一株引起病毒性脑炎的柯萨奇B3病毒的生物学特性分析

目的通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理。方法将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采用微滴法检测病毒在不同时间、不同细胞中的病毒感染滴度;将一定量KMA103-09病毒注射乳鼠和成鼠脑内,观察病毒的致病性,并检查鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r、TNF、IL-17A、IL-10含量。结果该病毒株在6种细胞上皆能适应生长,并产生明显的细胞病变效应。病毒在Hela细胞上生长繁殖最快,42h时细胞全部发生病变,感染性滴度达8.625lgCCID50/ml;在MRC-5细胞上病毒的感染性滴度最低,120h才全部发生病变,感染性滴度为5.50lgCCID50/ml。该病毒对一日龄乳鼠致死并在脑、肺和心脏等组织产生病理改变,实验乳鼠血清IL-6、IL-10、TNF含量分别为4.71pg/ml、21.08pg/ml和36.79pg/ml,与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,其余4种皆无表达。该病毒对成鼠不致病,脑、肺、心脏病理检查无异常。结论 KMA103-09病毒在Hela细胞生长适应性良好,对乳鼠致病而对成鼠不致病。     

Balb/C乳鼠实验性感染汉坦病毒与脑神经细胞凋亡

目的　应用原位末端标记技术对Balb/C乳鼠脑组织的凋亡细胞进行检测 ,并对脑组织中汉坦病毒 (HV)感染和细胞凋亡的关系进行初步探讨。方法　HV陈株经腹腔接种Balb/C乳鼠 ,感染后分别在 1、2、4、8、10和 14d取脑组织 ,4%多聚甲醛固定 ,常规制备 5 μm石蜡切片 ,应用原位杂交对乳鼠石蜡切片的病毒定位 ,用原位末端标记显示乳鼠脑组织中存在着凋亡细胞。结果　原位杂交检测结果显示 ,病毒主要累及大脑皮层、海马等部位 ,阳性信号主要分布于胞浆、紧靠核膜 ,原位末端标记的阳性细胞存在于神经细胞核内 ,在感染乳鼠脑组织中许多细胞被原位末端标记 ,呈胞核深染 ,弥漫分布于皮层、海马、白质等部位。结论　乳鼠脑组织中存在着凋亡细胞 ,该病变可能与病毒感染有关     

动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定

目的N2A细胞和BHK-21细胞用于我国动物狂犬病流行街毒株的分离培养。方法狂犬病发病动物脑组织悬液首先脑内接种乳鼠,再采取Nonclon Delta Tube内置盖玻片法从鼠脑中进行病毒分离培养,脑组织悬液接种细胞后96h,利用直接荧光抗体实验检测盖玻片上的病毒感染细胞,判定病毒是否在细胞上增殖;通过测定不同毒株细胞培养上清中的病毒滴度对病毒进行鉴定。结果22份狂犬病病犬、猪和牛的脑组织接种乳鼠后均获得了鼠脑分离毒,将鼠脑毒接种N2A细胞分离获得了22株病毒,接种BHK-21细胞却只分离获得20株病毒。不同病毒株第三代细胞培养上清中的病毒滴度从10-1TCID50/100μL到10-3.6TCID50/100μL。结论N2A细胞对狂犬病病毒街毒株的敏感性高于BHK-21细胞,且不同的病毒株对细胞的适应能力不同。实验分离获得的病毒细胞适应株丰富了我国狂犬病病毒毒种资源,为进一步研究不同病毒分离株的抗原性差异奠定基础。     

口蹄疫病毒致乳鼠心肌炎的动物模型

目的 为建立乳鼠感染FMDV心肌炎的动物模型。方法 本研究以3日龄乳鼠为研究对象,经病毒接种,饲养观察,乳鼠心肌H.E染色,乳鼠心肌透射电镜显微观察和乳鼠心肌FMDV特异性目的基因扩增。结果 结果显示接种FMDV后36 h内乳鼠频临死亡,H.E染色和透射电镜观察可见乳鼠心肌明显炎症细胞浸润,心肌纤维部分溶解,感染组乳鼠心肌中检测到FMDV特有的VP1基因。结论 建立了乳鼠感染FMDV心肌炎的动物模型,为研究FMDV致幼龄偶蹄动物心肌炎的分子机制建立了动物模型。     

Balb／C乳鼠实验性感染汉坦病毒与脑神经

目的 应用原位末端标记技术对Ｂａｌｂ／Ｃ乳鼠脑组织的凋亡细胞进行检测，并对脑组织中汉坦病毒（ＨＶ）感染和细胞凋亡的关系进行初步探讨。方法 ＨＶ陈株经腹腔接种Ｂａｌｂ／Ｃ乳鼠，感染后分别在１、２、４、８、１０和１４ｄ取脑组织，４％多聚甲醛固定，常规制备５μｍ石蜡切片，应用原位杂交对乳鼠石蜡切片的病毒定位，用原位末端标记显示乳鼠脑组织中存在着凋亡细胞。结果 原位杂交检测结果显示，病毒主要累及大脑皮层、     

1966年新疆巴楚县出血热病研究报告 Ⅱ.新疆巴楚出血热病原学的初步研究

1966年4~5月从新疆巴楚县阿克沙克马拉勒地区的出血热病人急性期血液和死亡病例的肝、脾、肾及淋巴结等脏器组织标本和牧场中采集的亚洲璃眼蜱成虫标本接种4日龄以内的新生小鼠(乳鼠),结果共分离出14株病毒。标本经脑内和腹腔联合接种乳鼠后6~10天之间出现典型症状,包括:惊跳、弓背、痉挛、继之出现迟纯、软弱、平衡失调、侧卧、拒乳、皮肤苍白而死亡。在乳鼠中连续传代3次后,潜伏期缩短为5天,发病规律,可稳定传代。乳鼠脑组织中的病毒滴度可达6.78logLD50/0.01mL。新生金地鼠在接种急性期病人血液标本后可出现症状和死亡。新生大白鼠用从病人分离的病毒进行脑内和腹腔接种后出现典型症状并死亡。豚鼠在腹腔接种病人急性期血液标本后出现轻度症状。取其心血接种乳鼠后可使乳鼠发病。在有症状和无症状的豚鼠血清中均可测出较高滴度的补体结合抗体。1岁龄绵羊在皮下接种10%感染乳鼠脑悬液后仅出现轻度不适,但用此绵羊的血液接种乳鼠可使乳鼠发病死亡。绵羊的病毒血症至少可持续6天。通过绵羊的病毒在乳鼠中的潜伏期缩短为4天,滴度升高,10-6稀释度可使乳鼠全部死亡。病毒可通过蔡氏滤器EK滤板。可被低浓度甲醛灭活。1/10氯仿、20%乙醚在室...     

五种虫媒病毒生物学性状的研究

目的　对引进的 5种虫媒病毒 :马雅罗病毒 (MAY) ,西门利克病毒 (SFV) ,墨累谷脑炎病毒 (MVE) ,伊利乌斯病毒 (ILH)和布尼安姆韦拉病毒 (BUN)进行生物学性状的研究。方法　乳鼠脑内接种传代及致病性观察 ;制作电镜标本进行病毒的形态学观察 ;病毒的理化试验 (核酸型、耐乙醚、耐酸试验 ) ;进行病毒的空斑试验和血凝试验 ;采用 5种虫媒病毒 (MAY ,SFV ,MVE ,ILH ,BUN)及CHIK ,WN ,JBE病毒抗血清与 5种虫媒病毒血凝素进行交叉血凝抑制试验 ;结果与结论　发现 5种病毒具有典型虫媒病毒的生物学特征。脑内接种后 ,乳鼠死亡时间及症状不同。病毒均为有包膜的球形RNA病毒 ,在细胞浆内增殖 ,对酸和乙醚敏感。 5种病毒形成不同大小的空斑和具有不同的血凝特性 ,同组内的病毒可以发生交叉血凝抑制反应。     

蝙蝠呼肠孤病毒感染BHK-21和Vero-E6细胞形态发生的比较观察

目的通过对蝙蝠呼肠孤病毒在BHK-21和Vero-E6细胞形态发生的比较研究,筛选出该病毒的最佳宿主细胞。方法将感染呼肠孤病毒XJV株的BHK-21和Vero-E6细胞用戊二醛、锇酸固定,制成超薄切片,用透射电镜观察。同时测定病毒滴度。结果XJV在2种细胞中的适应程度不同,XJV更适于在BHK-21细胞中增殖。XJV在2种细胞中的形态发生不同,在BHK-21细胞中形成的包涵体呈典型的晶格状排列,在Vero-E6细胞中形成的包涵体呈杂乱的球状。XJV用BHK-21和Vero-E6细胞育传5代,病毒滴度分别为105.5TCID50/ml和104.5TCID50/ml。结论BHK-21细胞是蝙蝠呼肠孤病毒XJV株的最佳宿主细胞。     

人巨细胞病毒先天感染小鼠大脑皮质的病理学特征

目的　研究人巨细胞病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ） 经小鼠胎盘垂直传播致胎鼠大脑皮质感染的病理学特征。方法　在８ ～１２周龄 Ｂ Ａ Ｌ Ｂｃ 雌雄小鼠腹腔内接种 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 后, 交配, 待孕鼠妊娠第７ 天及临产时处死动物; 无菌将雌胎鼠双侧大脑皮质取出, 应用常规组织切片 Ｈ Ｅ 染色、脑压印片地高辛标记 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 寡核苷酸探针原位杂交及病毒分离的方法进行检测分析。结果　组织学检查发现, 雌、胎鼠脑微血管扩张充血, 脑实质有中性粒细胞和单核细胞浸润, 部分神经细胞已变性坏死。在胎鼠脑组织切片上, 还可见到软化灶及受染神经细胞核内 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 特征性嗜碱性包涵体。原位杂交显示, 病毒核酸存在于待产胎鼠脑神经细胞及胶质细胞核内及胞浆内。在胎鼠脑组织悬液中分离出该病毒。结论　 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 能通过 Ｂ Ａ Ｌ Ｂｃ 小鼠胎盘致发育中子鼠大脑皮质感染, 发生侵袭性脑膜脑炎性病理改变。     

乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的　建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法　根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果　PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论　本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。     

Immunofluorescence performed in brain of mice, infected with the CVS strain of the rabies virus, in different stages of decomposition]

The efficiency of the fluorescent antibody (FA) test in detecting rabies virus antigen in decomposed specimens was evaluated in simulated conditions of the safety test recommended for the assessment of residual virus in inactivated rabies vaccines. The CVS-infected mice were submitted to different treatments combining time and temperature in order to cause different stages of carcass decomposition and, the FA test was carried out sequentially at pre-determined time intervals. For the materials stored at 25 degrees C, greater difficulties for prompt recognition of the inclusion bodies were found after 12-18h, whilst the specimens maintained at 4 degrees C, the inclusions were easily visualized for up to 48h. Brain smears of carcasses kept at -20 degrees C were suitable for adequate identification after 720 h of storage. In carcasses that had been maintained at 25 degrees C for 10 h with additional storage at 4 or -20 degrees C, rabies antigenicity could not be detected, respectively after 10 and 24 h, due to tissue decomposition. The authors recommend that the FA test, when applied as an additional tool for the control of the safety test of inactivated rabies vaccine using mice, care must be taken in order to avoid the use of decomposed materials.     

狂犬病毒适应鸡胚细胞及其生物学性状的研究

初步成功地培植出一株适应原代鸡胚细胞,具有与国内目前生产地鼠肾细胞疫苗的aG株固定毒相仿的免疫原性的组织培养疫苗株—武汉(Wuhan)34株。此株在小鼠和豚鼠血清中和抗体反应方面,以及防御狂犬病感染方面均能与aG株比较。     

Immunization against rabies with plant-derived antigen

We previously demonstrated that recombinant plant virus particles containing a chimeric peptide representing two rabies virus epitopes stimulate virus neutralizing antibody synthesis in immunized mice. We show here that mice immunized intraperitoneally or orally (by gastric intubation or by feeding on virus-infected spinach leaves) with engineered plant virus particles containing rabies antigen mount a local and systemic immune response. After the third dose of antigen, given intraperitoneally, 40% of the mice were protected against challenge infection with a lethal dose of rabies virus. Oral administration of the antigen stimulated serum IgG and IgA synthesis and ameliorated the clinical signs caused by intranasal infection with an attenuated rabies virus strain.     

1例长潜伏期狂犬病病例的实验检测研究

本文报道１ 例临床狂犬病病例， 男性２２ 岁， 发病３ 天出现三恐症状， 继而四肢撑于床上， 口中流涎， 呼吸循环衰竭死亡。追述病史， ８ 岁时曾被犬咬伤左臂， 留有疤痕， 当时未作处理， 以后未密切接触过犬或与犬类有关的食品和物品。为确诊长潜伏期的狂犬病， 采取一系列实验研究， 采集死者脑海马回， 应用单克隆抗体 （ Ｍｃ Ａｂ） 作酶联免疫反应和免疫荧光检测病毒抗原， 仅几小时即检测到病毒抗原， 达到快速诊断。为确证检测结果， 用细胞培养和动物接种分离病毒，获得病毒株， 并进一步鉴定。从而为长达１４ 年潜伏期的狂犬病病例找到了病原， 对防病措施的落实提供了依据。     

人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的生物学鉴定及其小鼠体内中和活性测定

目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显示A12表达产物与感染CVS的鼠脑细胞有强的荧光反应。小鼠中和试验结果表明,A12ScFv样品组小鼠有9只存活,而对照组小鼠全部死亡。A12在729倍稀释时能100%保护小鼠抵抗致死量狂犬病毒的脑内攻击。结论A12对狂犬病毒具有一定的中和活性,有可能被用于暴露后狂犬病的预防。     

猪狂犬病的确证

目的 了解广东省某一猪场发生狂犬病猪只的感染状况。方法 采集疑似狂犬病发病猪的大脑、小脑以及海马回,制成切片,用姬姆沙染色,在光学显微镜下检测狂犬病病毒包涵体。用抗狂犬病病毒N蛋白荧光抗体染色,在荧光显微镜下检测特异荧光。用蛋白酶K处理病料,抽提核酸,以狂犬病病毒N基因特异引物作RT-PCR检测狂犬病病毒特异性核酸。将病料接种小白鼠接毒,观察小鼠的发病。结果 病理学切片检测病猪脑海马神经细胞中有包涵体;脑组织印片经特异性抗狂犬病病毒核蛋白(NP)单克隆抗体免疫荧光染色后,荧光显微镜下可见大量的针尖状绿色荧光颗粒;狂犬病病毒NP特异性目的基因RT-PCR得到与预期结果大小一致的扩增产物;小白鼠接毒试验,3日龄以内乳鼠接毒后出现特异性的神经症状。结论 该猪场病死猪检测狂犬病病毒感染阳性,确定猪群中发生狂犬病。     

Monoclonal antibodies against rabies virus produced by somatic cell hybridization: detection of antigenic variants.

Somatic cell hybrids (hybridomas) between mouse myeloma cells and spleen cells derived from BALB/c mice immunized with inactivated rabies vaccine were found to produce antibodies to rabies virus. Monoclonal antibodies with different specificities were obtained either from the mass culture directly after fusion or from clones derived from a single-cell cloning procedure. Several strains of fixed or street rabies virus were analyzed by virus neutralization procedures which demonstrated differences in their antigenic composition. Hybridoma antibodies were able to protect experimental animals from lethal rabies virus infection.     

狂犬病毒抗原刺激小鼠的细胞免疫反应试验

为了研究狂犬病毒抗原刺激机体所产生的细胞介导免疫反应的抗病毒作用 ,我们利用小鼠进行试验。注射环磷酰胺 (Cy)的小鼠再接种狂犬疫苗和稀释液 ,然后将其脾细胞转移到 2 4小时前脑内接种 1或 10 0 0LD50 狂犬病毒标准攻击毒(CVS)的同系小鼠 ,结果表明小鼠的脾细胞不仅可以转递抗狂犬病毒攻击的能力 ,而且可以转移“早期死亡”现象 ;另一方面 ,注射Cy的小鼠接种狂犬病毒抗原 ,两周后用CVS攻击 ,结果发现接种狂犬病毒抗原的小鼠有一定程度的保护作用 ,但中和试验结果阐明这些小鼠体内没有产生中和抗体 ,从而说明狂犬病毒抗原刺激所产生的细胞免疫作用有一定抗狂犬病毒攻击的能力。     

Effects of aerosolized rabies virus exposure on bats and mice

Between 1956 and 1977, 4 human cases of rabies virus infection were attributed to aerosolized rabies virus; however, little work has been done to address this topic since the late 1960s. Employing modern nebulization equipment coupled with serologic, cell culture, and molecular technology, we have continued the investigation into aerosolized rabies virus as a potential route of transmission. Laboratory mice and 2 species of bats were exposed, through aerosol, to 3 variants of rabies virus. All bats survived exposure to aerosolized rabies virus and produced rabies neutralizing antibody. Several mice died of rabies as a result of aerosol exposure. Antibody response was followed for 6 months before animals were given an intramuscular challenge of rabies virus. Poor protection from challenge was afforded in bats, despite the presence of neutralizing antibodies.     

In vitro inactivation of the rabies virus by ascorbic acid.

OBJECTIVE: The current recommended inactivating agent for the rabies virus, beta propiolactone (BPL) is very expensive and potentially carcinogenic. There is a need to evaluate alternative chemicals, which will inactivate the virus without affecting its antigenicity. In this study the effect of ascorbic acid on the infectivity of the rabies virus has been investigated. METHOD: Vero cell grown fixed rabies virus CVS strain was treated with 0.1 mg/ml, 0.5 mg/ml and 1mg/ml final concentrations of ascorbic acid and 5 microg/ml of copper sulfate and kept at 4 degrees C along with untreated virus material. Each aliquot was titrated after various intervals for viral infectivity using both mice inoculation and titration in vero cells. The antigenicity of the virus material was determined by antibody induction in mice and modified NIH tests in parallel with virus material inactivated with a 1:4000 concentration of BPL. RESULTS: An optimal concentration of 0.5 mg/ml of ascorbic acid and 5 microg/ml of copper sulfate completely inactivated the virus after 72 hours. The inactivated virus retained good antigenicity and potency value, which was comparable with using BPL. CONCLUSION: These findings suggest that ascorbic acid can be used as an inactivating agent for fixed rabies virus grown in cell culture particularly for the preparation of diagnostic reagents. Further studies are required to evaluate its effect on the cell associated virus, probable therapeutic potential and feasibility of replacing BPL in production of inactivated rabies vaccine.