性磷酸酶和VEGF免疫组织化学显色.结果:各组微血管面积、VEGF阳性细胞平均光密度(AOD)1d差异无统计学意义,给药组10d微血管密度高于对照组,高剂量组5、10d微血管密度高于低剂量组,高剂量组10dVEGF阳性细胞平均光密度高于对照组和低剂量组.结论:Tβ4能促进心肌梗死后微血管形成,增加心肌微血管密度,上调VEGF的表达,从而改善心功能.     

急性心肌梗死大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化

目的和方法 :探讨急性心肌梗死大鼠模型血清血管内皮生长因子 (VEGF)含量的变化及其意义。 88只雄性SD大鼠 ,其中 80只结扎左冠状动脉导致心肌梗死 ,8只开胸但不结扎冠状动脉作对照组。于心肌梗死后 1h ,3h ,6h ,12h ,2 4h和 2d ,3d ,5d ,7d ,14d分别从右心房抽取血样品 (n =8)。用敏感、特异的酶连接免疫吸附测定法测定血清样品中的VEGF含量。结果 :8只假手术对照鼠的血清VEGF浓度为 (6 6 99± 17 83)pg/mL。心肌梗死后 6h组血清VEGF水平达到 (12 5 6 8± 2 8 0 7)pg/mL(与对照组比P <0 0 1) ,结扎后 2 4h组达高峰 (2 40 6 1± 70 6 3pg/mL ,与对照组比P <0 0 1) ,然后逐渐下降 ,但术后 14d组仍显著高于对照组 (10 7 6 4±30 13pg/mL ,P <0 0 1)。结论 :心肌梗死大鼠血清VEGF水平持续显著升高 ,可能对心肌梗死后的血管生成起重要作用     

丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系

 目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA（Tan IIA）对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴（CoCl2）创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA 分别作用于低氧下人肝癌HepG2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法测定Tan IIA 对低氧下HepG2细胞增殖的抑制作用。不同浓度的Tan IIA 分别作用于低氧条件下HepG2细胞24 h和48 h后,Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态学变化并计算凋亡率。不同浓度的Tan IIA 作用于低氧条件下人肝癌HepG2细胞48 h后,Western blotting检测低氧诱导因子1α (HIF-1α)、血管内皮生长因子（VEGF）和野生型P53的蛋白表达情况。结果:低氧条件下Tan IIA以时间和剂量依赖方式抑制HepG2细胞的生长和增殖。Tan IIA 作用于低氧下的HepG2细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率呈时间、剂量依赖性的增加。Western blotting免疫印迹法显示常氧对照组的HIF-1α和VEGF表达较低,而低氧对照组的HIF-1α、VEGF蛋白表达较常氧组升高,低氧下随着Tan IIA 浓度的升高,HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显降低,野生型P53蛋白的表达随着Tan IIA 浓度的升高而升高。结论: 低氧条件下,Tan IIA能抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达,上调P53蛋白表达有关。     

低氧诱导因子1α高表达对急性心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的动员

背景:设想通过增加自体干细胞动员达到有效修复心脏缺血区的目的,因此找到可利用的特异而有效的干细胞动员剂成为关键所在。目的:观察心肌梗死时低氧诱导因子1α表达对骨髓间充质干细胞动员的影响。方法:将90只远交群SD大鼠结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,随机分为3组:低氧诱导因子1α反义寡核苷酸组给予低氧诱导因子1α反义寡核苷酸干预抑制大鼠梗死缺血组织的低氧诱导因子1α的表达,低氧诱导因子1α错义寡核苷酸组和对照组分别给予等量低氧诱导因子1α错义寡核苷酸和生理盐水。结果与结论:造模后30 h、7 d,对照组外周血骨髓间充质干细胞计数及血浆血管内皮生长因子水平与低氧诱导因子1α错义寡核苷酸组相近,但明显高于低氧诱导因子1α反义寡核苷酸组。造模后7 d,对照组心肌缺血组织低氧诱导因子1α蛋白、血管内皮生长因子蛋白及mRNA表达与低氧诱导因子1α错义寡核苷酸组相近,但明显高于低氧诱导因子1α反义寡核苷酸组。造模后7,14,28 d,对照组心肌缺血组织切片毛细血管密度分析与低氧诱导因子1α错义寡核苷酸组相近,明显高于低氧诱导因子1α反义寡核苷酸组。说明大鼠急性心肌梗死后高表达的低氧诱导因子1α与骨髓间充质干细胞动员、启动一系列心肌组织自我修复过程有因果关系。     

HIF-1α介导了间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是否介导间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外活力、凋亡以及侵袭的影响。方法:采用体外转染方法将特异性针对HIF-1α的siRNA导入A549细胞,在间歇低氧条件下培养后通过real-time PCR和Western blot法检测HIF-1α及其下游Bcl-2、Bax、P53、P21、VEGF的mRNA和蛋白表达;通过MTT法和流式细胞术分别检测A549细胞的活力、凋亡及细胞周期;通过Transwell小室检测A549细胞的侵袭能力。结果:未转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧空白对照组(IHC组)、间歇低氧空载体对照组(IHE组)及间歇低氧阴性对照组(IHN组)]经间歇低氧干预后的HIF-1α、Bcl-2及VEGF表达均明显高于常氧对照组(RA组),Bax及P21表达均明显低于RA组(P0.05),而转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧siRNA组(IHS组)]较IHC组、IHE组及IHN组经间歇低氧干预后的HIF-1α、BCL-2及VEGF表达均明显下调,Bax及P21表达较均明显上调(P0.05);所有间歇低氧组A549细胞的P53表达均较RA组升高(P0.05),但各间歇低氧组之间无显著性差异。IHC组、IHE组及IHN组A549细胞经间歇低氧干预后较RA组的细胞活力增强,凋亡率下降,侵袭力增强(P0.05),而IHS组A549细胞经间歇低氧干预后细胞周期被阻滞于G1期,较未转染组的细胞活力下降,凋亡增加,侵袭能力下降(P0.05)。结论:间歇低氧可通过HIF-1α途径调控其下游基因表达进而促进A549细胞的活力和转移;通过RNA干扰技术造成HIF-1α基因沉默可以抑制间歇低氧引起的A549细胞生长和转移。     

单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏微血管损伤与肾间质纤维化的关系研究

目的:观察单侧输尿管梗阻(UUO)后小鼠肾脏管周毛细血管(PTC)损伤、继发低氧及肾组织纤维化的变化,进一步探讨管周毛细血管损伤和缺氧对肾间质纤维化的影响。方法:将48只雄性昆明小鼠随机分为UUO组和对照组,采用左侧输尿管结扎术复制UUO模型,于术后1、3、7、14 d分别处死2组小鼠取左肾。采用M asson染色评定肾间质损伤程度;免疫组织化学方法测定血小板反应蛋白-1(TSP-1)、低氧诱导因子-1α(H IF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达和PTC密度变化;免疫印迹检查VEGF蛋白表达的变化。结果:假手术组肾组织结构形态正常,无纤维化的表现。UUO术后第1 d TSP-1表达开始升高,第3-14 d时升高更加显著(P0.05);VEGF在第1 d表达升高,第3-14 d表达逐渐降低(P0.05);PTC密度随之逐渐下降,H IF-1α表达逐渐升高,肾间质面积逐渐扩大。相关分析显示,TSP-1与PTC密度呈负相关(r=-0.874),PTC密度与H IF-1α表达呈负相关(r=-0.930),VEGF表达与PTC密度呈正相关(r=0.745),PTC密度与肾纤维化面积呈负相关(r=-0.787),H IF-1α与肾纤维化面积呈正相关(r=0.835),均P0.01。结论:UUO模型小鼠TSP-1表达升高,VEGF表达下降,PTC损伤和组织缺氧加重,肾间质纤维化面积扩大;缺血和缺氧可能是UUO后肾组织病变发生发展的重要原因。     

一种改良的间歇性低氧细胞模型方法

 目的: 研制细胞氧舱,建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型并进行验证。方法: 定制细胞实验舱和空气模拟对照舱,根据氧分压-时间曲线设计间歇低氧模式。将人肺腺癌细胞A549随机分为正常对照(Con)组、间歇低氧6 h(6IH)组、间歇低氧9 h(9IH)组、空气模拟对照6 h(6AC)组、空气模拟对照9 h(9AC)组、持续低氧4 h(4SH)组、持续低氧6 h(6SH)组。暴露结束后光镜下观察细胞形态改变,real-time PCR、免疫组化法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白表达变化。结果: 该模型间歇低氧模式为5% O₂ 60 min-20% O₂ 30 min,6个循环。与Con组比较,6AC、9AC组为原本细胞形态,6IH、9IH和6SH组部分细胞出现突起、变圆,胞质中出现较多黑色颗粒,细胞边界模糊,而4SH组未见明显异常。与6IH组比较,9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05);6IH和9IH组HIF-1α的mRNA 和蛋白分别高于4SH和6SH组(P<0.05);6AC、9AC组与Con组比较差异不显著。结论: 5% O₂ 60 min-20% O₂ 30 min的间歇性低氧-复氧细胞模式能模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病理生理过程,是研究该疾病较理想的细胞模型。     

丁苯酞对缺氧缺糖条件下血管内皮细胞VEGF和HIF-1α表达的影响

目的: 探讨丁苯酞(NBP)保护缺氧缺糖(OGD)细胞损伤的机制。方法: 对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)予以OGD损伤,MTT法检测细胞活性;Hoechst 33342染色检测细胞核形态;免疫荧光法观察血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达,IPP软件分析荧光强度,进行定量分析;Western blotting检测加以验证。结果: NBP在0.01- 10 μmol/L浓度之间剂量依赖性减少了OGD导致的细胞活性下降和细胞核形态改变。NBP促进了OGD后HUVECs内VEGF和HIF-1α的表达,均高于OGD组,荧光定量分析差异显著。两者表达的高峰分别为OGD后6 h和8 h。结论: NBP可以促进内皮细胞在缺氧缺糖条件下HIF-1α的表达,从而引起下游VEGF的表达增多,最终保护内皮细胞免受缺氧缺糖损伤。     

慢性间歇性低氧对大鼠肾脏氧化应激损伤及HIF-1α表达的影响

目的:观察慢性间歇性低氧(CIH)大鼠肾组织形态学及其氧化应激相关指标变化,探讨CIH的肾损害机制。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,CIH组2周和4周组(2IH和4IH)以及对照组2周和4周组(2C和4C),每组10只,采用化学比色法检测血清SOD活性,肾脏称重计算肾体比,HE染色、PAS染色和Masson染色法观察肾组织病理结构变化,real-time PCR法检测肾组织HIF-1α、Cu/Zn SOD和Mn SOD mRNA的表达变化。结果:(1)各组大鼠平均肾重、体重和肾体比差异无统计学意义(均P0.05);IH组大鼠肾组织存在病理损害,HE和PAS染色示肾小球系膜和基底膜轻度增生,肾小管上皮水肿,4周组损害较明显;Masson染色IH和对照组均未见纤维化改变。(2)化学比色法示IH组血清SOD活性低于相应对照组(均P0.05),4IH组下降更明显(P0.05)。Cu/Zn SOD和Mn SOD mRNA组间比较差异有统计学意义(均P0.05);Cu/Zn SOD mRNA表现为IH组低于相应对照组(均P0.05),4IH组与2IH组比较差异无统计学意义;Mn SOD mRNA的表达4IH组较4C组下调,差异有统计学意义(P0.05),4IH组明显高于2IH组(P0.05),2IH和2C组比较差异无统计学意义(P0.05)。IH组肾组织HIF-1α的mRNA表达均高于相应对照组(均P0.05),4IH组高于2IH组(P0.05)。结论:CIH可诱导大鼠肾小球、小管结构异常,但4周CIH尚未引起肾组织纤维化改变。CIH可通过上调HIF-1αmRNA和下调Cu/Zn SOD、Mn SOD mRNA的表达,参与氧化应激损伤过程。     

The HIF-2alpha/VEGF pathway activation in cutaneous capillary haemangiomas

AIM: To investigate the pathogenesis of capillary haemangiomas, a common form of vascular malformation. METHODS: Twenty-five cutaneous capillary haemangiomas, excised from patients under 14 years of age, were studied immunohistochemically for endothelial cells, the angiogenic factors thymidine phosphorylase (TP) and vascular endothelial growth factor (VEGF), the proliferation index Ki-67, and the hypoxia inducible factors-1alpha (HIF-1alpha) and -2alpha (HIF-2alpha). RESULTS: Endothelial-lined channels reacted strongly with CD31 in all cases, clearly definining capillary spaces. Between 5 and 20% of the endothelial cells were Ki-67 positive, indicating an intense proliferative activity; more importantly, they consistently expressed VEGF and HIF-2alpha, and in many cases TP, but failed to react with HIF-1alpha. CONCLUSION: It is suggested that the activation of the HIF-2alpha pathway and the consequent overexpression of VEGF by the endothelial cells are involved in the pathogenesis of cutaneous capillary haemangiomas.